輸血相關傳染病病原學標志物檢測（臨床輸血檢驗課件）

臨床輸血檢驗技術檢測報告的簽發(fā)學習目標熟悉檢測結果的復核、報告發(fā)布、報告復核、報告審核簽發(fā)的流程檢測報告的簽發(fā)檢測結果復核酶免檢測原始記錄與微孔板逐一核對取消接收試驗結果和發(fā)布報告結果與擴增曲線核對核對完整實驗過程和關鍵控制點不一致，不在控核酸檢測采取糾正措施分析和查找原因填寫復核記錄單檢測報告的簽發(fā)酶免試驗《血液篩查檢測報告》報告發(fā)布《酶免試驗血液檢測過程報告》核酸檢測試驗其它《核酸檢測試驗血液檢測過程報告》核酸免檢放行標本核酸試驗組單項試驗已發(fā)布的標本機采預標本常規(guī)試驗不合格標本發(fā)布總評結果檢測報告的簽發(fā)報告復核核實報告與原始數(shù)據(jù)是否一致報告的標本數(shù)與實際檢測標本的數(shù)量是否一致留取的待查樣本管、不合格樣本管是否正確填寫報告復核記錄檢測報告的簽發(fā)報告審核簽發(fā)《試驗結果原始記錄》《血液檢測過程報告》《血液篩查檢測報告》填寫報告最終簽發(fā)記錄《報告復核記錄》檢測標本的采集、運輸、交接與處理學習目標掌握檢測標本的采集、運輸、交接與處理的基本原則酶免檢測血液樣本1EDTA-K2真空抗凝管留取5ml血液樣本核酸檢測的血液樣本2必須采用無菌、無DNA酶、無RNA酶、帶分離膠的一次性真空EDTA-K2抗凝試管標本采集采集后4小時內進行離心，離心力要求為1200～1600g，時間不少于15分鐘；標本離心后上下層界面清楚明顯，上清液應透明清亮，呈淡黃色，無嚴重溶血，中層分離膠緊實均勻；離心后的標本上下分層界線清楚明顯，標本量不得少于5ml。采集的血液標本應盡快放入現(xiàn)場2～8℃冰箱內標本運輸標本運輸采用試管架等固定裝置固定標本防止標本散落；標本應隔離密封包裝，包裝材料應滿足防水、防破損、防外泄、易于消毒處理，裝箱時應保持標本管口向上，具有一定保溫效果。應避免運輸途中發(fā)生劇烈震蕩而導致樣本破損、滲漏或溶血。有溫控措施，保證整個冷鏈系統(tǒng)能有效控制溫度在2～10℃范圍。標本交接檢查運輸過程溫度是否在2～10℃范圍核查標本來源、數(shù)量；核查標本管是否選用錯誤、有無破損，、滲漏、管內有無異物；標本是否滿足既定的質量要求，有無嚴重溶血、抗凝不充分、標本量不足或被稀釋核酸標本的預離心情況標本與送檢單信息對應性和完整性無誤后簽字確認標本離心核酸管應使用低溫離心機酶免管低溫、常溫離心均可標本處理離心后應檢查標本有無溶血、樣本管是否破損、血漿層有無異物。異常標本應交相關部門處理。標本處理編號拔塞擺架將未檢標本直接放入2～8℃待檢標本冰箱保存A當日檢測結果為陽性的標本挑出，在每個試管條碼上注明日期和陽性項目，放在試管架上（HIV初篩陽性的標本放在專用試管架上），保存于2～8℃已檢不合格標本專用冰箱中，填寫血液檢測陽性樣本登記表B將當日已檢測合格的標本放入空試劑盒中，標注日期和架次，保存于2～8℃已檢合格樣本冰箱。C將待檢標本標識后（如：HBsAg一檢B1、二檢B2，ABO？及Rh（-）等）放入試管架上，直接保存于2～8℃待檢樣本冰箱中。D檢測后標本的保存標本處理臨床輸血檢驗技術檢測策略

臨床輸血檢驗技術

檢測策略學習目標掌握輸血相關傳染病病原學標志物的檢測策略檢測項目檢測項目檢測方法（1）核酸擴增檢測技術；（2）血清學檢測技術（3）速率法（濕化學法）。人類免疫缺陷病毒（HIV）感染標志物、乙型肝炎病毒（HBV）感染標志物、丙型肝炎病毒(HCV)感染標志物、梅毒螺旋體感染標志物等檢測策略HIV、HBV、HCV感染標志物檢測實施核酸檢測試劑批簽發(fā)之前2遍血清學檢測和1遍核酸檢測，應采用2個不同生產廠家的試劑實施核酸檢測試劑批簽發(fā)之后核酸和血清學檢測2種方法各進行1次檢測檢測策略梅毒螺旋體感染標志物采用2個不同生產廠家的血清學檢測試劑進行檢測檢測流程

檢測流程

臨床輸血檢驗技術

檢測報告的簽發(fā)學習目標1、掌握HIV、HBV、HCV核酸檢測的原理、實驗有效性的判定、結論的判斷。2、知道反應性和非反應性標本保存的方法病原學標志物的核酸檢測原理PCR擴增檢測采用TaqMan熒光探針標定技術。人類免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒核酸擴增分別采用不同熒光染料標記的探針，故可對提取的標本和內對照模板同時進行HBV（DNA）、HCV（RNA）、HIV1（RNA）檢測。在反轉錄酶的作用下HCVRNA/HIV1RNA/內對照RNA反轉錄成cDNA，再與HBVDNA/內對照DNA一同作為模板在TaqDNA聚合酶的作用下擴增病毒核酸的保守區(qū)域和內對照特定區(qū)域。TaqDNA聚合酶5’—3’外切酶活性切割反應系統(tǒng)中帶熒光標記的TaqMan探針產生熒光信號，隨著PCR反應的進行，熒光信號不斷積累。實時熒光定量PCR儀通過檢測達到和超過熒光閾值的信號給出樣品的陰陽性結果。病原學標志物的核酸檢測樣本EDTA-K2真空采血管留取血液樣本器材與試劑熒光定量PCR擴增儀、HIV、HBsAg、HCV病毒（DNA）核酸擴增熒光檢測試劑盒等。病原學標志物的核酸檢測分析項目內對照HBVDNAHCVRNAHIV-1RNA備注檢測熒光HEXTAMRAFAMROXCY5/陰性對照++---否則重測陽性對照//+++否則重測

陽性對照、陰性對照、內對照結果判定規(guī)則病原學標志物的核酸檢測分析項目內對照HBVDNAHCVRNAHIV-1RNA結果判定檢測熒光HEXTAMRAFAMROXCY5檢測樣本++---HBVDNA/HCVRNA/HIV-1RNA陰性//+//HBVDNA陽性///+/HCVRNA陽性////+HIV-1RNA陽性-----所有結果重新測定-/-//HBVDNA結果重新測定/-/--HCVRNA或HIV-1結果重新測定（1.”/”表示不考慮；2.FAM/ROX/CY5熒光層“-”表示Ct>45orNoCt;“+”表示Ct≤45；3.HEX/TAMRA熒光層“-”表示Ct>40orNoCt;“+”表示Ct≤40）檢測樣本結果判定規(guī)則

病原學標志物的核酸檢測實驗有效性判定當陰陽性對照與外部質控品（質控品達到預期結果）同時有效時，整批實驗有效；否則整批實驗無效，需重做。結論的判定a.采用混檢（八混一）模式進行核酸檢測，當混檢結果呈非反應性（-）時，該混檢孔內的標本均判為合格標本。b.當混檢結果某一項或多項呈反應性（+）時，混檢孔內的所有標本均為待查標本，須進行拆分單樣本檢測。當拆分檢測呈非反應性（-）時，則該標本為合格標本；拆分單樣本檢測某一項或多項呈反應性（+）時，該樣本判為不合格。對照檢測報告，將檢測呈反應性的POOl所對應的標本挑出，放于2～8℃冰箱，留待次日進行樣本拆分檢測。對照檢測記錄，將檢測呈非反應性的標本按日期，每100個標本作為一個單位放在樣本盤上，貼上留樣標簽，放-20℃冰箱保存?！緲吮颈４妗坎≡瓕W標志物的核酸檢測病原學標志物的核酸檢測【質量控制】1．PCR擴增板須嚴格按照編寫的擴增板圖從左至右順序擺放。2．PCR擴增板放入PCR儀的擴增槽后，如擴增板少于6條，應取相同數(shù)量八連管從右至左擺放與其配平，如擴增板大于6條少于12條，應將剩下的空擴增槽用八連管補齊。3．按《實驗室清潔消毒標準操作規(guī)程》進行PCR擴增實驗室清潔消毒。臨床輸血檢驗技術四項病原學標志物的酶免檢測學習目標掌握輸血相關傳染病病原學標志物酶聯(lián)免疫吸附試驗的原理、方法、結果判斷、待查標本的處理原則。人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測原理

采用雙抗原夾心法和雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，在微孔條上預包被重組HIV抗原和抗P24單抗，配以生物素抗體、酶標記抗原、酶標記親和素及TMB顯色劑等其它試劑，檢測人血清或血漿中的HIV-1型和（或）HIV-2型抗體和HIVP24抗原。人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測樣本EDTA-K2真空采血管留取血液樣本器材與試劑手工加樣儀、全自動加樣及酶免處理系統(tǒng)、人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）等人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測操作試劑的平衡檢查試劑盒配制洗液檢查微孔反應板加樣檢查加樣效果檢測人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測結果判斷兩種試劑結果無反應性陰性一種或兩種可疑或反應性單試劑待查單試劑雙孔復試雙試劑待查雙試劑單孔復試一孔或兩孔為可疑或反應性兩孔均為無反應性任一種試劑為可疑或反應性兩種試劑均為無反應性HIV陽性HIV陽性HIV陰性HIV陰性

人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測HIV初篩陽性樣本的送檢疫情上報人員填寫HIV初篩陽性送檢單取陽性血清于專用試管、標識填寫HIV初篩陽性樣本送檢記錄樣品放入專用套桶并放入專用保溫箱送確診實驗室人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測1．從冰箱中取出的試劑盒應至少在室溫平衡30min以上。2．每次實驗前試劑最多可添加試劑槽的3／4的量，添加時應小心，防止試劑砰濺導致試劑污染。3．整個實驗過程中應嚴格遵守儀器和項目操作規(guī)程進行操作，不得擅自離崗?！举|量控制】乙肝表面抗原檢測原理應用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗原理。在微孔板預包被純化乙肝表面抗體（抗-HBs），加入待檢樣本，同時加入酶標記乙肝表面抗體（HBsAb-HRP）進行溫育，樣本中存在的乙肝表面抗原（HBsAg）與包被抗體形成“包被抗體-抗原-酶標抗體”復合物。洗板后加入顯色劑，復合物上連接的HRP催化顯色劑反應，生成藍色產物，終止反應后，變?yōu)辄S色。乙肝表面抗原檢測樣本EDTA-K2真空采血管留取血液樣本手工加樣儀、全自動加樣及酶免處理系統(tǒng)、人類乙肝表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）等器材與試劑乙肝表面抗原檢測

同人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測操作同人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測結果判斷同人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測質量控制very丙型肝炎病毒抗體檢測原理應用間接酶聯(lián)免疫吸附實驗原理，在微孔板預包被HCV抗原，加入稀釋液及待檢樣品進行溫育，樣品中存在的HCV抗體與包被抗原形成“包被抗原-抗體”復合物，洗板去除不與包被抗原結合的物質；加入酶標試劑，進行第二次溫育，酶標二抗與“包被抗原-抗體”復合物結合，形成“包被抗原-抗體-酶標二抗”復合物；再次洗板后加入顯色劑，復合物上連接的HRP催化顯色劑反應，生成藍色產物，終止反應后，變?yōu)辄S色。丙型肝炎病毒抗體檢測樣本EDTA-K2真空采血管留取血液樣本手工加樣儀、全自動加樣及酶免處理系統(tǒng)、丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）等器材與試劑

同人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測操作同人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測結果判斷同人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測質量控制very丙型肝炎病毒抗體檢測梅毒螺旋體抗體檢測原理采用雙抗原夾心ELISA方法定性檢測血