免疫學(xué)技術(shù) 淋巴細(xì)胞數(shù)量及功能檢測(cè)（臨床免疫檢驗(yàn)）

淋巴細(xì)胞數(shù)量及功能檢測(cè)前言外周血白細(xì)胞主要包括中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。正常情況下機(jī)體各類淋巴細(xì)胞的數(shù)量和功能保持相對(duì)穩(wěn)定，當(dāng)人體感染病原微生物或發(fā)生免疫性疾病時(shí)，均可引起淋巴細(xì)胞數(shù)量和功能變化。臨床上常根據(jù)不同淋巴細(xì)胞的表面標(biāo)志即分化群（CD）進(jìn)行淋巴細(xì)胞及其亞群的數(shù)量檢測(cè)。淋巴細(xì)胞功能測(cè)定可分為體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)。通過(guò)對(duì)機(jī)體淋巴細(xì)胞及其亞群的數(shù)量和功能測(cè)定，可為疾病的診斷、治療、療效評(píng)估等提供重要依據(jù)淋巴細(xì)胞數(shù)量及功能檢測(cè)許多疾病或生物及其他理化因素均可引起淋巴細(xì)胞數(shù)量和功能變化數(shù)量檢測(cè)功能測(cè)定根據(jù)淋巴細(xì)胞及其亞群的表面標(biāo)志體內(nèi)試驗(yàn)體外試驗(yàn)間接熒光免疫法T細(xì)胞數(shù)量檢測(cè)針對(duì)T細(xì)胞數(shù)量的檢測(cè)主要依據(jù)T細(xì)胞及其亞群細(xì)胞表面標(biāo)志如CD3、CD4及CD8等分子間接熒光免疫法免疫組織化學(xué)法流式細(xì)胞術(shù)酶標(biāo)法（ABC法、APAAP法）金標(biāo)法（即IGSS法）T細(xì)胞功能檢測(cè)淋巴細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)T細(xì)胞增殖試驗(yàn)CTL介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)抗原特異性T細(xì)胞定量檢測(cè)體內(nèi)試驗(yàn)形態(tài)學(xué)法3H-TdR摻入法MTT比色法51Cr釋放法MHC-抗原肽四聚體技術(shù)結(jié)核菌素試驗(yàn)PHA皮膚試驗(yàn)流式細(xì)胞術(shù)T細(xì)胞增殖試驗(yàn)——形態(tài)學(xué)法PBMCPHA5％CO2

37℃培養(yǎng)72h細(xì)胞涂片染色顯微鏡檢查未轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)轉(zhuǎn)化率（％）＝轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)的淋巴細(xì)胞總數(shù)100％×T細(xì)胞增殖試驗(yàn)——3H-TdR摻入法SI＝試驗(yàn)孔cpm均值對(duì)照孔cpm均值外周血T細(xì)胞PHA發(fā)生增殖MTT含藍(lán)色甲臜顆粒的T細(xì)胞有機(jī)溶劑測(cè)吸光度（A）值計(jì)算SI判定細(xì)胞增殖結(jié)果T細(xì)胞增殖試驗(yàn)——MTT法SI＝試驗(yàn)孔A均值對(duì)照孔A均值(SI≧2具有意義)淋巴細(xì)胞（CTL）+含51Cr的腫瘤細(xì)胞腫瘤細(xì)胞破壞51Cr釋放測(cè)定γ射線CTL介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)——51Cr釋放法51Cr特異性釋放率＝試驗(yàn)孔cmp均值最大釋放孔cmp均值-自發(fā)釋放孔cmp均值-自發(fā)釋放孔cmp均值100％×根據(jù)T細(xì)胞活化的雙識(shí)別原理，用生物工程技術(shù)將MHC分子在體外組裝，并結(jié)合抗原表位肽，形成抗原肽-MHC分子復(fù)合物，結(jié)合流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)抗原特異性T細(xì)胞抗原特異性T細(xì)胞定量檢測(cè)MHC-抗原肽四聚體技術(shù)用刺激劑體外激活淋巴細(xì)胞用蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑阻止細(xì)胞因子分泌到細(xì)胞外，細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子向高爾基體積聚，用流式細(xì)胞儀測(cè)定淋巴細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞因子種類確定Th1/Th2細(xì)胞百分率淋巴細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)Th1和Th2分泌的細(xì)胞因子分泌的細(xì)胞因子Th1Th2IL-2++-IFN-γ++-TNF-β++++IL-3+++GM-CSF+++TNF-α-++IL-4-++IL-5-++IL-6-++IL-10-++原理體內(nèi)試驗(yàn)12結(jié)核菌素試驗(yàn)PHA皮膚試驗(yàn)B細(xì)胞數(shù)量及功能檢測(cè)數(shù)量檢測(cè)1.mIg的檢測(cè)：免疫熒光、免疫組化2.CD分子的檢測(cè)：檢測(cè)CD19、CD20、CD21、CD22、CD5等3.IgGFc受體的檢測(cè)：EA花環(huán)試驗(yàn)4.小鼠紅細(xì)胞受體的檢測(cè)：花環(huán)試驗(yàn)功能檢測(cè)1.B細(xì)胞增殖試驗(yàn)：3H-TdR摻入法、MTT2.B細(xì)胞抗體產(chǎn)生能力檢測(cè)：溶血空斑試驗(yàn)、ELISPOT經(jīng)典溶血空斑試驗(yàn)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)可在單細(xì)胞水平上檢測(cè)B產(chǎn)生抗體和T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子NK細(xì)胞數(shù)量及功能檢測(cè)NK細(xì)胞功能檢測(cè)方法根據(jù)NK細(xì)胞表面CD分子進(jìn)行檢測(cè)檢測(cè)CD3、CD56、CD16等，計(jì)數(shù)CD3-CD56+CD16+的細(xì)胞數(shù)即為NK細(xì)胞數(shù)形態(tài)學(xué)法常采用臺(tái)盼藍(lán)染色酶釋法LDH釋放法熒光法時(shí)間分辨熒光免疫分析法放射性核素釋放法51Cr釋放法125I-UdR釋放法流式細(xì)胞術(shù)采用碘化丙啶（PI）染色法數(shù)量檢測(cè)010203B細(xì)胞數(shù)量及功能檢測(cè)NK細(xì)胞數(shù)量及功能檢測(cè)

小結(jié)T細(xì)胞數(shù)量及功能檢測(cè)思考題C細(xì)胞免疫是機(jī)體重要的免疫反應(yīng)之一，但細(xì)胞免疫反應(yīng)過(guò)程比較復(fù)雜，參與反應(yīng)的成分眾多，影響因素