精液檢驗(yàn)（臨床檢驗(yàn)技術(shù)課件）

精液一般性狀檢查01外觀正常：剛排出時(shí)呈灰色或乳白色，不透明膠凍狀；自行液化后為灰白色，半透明液體紅色血性：生殖系統(tǒng)炎癥、結(jié)核、結(jié)石或腫瘤黃色膿性：精囊炎或前列腺炎02酸堿度（pH）應(yīng)在精液液化后，且在60分鐘內(nèi)完成正常精液為弱堿性，pH值7.2～8.0堿性的精囊腺分泌液和酸性前列腺分泌液的平衡pH＜7.0并有精液量減少：輸精管道阻塞、射精管和精囊腺缺如或發(fā)育不良pH＞8.0：急性前列腺炎、精囊炎或附睪炎03量一次排精量1.5~6ml，與射精頻度呈負(fù)相關(guān)WHO推薦樣本容器稱(chēng)重法檢測(cè)量03液化時(shí)間精液液化時(shí)間：精液排出后，由膠凍狀轉(zhuǎn)變?yōu)榱鲃?dòng)狀液體所需的時(shí)間精囊腺凝固酶前列腺蛋白水解酶剛排出的精液03液化時(shí)間1、測(cè)定方法接收標(biāo)本，觀察→37℃孵育→每5min觀察（1）肉眼觀察法：由膠凍狀變?yōu)榫鶆蛄鲃?dòng)狀液體，停止計(jì)時(shí)（2）滴管法：用口徑較細(xì)的滴管吸取精液，若很容易被吸取且未見(jiàn)精液呈條索狀，停止計(jì)時(shí)03液化時(shí)間2、質(zhì)量保證（1）排精后立即準(zhǔn)確記錄排精時(shí)間，盡快送檢（2）觀察應(yīng)保持在37℃恒溫環(huán)境中，每5min觀察1次（3）正常精液可以含有少量不液化的膠凍狀顆粒，無(wú)臨床意義（4）60min仍未液化的，報(bào)告液化時(shí)間大于60min03液化時(shí)間3、方法學(xué)評(píng)價(jià)肉眼觀察法操作簡(jiǎn)單、實(shí)用，臨床常用，不足之處是結(jié)果判斷缺乏客觀標(biāo)準(zhǔn)，受經(jīng)驗(yàn)和主觀因素影響。滴管法操作簡(jiǎn)單、實(shí)用，臨床常用，結(jié)果準(zhǔn)確性和重復(fù)性好于肉眼觀察法。03液化時(shí)間3、方法學(xué)評(píng)價(jià)正常：精液離體后5~10min開(kāi)始液化，30min內(nèi)完全液化。液化時(shí)間＜60min04液化時(shí)間3、方法學(xué)評(píng)價(jià)正常：精液離體后5~10min開(kāi)始液化，30min內(nèi)完全液化。液化時(shí)間＜60min05黏稠度精液黏稠度：指精液完全液化后的黏度測(cè)定方法：（1）滴管法：用口徑約1.5mm的塑料吸管緩慢地將液化精液吸入，觀察在重心作用下精液形成黏液絲的長(zhǎng)度。（更容易觀察結(jié)果）（2）玻棒法：用玻璃棒插入液化精液，觀察提起后形成黏液絲的長(zhǎng)度。05黏稠度正常：拉絲長(zhǎng)度＜2cm，呈水樣滴管法測(cè)定時(shí)，形成不連續(xù)的小滴顯微鏡檢驗(yàn)取混勻、液化的精液涂片，觀察有無(wú)精子及是否運(yùn)動(dòng)與運(yùn)動(dòng)狀態(tài)等。若未見(jiàn)精子，將標(biāo)本3000r/min離心15min，取沉淀物重新檢查。仍未見(jiàn)精子，則不必繼續(xù)檢查，可報(bào)告離心后未發(fā)現(xiàn)精子。前言顯微鏡檢查方法01精子活動(dòng)力指精子運(yùn)動(dòng)的能力，反映精子質(zhì)量WHO將精子活動(dòng)力分為3級(jí)：PR、NP、IM分級(jí)特點(diǎn)運(yùn)動(dòng)活躍型（PR）精子運(yùn)動(dòng)活躍、線(xiàn)性運(yùn)動(dòng)或者在較大的范圍內(nèi)運(yùn)動(dòng)（不考慮運(yùn)動(dòng)的速度）非運(yùn)動(dòng)活躍型(NP)精子運(yùn)動(dòng)但不活躍，如精子在較小的范圍內(nèi)運(yùn)動(dòng)，精子頭部輕微移位或盡有鞭毛擺動(dòng)完全不動(dòng)型（IM）精子完全不動(dòng)01精子活動(dòng)力1、測(cè)定方法取混勻液化精液1滴加于載玻片上，覆蓋蓋玻片→低倍鏡觀察→高倍鏡觀察并計(jì)數(shù)。01精子活動(dòng)力2、質(zhì)量保證（1）標(biāo)本：立即送檢，注意保溫

液化后立即檢查

最好在30min內(nèi)，不能超過(guò)1h（2）器材：采用22mm×22mm蓋玻片

推薦使用帶有網(wǎng)線(xiàn)和網(wǎng)格的目鏡01精子活動(dòng)力（6）高倍鏡計(jì)數(shù)：建議計(jì)數(shù)2次至少在5個(gè)不同區(qū)域計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)總數(shù)≥200個(gè)（3）溫度：標(biāo)本37℃條件下孵育

使用預(yù)熱的載玻片和蓋玻片使用帶加熱37℃載物臺(tái)的顯微鏡（4）混勻：充分混勻標(biāo)本（5）制片：制成厚度約20μm的檢查涂片

避免產(chǎn)生氣泡01精子活動(dòng)力3、方法學(xué)評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià)顯微鏡檢查臨床常用，但人為影響因素大，質(zhì)量控制難度大，誤差較大，重復(fù)性較差連續(xù)攝影法WHO推薦方法，直觀、準(zhǔn)確度高，但需要高精度設(shè)備精子質(zhì)量分析儀操作簡(jiǎn)便，但影響因素多，需要專(zhuān)用設(shè)備01精子活動(dòng)力3、方法學(xué)評(píng)價(jià)正常：總活力精子(PR＋NP)≥40%，

前向運(yùn)動(dòng)精子(PR)≥32%減低：精索靜脈曲張、靜脈血回流不暢；

生殖系統(tǒng)非特異性感染、使用某些藥物等02精子活動(dòng)率指在顯微鏡下直接觀察活動(dòng)精子所占精子總數(shù)的百分率正常：排精60min內(nèi)，為80~90%，至少>60%減低：精索靜脈曲張、生殖系統(tǒng)感染、理化因素、免疫因素等精子活動(dòng)率<60%，可使生育力下降03精子存活率即精子活率，主要用于評(píng)估精子膜的完整程度（1）原理：活精子細(xì)胞膜完整，加入染料后不著色

死精子細(xì)胞膜缺損，染料可進(jìn)入精子（2）操作步驟：染色→加蓋玻片→靜置→低倍鏡觀察→高倍鏡觀察1、伊紅染色法03精子存活率精子頭部呈白色或淡粉紅色，則為活精子精子頭部呈紅色或暗粉紅色，則為死精子如果染色僅限于頸部區(qū)域，剩余的頭部未染色，則可認(rèn)為是“頸部細(xì)胞膜不全”如果難以辨識(shí)淺染的頭部，可使用苯胺黑以增加背景的對(duì)比度1、伊紅染色法03精子存活率原理：活精子膜完整，將精子加入低滲溶液，水分進(jìn)入精子，精子尾部腫脹/彎曲操作步驟：取低滲膨脹液1ml，37℃預(yù)溫5min→加液化精液0.1ml，混勻→37℃孵育30min→取精液涂片、加蓋玻片→相差顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)2、低滲腫脹精子活率試驗(yàn)03精子存活率（1）原理：活精子膜完整，將精子加入低滲溶液，水分進(jìn)入精子，精子尾部腫脹/彎曲（2）操作步驟：取低滲膨脹液1ml，37℃預(yù)溫5min→加液化精液0.1ml，混勻→37℃孵育30min→取精液涂片、加蓋玻片→相差顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)2、低滲腫脹精子活率試驗(yàn)03精子存活率（3）結(jié)果判斷：精子尾部未膨脹為死精子精子尾部膨脹為活精子2、低滲腫脹精子活率試驗(yàn)03精子存活率（1）每個(gè)標(biāo)本至少要計(jì)數(shù)200個(gè)精子，同時(shí)檢測(cè)兩次（2）液化后盡快評(píng)估，排精后1h內(nèi)完成3、質(zhì)量保證03精子存活率4、方法學(xué)評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià)染色法操作簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性較好，但背景對(duì)比度不佳，淡染精子分辨不清低滲腫脹精子活率試驗(yàn)設(shè)備復(fù)雜，試驗(yàn)結(jié)果與精子功能試驗(yàn)有良好的相關(guān)性03精子存活率4、方法學(xué)評(píng)價(jià)參考區(qū)間：精子存活率≥58%（低滲腫脹試驗(yàn)）精子存活率降低是男性不育的重要因素之一，正常有生殖能力的男性活精子率一般≥75%。精子存活率＜50%，即可診斷為死精子癥04精子凝集活動(dòng)精子以不同方式，如頭對(duì)頭、尾對(duì)尾或混合型相互粘附在一起的現(xiàn)象等級(jí)凝集情況Ⅰ零散凝集，每個(gè)凝集<10個(gè)精子，有很多自由活動(dòng)的精子Ⅱ中等凝集，每個(gè)凝集10~50個(gè)精子，存在自由活動(dòng)的精子Ⅲ大量凝集，每個(gè)凝集>50個(gè)精子，仍有一些自由活動(dòng)的精子Ⅳ全部凝集，所有精子聚集，數(shù)個(gè)凝集又粘附在一起頭對(duì)頭尾對(duì)尾尾端對(duì)尾端混合型糾結(jié)型04精子凝集參考區(qū)間：無(wú)凝集~Ⅰ級(jí)存在凝集并不能充分證實(shí)不育的原因系免疫性，但暗示有抗精子抗體的存在，應(yīng)進(jìn)一步檢查以明確診斷嚴(yán)重的精子凝集影響精子活力和密度的評(píng)估05精子計(jì)數(shù)精子濃度：?jiǎn)挝惑w積內(nèi)的精子數(shù)量單次排出的精子絕對(duì)數(shù)量：精子濃度×本次精液量1、顯微鏡計(jì)數(shù)法（1）原理：改良牛鮑計(jì)數(shù)板（2）精液稀釋液：NaHCO3（破壞精液粘稠性）、甲醛（殺死和固定精子）（3）操作步驟：精液稀釋液0.38ml→加液化精液20μl，混勻→充池，靜置→高倍鏡計(jì)數(shù)05精子計(jì)數(shù)2、質(zhì)量保證（1）檢測(cè)標(biāo)本必須完全液化，吸取精液量必須準(zhǔn)確（2）直接涂片未發(fā)現(xiàn)精子，離心后兩次檢測(cè)均無(wú)精子，則報(bào)告“無(wú)精子”（3）計(jì)數(shù)時(shí)以頭部為基準(zhǔn)，應(yīng)計(jì)數(shù)完整結(jié)構(gòu)的精子，在10~15min內(nèi)計(jì)數(shù)完，每次至少計(jì)數(shù)200個(gè)05精子計(jì)數(shù)3、方法學(xué)評(píng)價(jià)顯微鏡計(jì)數(shù)法：檢測(cè)簡(jiǎn)便，成本低，但誤差較大計(jì)算機(jī)輔助精液分析：快速，重復(fù)性好，但易受其他物質(zhì)的干擾精子質(zhì)量分析儀：簡(jiǎn)單快速，重復(fù)性較好，但易受光電性能的影響05精子計(jì)數(shù)4、參考區(qū)間精子密度≥15X106/ml；精子總數(shù)≥39X106精子/1次射精5、臨床意義精子總數(shù)是衡量睪丸生成精子的能力及男性生殖道是否通暢的指標(biāo)精子密度持續(xù)＜15X106/ml或精子總數(shù)＜39X106精子/1次射精為少精子癥精液多次檢查無(wú)精子時(shí)為無(wú)精子癥（連續(xù)檢查3次，離心后沉淀物中仍無(wú)精子）05精子計(jì)數(shù)精子濃度減低或無(wú)精子癥的臨床意義06精子形態(tài)1、正常精子形態(tài)06精子形態(tài)1、正常精子形態(tài)06精子形態(tài)2、異常精子形態(tài)06精子形態(tài)06精子形態(tài)3、精子形態(tài)檢查方法：濕片法：精子高倍計(jì)數(shù)后，再觀察精子形態(tài)涂片染色法;WHO推薦使用巴氏染色法

涂片→干燥→固定、染色→油鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)精子形態(tài)06精子形態(tài)3、精子形態(tài)檢查方法：正常男性精液中正常形態(tài)精子≥30%；畸形精子＜20%?；尉釉龆嘁?jiàn)于感染、外傷、高溫、放射線(xiàn)、酒精中毒、藥物、工業(yè)廢物、環(huán)境污染、激素失調(diào)或遺傳因素等導(dǎo)致睪丸異常、精索靜脈曲張等。07非精子細(xì)胞非精子細(xì)胞指精液中的上皮細(xì)胞、白細(xì)胞和不成熟的生精細(xì)胞等。檢查法：WHO推薦采用正甲苯胺藍(lán)過(guò)氧化酶染色法，白細(xì)胞呈陽(yáng)性，生精細(xì)胞呈陰性。正常不成熟的生精細(xì)胞＜1%，白細(xì)胞＜5/HP，偶見(jiàn)紅細(xì)胞。若睪丸受損，精液中不成熟的生精細(xì)胞增多；精液中紅細(xì)胞與白細(xì)胞增多見(jiàn)于生殖系統(tǒng)炎癥、結(jié)核等，若白細(xì)胞＞1.0×109/L稱(chēng)為白細(xì)胞精子癥。精液化學(xué)與免疫學(xué)檢查01化學(xué)檢查枸櫞酸、鋅、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、酸性磷酸酶→前列腺功能果糖、前列腺素→精囊功能游離左旋肉毒堿、甘油磷酸膽堿、中性α-葡萄糖苷酶→附睪功能01化學(xué)檢查1、果糖精液中的果糖來(lái)自精囊液，由精囊所分泌。它是精子活動(dòng)的能源。若精液果糖濃度減低將使精子活動(dòng)力減弱，影響受精率。在先天性精囊缺如、逆行射精等時(shí)無(wú)果糖；在精囊腺炎和雄激素分泌不足時(shí)果糖減低。［參考值］吲哚比色法：≥13μmol/一次射精01化學(xué)檢查2、酶類(lèi)（1）酸性磷酸酶（acidphosphatase，ACP）精漿中的酸性磷酸酶幾乎全部來(lái)自前列腺，屬前列腺酸性磷酸酶。前列腺炎時(shí)ACP活性減低，可使精子活動(dòng)減弱，受精率下降；前列腺癌和前列腺肥大時(shí)，ACP活性可增高。［參考值］磷酸苯二鈉比色法：48.8~208.6U/ml01化學(xué)檢查2、酶類(lèi)（2）乳酸脫氫酶-X（LD-X），是存在于精母細(xì)胞、精子細(xì)胞和精子線(xiàn)粒體中的特異酶，具有組織特異性，對(duì)精子生成、代謝、獲能、活動(dòng)能力和受精過(guò)程均有重要作用。

LD-X活性與精子濃度特別是活精子濃度呈良好的正相關(guān)，活性減低可致生育力下降。［參考值］聚丙烯酰胺電泳法：相對(duì)活性≥42.6%01化學(xué)檢查2、酶類(lèi)（3）精子頂體酶存在于精子項(xiàng)體內(nèi)，是一種蛋白水解酶，在受精過(guò)程中起重要作用?；钚詼p低將致生育力下降，常作為病人精子受精能力和診斷男性不育癥的參考指標(biāo)。［參考值］BAWW-ADH法（X±s）36.72±21.43U/L01化學(xué)檢查3、鋅精液中含多種微量元素，其中鋅能促進(jìn)生殖器官發(fā)育，維持正常生精功能，提高精子濃度和活力。精液鋅減低可致生殖器官發(fā)育不良、精子生成減少、死精癥等。嚴(yán)重缺陷鋅可致不育癥。精漿鋅測(cè)定可作為評(píng)價(jià)男性生育功能和診治不育癥的參考指標(biāo)之一。［參考值］Zn（X±s）24μmol/一次射精檢測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)方法及參考區(qū)間臨床意義酸性磷酸酶（現(xiàn)臨床上被PSA代替）磷酸苯二鈉比色法：48.8~208.6U/ml減低：見(jiàn)于前列腺炎，可使精子活動(dòng)減弱，受精率下降增高：見(jiàn)于前列腺癌和前列腺肥大乳酸脫氫酶-X聚丙烯酰胺電泳法：相對(duì)活性≥42.6%；絕對(duì)活性（1430±940）U/L減低：見(jiàn)于少精液癥或無(wú)精液癥中性α-葡萄糖苷酶比色法：≥20mU/1次射精其活性與精子密度、精子活力呈正相關(guān)，有助于鑒別輸精管阻塞、睪丸生精障礙所致的無(wú)精子癥精子頂體精氨酸酰胺酶比色法：48.2~217.7μU/106精子其活性與精子計(jì)數(shù)、精子頂體完整率呈正相關(guān)?；钚詼p低可導(dǎo)致不育枸櫞酸紫外比色法：50nmol/1次射精吲哚比色法：≥13μmol/1次射精與睪酮水平相關(guān)，可以評(píng)價(jià)雄激素分泌狀態(tài)。顯著減少見(jiàn)于前列腺炎果糖間苯二酚比色法：9.11~17.67mmol/L吲哚比色法：≥13μm