DB15T+3699-2024馬鈴薯種質(zhì)資源離體培養(yǎng)及保存技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20CCSICS65.020.20CCSB23內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)DB15/T3699—2024馬鈴薯種質(zhì)資源離體培養(yǎng)及保存技術(shù)規(guī)程Technicalcodeofpracticefortissuecultureandpreservationofpotatogermplasmresources2024-10-252024-10-252024-11-25內(nèi)蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局發(fā)布前 言本文按GB/T1.1—2020《準(zhǔn)工導(dǎo)則 第部分標(biāo)化件結(jié)和起規(guī)》規(guī)起草。本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧廳提出。本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(SAM/TC20)歸口。本文件起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院。本文件主要起草人：曹春梅、逯春杏、王曉嬌、許飛、韓藝、張翠玲、胡嘉鑫。馬鈴薯種質(zhì)資源離體培養(yǎng)及保存技術(shù)規(guī)程范圍本文件適用于馬鈴薯種質(zhì)資源離體培養(yǎng)及保存。（NY/T401脫毒馬鈴薯種薯（苗）病毒檢測技術(shù)規(guī)程下列術(shù)語和定義適用于本文件。下列術(shù)語和定義適用于本文件。莖尖剝離apicalstripping應(yīng)用莖尖分生組織培養(yǎng)技術(shù)，選取馬鈴薯芽頂端部分（直徑0.1mm～0.3mm），帶有1～2個葉原基的莖尖分生組織，移植到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。離體培養(yǎng)isolatedculture4莖尖剝離（脫毒）材料的選取PSTVd尖作為材料。5脫毒與培養(yǎng)收獲脫毒材料，將塊莖放置在溫室或培養(yǎng)箱內(nèi)進行催芽處理。待芽萌發(fā)2cm時，在溫度35℃~37℃進行高溫鈍化處理15d，光照/黑暗12h，光照強度2000Lx。選用MS+0.5mg/L萘乙酸+0.1mg/L6-MS+0.2mg/L5.8~6.012125min~30min24h取材2cm2cm左清洗30min。消毒753035%105min~10min解剖鏡下，用無菌解剖針或手術(shù)刀剝?nèi)в?解剖鏡下，用無菌解剖針或手術(shù)刀剝?nèi)в?~2個葉原基的莖尖分生組織，剝離后的莖尖分生組織直徑0.1mm~0.3mm，接種到滅菌的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)瓶或試管外壁寫好編號和日期。莖尖培養(yǎng)條件光照培養(yǎng)14h，保持24℃，光照強度1500Lx~2000Lx，暗培養(yǎng)10h，保持18℃。MS3~4（系病毒檢測按照NY/T401對擴繁苗進行PVX、PVY、PVS、PVA、PVM、PLRV病毒檢測。6試管苗保存MS+20g/L甘露醇，pH值5.8~6.0。22℃~24℃、光照強度2000Lx~3000Lx16h/d2w8℃~1012h/d2000Lx~3000Lx采用紫外線、熏蒸法，每隔10d對培養(yǎng)室進行一次消毒，及時取出污染的試管苗并進行高溫滅菌處理。7試管薯誘導(dǎo)誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方MS+100g/L蔗糖+4.5g/L瓊脂粉+1g/L活性炭，pH值為5.8~6.0。誘導(dǎo)條件將正常培養(yǎng)4w的試管苗置于溫度17℃~18℃、光照時間8h/