免疫細胞的分離技術(shù)

免疫細胞的別離2024/11/71.免疫細胞1、概念直接參與免疫應答及與免疫應答相關(guān)的所有細胞。2、分類＊單核吞噬細胞系統(tǒng)：單核細胞/巨噬細胞 樹突狀細胞〔DCs)＊淋巴細胞系統(tǒng)：T淋巴細胞〔Th/Tc) B淋巴細胞NK細胞＊粒細胞系統(tǒng):中性粒細胞 噬酸性粒細胞 噬堿性粒細胞2024/11/72.免疫細胞的別離人外周血單個核細胞的別離淋巴細胞的別離免疫細胞亞群的別離2024/11/73.細胞別離原理細胞的大小和比重細胞外表標志細胞黏附于各種物質(zhì)外表的特性2024/11/74.一、人外周血單個核細胞的別離

——Ficoll分層離心法人外周血單個核細胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC):Monocyte、Lymphocyte。原理：血液中各細胞成分的比重不同，經(jīng)離心沉淀，即可在分層液與血漿之間獲得比較純的單個核細胞，其中淋巴細胞占90%以上。

2024/11/75.不同細胞密度不同

紅細胞和多形核白細胞1.092

單個核細胞1.070

分層液1.077

2024/11/76.一、人外周血單個核細胞的別離

——Ficoll分層離心法

Ficoll分層液：蔗糖聚合物+泛影葡胺，密度1.077+0.001g/L。2024/11/77.二、淋巴細胞的別離

尼龍棉柱法E花環(huán)別離法補體細胞毒法免疫熒光法

2024/11/78.二、淋巴細胞的別離

——尼龍棉柱法原理：B細胞和單核細胞具有易黏附的特性，將淋巴細胞懸液加至尼龍纖維柱上，37℃作用1~2h后，洗脫的為非黏附性的T細胞。PBMC尼龍纖維棉柱B細胞單核細胞T細胞2024/11/79.二、淋巴細胞的別離

—E花環(huán)別離法〔純化T細胞〕原理＊成熟T細胞外表有綿羊紅細胞受體〔E受體，CD2分子〕，可和SRBC形成E花環(huán)，B細胞那么無。＊E花環(huán)比重大，沉淀，經(jīng)別離液別離來。＊E花環(huán)周圍的綿羊RBC可用低滲法除去。.三、免疫細胞亞群的別離免疫磁珠別離法流式細胞術(shù)2024/11/711.三、免疫細胞亞群的別離

—免疫磁珠別離法原理：將抗體交聯(lián)于磁珠外表形成免疫磁珠〔Immunomagneticbead，IMB〕，免疫磁珠直接或者間接偶聯(lián)在抗體上，從而與細胞相連，在高強度、梯度磁場中到達細胞磁性別離的目的。2024/11/712免疫細胞的別離.三、免疫細胞亞群的別離

—免疫磁珠別離法1.直接法：抗細胞外表分子抗體+磁性微球免疫磁珠+細胞懸液與免疫磁珠結(jié)合的細胞2.間接法：第二抗體+磁性微粒第一抗體+細胞特定細胞...免疫磁珠法分選裝置.三、免疫細胞亞群的別離

—流式細胞術(shù)〔FlowCytometry，F(xiàn)CM〕FCM將免疫熒光技術(shù)應用于流式細胞儀，對單個細胞的外表標志〔抗原或受體〕進行快速、精確的分析和自動檢測，并將不同類型的細胞分選收集。原理：細胞經(jīng)熒光染色后，通過高速流動系統(tǒng)，細胞排成單行，逐個流經(jīng)檢測區(qū)。當細胞從流動室噴嘴處流出時，超聲震動液流，使液流段裂成一連串的均勻小滴，每個小滴內(nèi)最多含一個細胞，細胞經(jīng)激光束照射產(chǎn)生熒光和散射光，由光電倍增管接收，轉(zhuǎn)換成脈沖信號，數(shù)據(jù)經(jīng)電腦處理，分辨細胞類型。2024/11/717.流式細胞儀工作原理2024/11/718.流式細胞儀2024/11/719.免疫細胞的別離人外周血單個核細胞的別離——Fi