3.1 重組DNA技術(shù)的基本工具 課件

重慶市優(yōu)質(zhì)課程資源重組DNA技術(shù)的基本工具產(chǎn)生人抗狂犬病病毒抗體的轉(zhuǎn)基因煙草乳汁中含人α-抗胰蛋白酶的轉(zhuǎn)基因羊轉(zhuǎn)基因酵母菌合成乙肝疫苗轉(zhuǎn)基因抗蟲棉與普通棉花基因工程的概念

基因工程又叫基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)。指按照人們的愿望，進行嚴(yán)格的設(shè)計，并通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品?；蚬こ虇栴}探討：蘇云金芽孢桿菌Bt毒蛋白普通棉花抗蟲棉D(zhuǎn)NA重組技術(shù)的基本工具三種基本工具剪刀針線運輸車限制性核酸內(nèi)切酶DNA連接酶運載體細(xì)菌細(xì)胞限制性核酸內(nèi)切酶病毒注入DNA分子限制性核酸內(nèi)切酶切割入侵的DNA切割病毒DNA病毒細(xì)菌通過限制酶來特異性降解入侵的的噬菌體DNA，把它們切割成片段；但細(xì)菌自身DNA沒事，因為限制酶有特定的識別序列和切割位點，細(xì)菌會把自身DNA上相應(yīng)的限制酶識別位點修飾保護起來，不受降解。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，從而達(dá)到保護自身的目的。限制性核酸內(nèi)切酶-“分子手術(shù)刀”EcoRIAAGTTCCTTAAGCTTAAGGAATTC識別GAATTC序列，并在G和A之間切開限制酶在切斷DNA時，可在切口處帶有幾個伸出的核苷酸，他們之間堿基正好互補配對，因此稱這些片斷為黏性末端。限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶SmaⅠCCCGGGGGGCCC識別GGGCCC序列，并在G和C之間切開限制酶從識別序列的中心軸線處切開時，切開的DNA兩條單鏈的切口，是平整的，這樣的切口叫平末端。CCCGGGGGGCCC限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶“分子手術(shù)刀”—限制性核酸內(nèi)切酶識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的

斷開。特點：專一性磷酸二酯鍵限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶“分子手術(shù)刀”—限制性核酸內(nèi)切酶結(jié)果黏性末端平末端限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶限制酶所識別的序列有什么特點？EcoRⅠSmaⅠGAATTCCTTAAGCCCGGGGGGCCCHindⅢAAGCTTTTCGAABamHⅠGGATCCCCTAGG呈現(xiàn)堿基互補對稱，無論是6個堿基還是4個堿基，都可以找到一條中心軸線，中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的，稱為回文序列。限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶同一種限制酶來切割兩種不同的DNA并混合會怎樣呢？2要獲得目的基因必須要切幾個切口？可產(chǎn)生幾個末端？1答：要切兩個切口，產(chǎn)生四個黏性(平)末端答：切口相同，可產(chǎn)生重組DNA動腦想一想CGGCCGTATAATATGCGCGCTAATCGTATAATATGCTATAEcoRIEcoRICGGCCGTTAAAATTGCGCGCTAATCGTTAAAATTGCTATACGGCCGTTAAAATTGCTATA可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來DNA連接酶把切下來的DNA片段拼接成新的DNA，即將脫氧核糖和磷酸連接起來催化形成磷酸二酯鍵DNA連接酶的作用DNA連接酶DNA連接酶DNA連接酶DNA連接酶類型來源功能相同點差別E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶大腸桿菌T4噬菌體恢復(fù)磷酸二酯鍵只能連接黏性末端能連接黏性末端和平末端(效率較低)20:23“分子縫合針”—DNA連接酶DNA聚合酶DNA連接酶區(qū)別1區(qū)別2相同點1)只能將單個核苷酸連接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵形成磷酸二酯鍵1)在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵2)以一條DNA鏈為模板，將單個核苷酸通過磷酸二酯鍵連接成一條互補的DNA鏈2)能將DNA雙鏈上的兩個缺口同時連接起來，不需要模板DNA聚合酶和DNA連接酶的比較具備什么樣條件才能充當(dāng)“分子運輸車”呢？基因的運載體基因的運載體20:23ⅠⅡⅢⅣⅤ細(xì)胞解體死亡條件一：對受體細(xì)胞要無害基因的運載體基因的運載體20:23ⅠⅡⅢⅣⅤ沒有找到結(jié)合的部位條件二：有一至多個限制酶切點,便于攜帶目的基因基因的運載體基因的運載體20:23ⅠⅡⅢⅣⅤ運載體被受體細(xì)胞消滅條件三：能在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存

在，并能復(fù)制表達(dá)?；虻倪\載體基因的運載體20:23ⅠⅡⅢⅣⅤ能夠在含青霉素的培養(yǎng)基上生長并最終被篩選保留下來含青霉素的培養(yǎng)基條件四：有某些標(biāo)記基因，便于篩選?；虻倪\載體基因的運載體20:231.對受體細(xì)胞無害2.有1至多個限制酶切點3.能在受體細(xì)胞中復(fù)制、表達(dá)4.有某些標(biāo)記基因，便于篩選載體需要的條件大腸桿菌結(jié)構(gòu)模式圖DNA質(zhì)粒載體結(jié)構(gòu)模式圖目的基因插入位點氨芐青霉素抗性基因復(fù)制原點一個至多個限制酶切割位點有標(biāo)記基因可以復(fù)制對受體細(xì)胞無害真正被用作運載體的質(zhì)粒，都是進行過人工改造的?；虻倪\載體基因的運載體基因的運載體基因的運載體除了質(zhì)粒外，還有λ噬菌體衍生物或某些動植物病毒λ噬菌體動物病毒植物病毒

載體基因工程的工具限制酶主要存在于原核生物中具有專一性(識別序列)切開DNA分子的磷酸二酯鍵DNA連接酶