核醫(yī)學(xué)體外放射分析

體外放射分析

分類：爭性：放射免疫分析RIA競爭性蛋白結(jié)合分析CPBA放射受體分析RRA放射酶分析放射微生物分析非競爭性：免疫放射分析IRMA放射免疫分析RIA添加標(biāo)題原理：P62添加標(biāo)題競爭機(jī)制：添加標(biāo)題Ag(不定量)添加標(biāo)題+Ab（有限量）添加標(biāo)題固定量*Ag添加標(biāo)題免疫結(jié)合反應(yīng)形成免疫復(fù)合物添加標(biāo)題定量分析的數(shù)學(xué)基礎(chǔ)：免疫結(jié)合反應(yīng)服從質(zhì)量作用定律P+Q===PQ[PQ]K=---------[Q]K值大表示親和力大由質(zhì)量作用定律推導(dǎo)的數(shù)學(xué)模型

[Q0]1[Q0]B2—B（1+------+--------）+-------==0[P0]K[P0][P0]

[PQ]B==----------×100%P0=Ag+*AgPQ=*Ag—Ab[P0]Q0=Ab的初始含量當(dāng)*Ag為固定量時，P0為自變量（實(shí)際為Ag）P0與復(fù)合物B呈一定的函數(shù)關(guān)系放免反應(yīng)的定量依據(jù)：劑量反應(yīng)曲線或叫標(biāo)準(zhǔn)曲線劑量反應(yīng)曲線的含義以已知的標(biāo)準(zhǔn)品為橫坐標(biāo)，以放射性復(fù)合物測定值的某種表達(dá)式做縱坐標(biāo)，繪制劑量---反應(yīng)曲線P64圖4—1P74圖4—13單擊此處添加大標(biāo)題內(nèi)容曲線的斜率是關(guān)鍵因素，斜率不同精密度不同（P64圖4—1）斜率=tgα（代表曲線或直線的傾斜度）影響斜率的常見因素有以下幾點(diǎn)：Ab親和力：K大，斜率也大Ag用量：Ag少，斜率大Ag的免疫活性：活性強(qiáng)，斜率大*Ag的比活度和放化純度：↑→↑Ab用量：B=33—50%斜率最大。反應(yīng)條件和溫度（見后）免疫反應(yīng)條件要求：PH：大多PH=7.5離子強(qiáng)度：常用0.05—0.1M反應(yīng)溫度：實(shí)驗(yàn)確定RIA方法學(xué)1、操作步驟：P1942、RIA的基本試劑標(biāo)準(zhǔn)抗原基本要求：

①標(biāo)準(zhǔn)抗原與待測物免疫性必須一致

②必須高純度：不純不能制備抗體，不純標(biāo)記物放化純度達(dá)不到要求

③標(biāo)準(zhǔn)抗原的量必須準(zhǔn)確：（用于標(biāo)準(zhǔn)曲線）

④具有良好的穩(wěn)定性（能保證較長時間不改變性能）標(biāo)準(zhǔn)抗原的用途：①制備抗體②制備*Ag③標(biāo)準(zhǔn)曲線抗血清檢查抗血清的指標(biāo)：親和常數(shù)KP192交叉反應(yīng)率P193滴度記抗原Ag*基本要求：免疫活性與待測物及標(biāo)準(zhǔn)品一致適度的比活度：太高、化學(xué)量少、不具競爭性，太低統(tǒng)計誤差大。足夠高的放化純度（>95%）01免疫活性檢驗(yàn)：復(fù)合物放射性最大結(jié)合百分率（B%）=-----------------------------------×100%參與反應(yīng)標(biāo)記抗原放射性02分離方法單擊此處添加正文，文字是您思想的提煉，為了演示發(fā)布的良好效果，請言簡意賅地闡述您的觀點(diǎn)。您的內(nèi)容已經(jīng)簡明扼要，字字珠璣，但信息卻千絲萬縷、錯綜復(fù)雜，需要用更多的文字來表述；但請您盡可能提煉思想的精髓，否則容易造成觀者的閱讀壓力，適得其反。03非特異分離法：吸附法（活性炭）層析電泳法過濾法磁性分離法沉淀法（聚乙二醇，硫酸胺等）異分離法：雙抗法固相分離法葡萄球菌A蛋白（SPA）補(bǔ)充：對分離方法的基本要求使結(jié)合部分與游離部分盡可能完全分開分離的成份便于放射性測量分離效果不受外界干擾因素的影響操作簡便、分離迅速、重復(fù)性好與游離標(biāo)記物的非特異結(jié)合盡可能小試劑來源廣泛，經(jīng)濟(jì)價廉單擊此處添加大標(biāo)題內(nèi)容RIA加樣方法平衡法：三種反應(yīng)物同時加樣優(yōu)：簡便易掌握重現(xiàn)性好競爭反應(yīng)較典型缺：靈敏度不高順序加樣法：Ag+Ab溫育后再加*Ag優(yōu)：標(biāo)準(zhǔn)曲線起始段斜率高、靈敏度高缺：曲線工作波度范圍窄、重現(xiàn)性差一天法：（特殊情況下使用）IA數(shù)據(jù)處理的數(shù)學(xué)模型（補(bǔ)充概念）后頁樣品采集與保存應(yīng)注意的幾個問題用原樣品、新鮮樣品、減少存放、最好不純化、濃縮萃取、減少變異盡快做實(shí)驗(yàn)，避免反復(fù)凍融可能少用添加劑等，抗凝劑也少用。放射免疫法的數(shù)學(xué)模型及處理常用符號及英文縮寫的含意：NSB：非特異結(jié)合B0%：B0管的放射性測量值與加入總放之比。BQC：質(zhì)控探樣品測量值CPMBN：NSB管的樣品測量值CPMF：游離物質(zhì)樣品測量值CPMB：結(jié)合的沉淀物樣品測量值CPMED50：指B/B0為50%時對應(yīng)劑量值。ED25、ED70指B/B0為25%、70%所對應(yīng)的劑量。針對劑量反應(yīng)的實(shí)際曲線模型：如多項(xiàng)式函數(shù)，光滑樣條函數(shù)，線性內(nèi)插模型直線化模型：（logit—log模型）常用：將標(biāo)準(zhǔn)曲線橫坐標(biāo)各點(diǎn)取對數(shù)lgX而縱坐標(biāo)用logitBx/B0,logitBx/B0=lgBx/B0—Bx該直線法標(biāo)準(zhǔn)曲線的零點(diǎn)丟失（零無對數(shù)）造成靈敏度降低線模型分類3、logistic模型：只能用于平衡反應(yīng)兩點(diǎn)改進(jìn)

a：橫坐標(biāo)不取對數(shù)而用Db：不做NSB，靠計算機(jī)計算擬合扣除NSB。

a—d模型：Y=------------------+dx1+(------)bc

有四個參數(shù)：a=B0（也稱四參數(shù)logistic模型）c=ED50b=logit—log直線斜率d=NSB單擊此處添加大標(biāo)題內(nèi)容五參logistic數(shù)模型：a—bY=---------------+dx[1+(----)b]Ec引入了一個不對稱因子E。E計算機(jī)能求出?？捎糜诜瞧胶夥磻?yīng)系統(tǒng)5、四參數(shù)單位點(diǎn)質(zhì)量作用定律模式：按質(zhì)量作用定律導(dǎo)出的模式優(yōu)點(diǎn)：①質(zhì)量作用定律，穩(wěn)健回歸擬合；

②適于平衡和非平衡系統(tǒng)；

③個別壞點(diǎn)對曲線影響小。模型的選擇（擬合優(yōu)度法來選）問題：一組數(shù)據(jù)可用多種模型去處理，如何選用？①

線性擬合用最小二乘法，選殘差平方和最小的模型。②

非線性擬合用百分比偏差DEV%DEV%=（X’—X）/X100% DEV%<10%即可使用。放射免疫的質(zhì)量控制RIA的誤差來源：試劑（變性，核素脫落、貯存不當(dāng)免疫活性↙等）樣品（放置不當(dāng)，存放條件不同，制備、采集的差異等）操作（加樣不準(zhǔn)，反應(yīng)條件改變、分離不統(tǒng)一等）儀器與設(shè)備（不統(tǒng)一，差異等）測量（統(tǒng)計漲落）數(shù)據(jù)處理：擬合不當(dāng)、方法不一致等。誤差分類系統(tǒng)誤差：原因是確定因素如試劑變性，稱量不準(zhǔn)，批號不同。隨機(jī)誤差：原因?qū)倥既?，難以確定，測量結(jié)果忽高忽低呈雙向圍某數(shù)值波動。過失誤差：過失造成的誤差，結(jié)果失真無規(guī)律性可查。質(zhì)控目的：找出誤差原因、采取必要措施，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信性。質(zhì)控分類實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)控常用的質(zhì)控指標(biāo)：靈敏度、特異性、精密度、偏差、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性、臨床有效性。1、靈敏度：10個B0管均值減去2SD后在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的劑量值。2、特異性：用交叉反應(yīng)率來表示3、精密度：同一樣品多份測量結(jié)果變異的大小。

SD可用SD或CV=-------×100%X4、偏差：偏離真值的程度測定值—真值 偏差b=--------------------×100%

真值單擊此處添加大標(biāo)題內(nèi)容準(zhǔn)確度：測量值與真值的符合程度，也叫回收率回收管測量值—對照管測量值回收率=-----------------------------------------×100%回收管內(nèi)加入的已知量反應(yīng)準(zhǔn)確度評價指標(biāo)在空白樣品中加入已知劑量的待測物得測定值—空白值樣品回收率=-----------------------×100%已知值

回收率應(yīng)在90~110%之間測定值—真值偏差=-----------------------------×100%真值偏差允許在±10%之內(nèi)。

注意：測定值應(yīng)取高、中、低三個劑量區(qū)的樣品分別求出高、中低三個劑量的回收率和偏差。穩(wěn)定性：指批間重復(fù)性。對曲線穩(wěn)定性考核的常用指標(biāo)有：ED25、ED50、ED75、B0%、NSB%等。不同批實(shí)驗(yàn)中這些值應(yīng)大體接近。臨床有效性：陽性率與臨床診斷的符合率。與正常值的確定有關(guān)。上述幾種指標(biāo)間的關(guān)系；靶圖。若某點(diǎn)的CV%大于10%應(yīng)做為壞點(diǎn)剔除。反應(yīng)精密度的幾個指標(biāo)（1、2、3）：1、平均批變異系數(shù)（ABCV）：指一批實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的CV平均值：

∑SDABCV%=------------------------------×100%∑X2、反應(yīng)誤差關(guān)系（RER）：指一批實(shí)驗(yàn)各復(fù)管的SD與其X之間的函數(shù)關(guān)系。SD為CPM的誤差。它是反應(yīng)實(shí)驗(yàn)復(fù)管平行性好壞的綜合指標(biāo)，不是劑量的誤差。RER的計算公式見P85，4—23RER≤0.04優(yōu)秀0.12<RER>0.04<0良好

RER>0.12差單擊此處可添加副標(biāo)題精密度圖（P、P圖）：以劑量lgD為橫坐標(biāo)，以各劑量復(fù)管的SD為縱坐標(biāo)做的圖。P、P圖步驟：立劑量反應(yīng)曲線算各樣品的放射性測量值X和誤差SDR放射性的X和SDR通過劑量反應(yīng)曲線查得劑量D并計算D的SD即SD0，或換為SD0/D=CV%LgD為橫坐標(biāo)：以CVD或SDD為縱坐標(biāo)做圖。單擊此處添加大標(biāo)題內(nèi)容P．P圖的用途定方法的靈敏度定劑量反應(yīng)曲線的有效工作范圍價RIA的最佳工作條件IA的質(zhì)控評價斷剔除壞點(diǎn)健全性試驗(yàn)：指用標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線與用不同釋稀度病人樣品繪制的曲線應(yīng)平行。影響健全性的因素：標(biāo)準(zhǔn)品與待測物性質(zhì)不同反應(yīng)系統(tǒng)有干擾反應(yīng)待測物在標(biāo)準(zhǔn)品確定的環(huán)境中不適宜。youden圖：在多批實(shí)驗(yàn)中每一實(shí)驗(yàn)測量的首部和尾部放置二個相同濃度的質(zhì)控樣品，將其測量值求X±SD。在直角坐標(biāo)中，做圖如下：QC—H首 QC—MQC—LQC首 首樣品 2SDABD尾樣品QC尾A區(qū)：準(zhǔn)確區(qū)B區(qū)：正偏差區(qū)C區(qū)：負(fù)偏差區(qū)D區(qū)：不精密區(qū)意義：一種簡便，直觀、有效地評價精密度和偏倚的方法。Cusum圖：把每批實(shí)驗(yàn)的QC測定值與靶值相減后做圖。評價：小斜線連續(xù)上升或下降提示有正、負(fù)偏差小斜線的斜率反映偏差的大小斜線兩端點(diǎn)落差的絕對值超出QC的3SD說明有偏差出現(xiàn)，超出5S