DB4117T 320-2021 動物病原微生物實驗室菌種保存和活化技術指南

4117I本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定上蔡縣農業(yè)綜合行政執(zhí)法大隊、許昌市建安區(qū)1動物病原微生物實驗室菌種保存和活化技術指南本文件規(guī)定了動物病原微生物實驗室常用的菌種保藏和活化的術語和定義、要求、標準菌株GB/T27025檢測和校準實驗室能力的GB/T27476.1檢測實驗室安全第1部SN/T2660食品微生物實驗室菌種保藏人工采集的、經(jīng)鑒定具有保藏價值的含有動物病原微生物的體液、組織、排泄物、分泌物、污染菌種活化就是將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的培養(yǎng)24基本要求4.2針對動物病原微生物菌種特性選擇適宜的保存方法，宜采用兩種或兩種以上的方法保存，以保持4.3動物病原微生物菌種保存所使用的器皿要求清潔4.4根據(jù)動物病原微生物菌種保存需要選擇適合培養(yǎng)基。4.5動物病原微生物菌種保存過程中應4.7動物病原微生物菌種保存期間，要定期檢查菌種存放設施的溫度和濕度、菌株有無污染、綿塞有4.8動物病原微生物菌種保存工作不能對周圍環(huán)境造成污染和危害。5.1獲取途徑5.1.1標準菌種的獲取可通過國家級菌種5.1.2從上級機構下發(fā)的質控盲樣中分離出的菌株，被證明結果是正確的、且從考核機構獲得該菌種5.1.3從其他有效的，經(jīng)過資質認證的商5.2驗收5.3標準菌種保存3a)接種：以無菌操作將菌株純培養(yǎng)物接種到固體培養(yǎng)基（斜面）或液體培養(yǎng)基中，接種固體培b)培養(yǎng)：在所保存菌種的最適培養(yǎng)條件下將細胞培養(yǎng)至穩(wěn)定期或成熟期，并進行純度檢查。c)保存：培養(yǎng)好的菌種于4℃~6℃保存，需室溫保存的菌種在室溫（25℃)下保存。保存培每3-6個月移植一次。有特殊要求的按其規(guī)定移植。易保存于相對濕度為50%～70%的環(huán)a)灌入石蠟：將無菌的液體石蠟在無菌條件下注入剛培養(yǎng)好的新鮮培養(yǎng)斜面培養(yǎng)物上，液面高b)保存：注入液體石蠟的菌種斜面以直立狀態(tài)置低溫（4℃~6℃)干燥處保存，需室溫保存a)菌種準備：在所保存菌種的最適培養(yǎng)條件下將細胞采用斜面培養(yǎng)、液體培養(yǎng)等方式培養(yǎng)至穩(wěn)b)分裝：分裝菌液應在無菌條件下操作。采用較長的滴管，直接將菌液滴入安瓿管或凍存管底部，每管分裝量約0.1mL～0.2mL。若是球形安瓿管，裝量為半個球部。分4d)冷凍干燥：將預凍后的樣品安瓿瓶迅速置于已充分預冷的冷凍干燥機樣品艙內按照程序冷凍干燥。完畢后取出樣品管置于干燥器內，備用。冷凍干燥時e)安瓿管封口及真空檢驗：從干燥器中火焰將管拉細后將管口連接到與真空安瓿管泵相連的橡皮管上，打開真空泵，在真空下用噴射火焰對準管細頸部加熱熔封。熔封后的干燥管可采用f)保存：封口完全的冷凍干燥管保存于4℃~10℃。b)在無菌狀態(tài)下打開冷凍管，在所保存菌種的最適培養(yǎng)條件下降細胞培養(yǎng)至穩(wěn)定期或成熟期，進行純度檢查后，將菌種新鮮培養(yǎng)物加入到培養(yǎng)基中制成混懸液，無菌操作將混懸液轉入到d)菌種吸附于瓷珠上后，將多余的混懸液吸出；如使用商業(yè)化的細胞凍存管，此時應按照產品7.2.1定期移植法保存菌種取樣后直接接種于固體培養(yǎng)基或適量的液體培養(yǎng)基中進行7.2.3冷凍干燥法保存的菌種復蘇先用70%酒精棉擦拭57.2.4瓷珠保存法保存菌株在無菌條件下打開冷凍管，用無菌針或接種環(huán)取出一粒瓷珠。封好冷凍管并盡快將其送回低溫條件下保存。將瓷珠直接接種于固體培養(yǎng)基或適量的液8.1微生物菌種保藏和