器官移植及免疫學(xué)檢驗(yàn)（免疫學(xué)檢驗(yàn)課件）

器官移植及免疫學(xué)檢驗(yàn)

自1954年美國波士頓醫(yī)生默里成功地進(jìn)行了世界上第一例同卵雙胞胎之間的移植手術(shù)至今，器官移植經(jīng)歷了理論、技術(shù)及倫理等的考驗(yàn)，逐步成熟并為越來越多的人們所接受。當(dāng)前臨床上廣泛開展的有：角膜、皮膚、肝、腎、心臟、骨髓等移植，器官移植已成為治療各種臟器和造血系統(tǒng)終末期疾病唯一的手段。前言

指應(yīng)用異體或自體正常器官、組織、細(xì)胞置換病變或功能缺損的器官、組織、細(xì)胞，以維持和重建機(jī)體生理功能的治療方法。移植物供體受體第一節(jié)器官移植的基本知識(shí)一、移植的概念自體移植（autograft）同系移植/同基因移植（syngraft）同種（異體/異基因）移植（allograft）異種移植（xenogeneicgraft）二、移植的類型是指移植后，受者免疫系統(tǒng)識(shí)別移植物抗原或移植物中免疫細(xì)胞識(shí)別受者抗原，產(chǎn)生免疫應(yīng)答，導(dǎo)致移植物功能喪失或受者機(jī)體損害的過程。三、移植排斥反應(yīng)

主要組織相容性抗原（HLA）

次要組織相容性抗原（mHA）

ABO血型抗原系統(tǒng)組織特異性抗原（一）誘導(dǎo)移植排斥反應(yīng)的抗原1、主要組織相容性抗原（MHA）

HLA-DRHLA-A、HLA-B、HLA-DQ和HLA-DP，HLA-C在進(jìn)行個(gè)體移植是，引起移植排斥反應(yīng)最強(qiáng)的是HLA。在三類HLA中，I、II類分子是引發(fā)移植排斥反應(yīng)的首要抗原，尤其是HLA－DR位點(diǎn)的抗原分子。2、次要組織相容性抗原（mHA）

排斥反應(yīng)的程度輕，速度慢

性染色體編碼的mHA

常染色體編碼的mHA

3、人類紅細(xì)胞血型抗原

ABO血型系統(tǒng)(供受者必須一致?。?/p>

Rh血型系統(tǒng)4、組織特異性抗原血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性抗原、腎特異性抗原、肝臟特異性抗原、骨髓特異性抗原等。

（二）T細(xì)胞識(shí)別同種異型抗原的機(jī)制1．細(xì)胞免疫應(yīng)答效應(yīng)2.體液免疫應(yīng)答效應(yīng)3．非特異性免疫應(yīng)答效應(yīng)

（三）移植排斥反應(yīng)的效應(yīng)機(jī)制

供體移植物的抗原可被受體免疫系統(tǒng)識(shí)別，介導(dǎo)宿主抗移植物反應(yīng)（hostversusgraftrejection,HVGR），另一方面受者組織抗原也可刺激移植物中的免疫細(xì)胞，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，引起移植物抗宿主反應(yīng)（graftversushostrejection,GVHR)。

（四）移植排斥反應(yīng)的類型根據(jù)排斥反應(yīng)發(fā)生的時(shí)間強(qiáng)度、發(fā)病機(jī)理、臨床表現(xiàn)及病理變化，分為：超急性排斥反應(yīng)急性排斥反應(yīng)慢性排斥反應(yīng)1、宿主抗移植物反應(yīng)（HVGR）（1）超急性排斥反應(yīng)（hyperacuterejection）

是指血管接通后數(shù)分鐘至術(shù)后1~2天內(nèi)發(fā)生的不可逆轉(zhuǎn)的體液排斥反應(yīng)，常見于反復(fù)輸血、多次妊娠或再次移植的個(gè)體，其發(fā)生機(jī)制與供受者間血型不合、受者血液中預(yù)存有抗供者的抗體（包括ABO和Rh抗體，HLA抗體等）有關(guān)。

為同種異體移植中最常見的排斥反應(yīng)類型，一般在術(shù)后幾天至2周左右出現(xiàn)，約80%~90%在術(shù)后1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)。其發(fā)生機(jī)制主要為細(xì)胞免疫，通常急性排斥反應(yīng)發(fā)生越早越嚴(yán)重，后期發(fā)生的排斥反應(yīng)有體液免疫的參與，多數(shù)進(jìn)展緩慢，癥狀較輕。（2）急性排斥反應(yīng)（acuterejection）（3）慢性排斥反應(yīng)（chronicrejection）

指發(fā)生于術(shù)后數(shù)月至數(shù)年的緩慢、進(jìn)行性、不可逆，并最終導(dǎo)致移植物功能喪失的排斥反應(yīng)，其特點(diǎn)主要是正常組織結(jié)構(gòu)的喪失和纖維化，血管平滑肌細(xì)胞增生，移植物血管的破壞。慢性排斥反應(yīng)的機(jī)制尚未完全清楚，目前認(rèn)為由免疫和非免疫兩種機(jī)制引起。

當(dāng)移植物存活后，移植物中的免疫活性細(xì)胞（主要是T細(xì)胞）識(shí)別宿主抗原，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，攻擊受者靶組織的一種排斥反應(yīng)，常在骨髓（造血干細(xì)胞）移植或其他免疫細(xì)胞移植（如脾臟、胸腺移植）中發(fā)生。

移植物抗宿主病（GVHD）2、移植物抗宿主反應(yīng)(GVHR）

GVHR的發(fā)生條件①移植物中有大量免疫活性細(xì)胞②宿主和移植物組織相容性抗原不符③宿主處于免疫功能極度低下狀態(tài)，沒有能力對(duì)移植物發(fā)動(dòng)HVGR血清學(xué)分型細(xì)胞學(xué)分型基因分型

第二節(jié)HLA分型技術(shù)SD抗原

HLA-ABCHLA-DRDQ補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒(CDC)試驗(yàn)一、HLA血清學(xué)分型技術(shù)

將待檢淋巴細(xì)胞與一系列已知抗HLA標(biāo)準(zhǔn)分型血清混合后，抗體會(huì)特異性結(jié)合表達(dá)相應(yīng)HLA抗原的淋巴細(xì)胞，在補(bǔ)體的作用下，引起細(xì)胞死亡，死亡的細(xì)胞可被臺(tái)盼藍(lán)等染料染色，而活細(xì)胞由于細(xì)胞膜完整不著色，根據(jù)死亡細(xì)胞的百分比，判定其HLA的型別。CDC試驗(yàn)原理流式細(xì)胞儀分析技術(shù)LD抗原

HLA-D和DP

混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(MLC)二、HLA細(xì)胞學(xué)分型技術(shù)

兩個(gè)基因型不同個(gè)體的淋巴細(xì)胞，在體外進(jìn)行混合培養(yǎng)時(shí)，由于彼此的HLA不同，能相互刺激導(dǎo)致雙方淋巴細(xì)胞活化增殖和分化，進(jìn)而表現(xiàn)形態(tài)學(xué)的變化和細(xì)胞的增殖，可通過形態(tài)學(xué)或3H-TdR滲入試驗(yàn)來檢測淋巴細(xì)胞反應(yīng)的強(qiáng)度，從而判定其HLA型別。

單向MLC和雙向MLCMLC原理RFLP:限制性片段長度多態(tài)性分析PCR-SSOP：序列特異性寡核苷酸探針-PCRPCR-SSP：序列特異性引物-PCRPCR-SSCP：單鏈構(gòu)象特異性-PCRSBT分型法：基于序列的HLA分型法多熒光微珠免疫分析基因芯片三、HLA基因分型技術(shù)移植前組織配型免疫抑制措施第三節(jié)預(yù)防移植排斥反應(yīng)的免疫學(xué)措施供受者HLA是否相符是移植物存活的主要條件之一，兩者的匹配程度決定了移植排斥反應(yīng)的強(qiáng)弱。HLA系統(tǒng)含有多種Ⅰ類和Ⅱ類抗原基因，但多數(shù)情況下只檢測HLA-DR、A和B。不同器官的移植對(duì)HLA配型要求不同。一、組織配型（一）HLA配型ABO、Rh血型必須相同或相容?。。ǘ┘t細(xì)胞血型抗原的配型

必須做HLA交叉配型??！方法：補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒試驗(yàn)（CDC)

雙向MLC

流式細(xì)胞術(shù)試驗(yàn)時(shí)每一標(biāo)本至少做3份，同時(shí)設(shè)陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。（三）交叉配型

術(shù)后使用免疫抑制劑人工調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫狀態(tài)是目前控制排斥反應(yīng)發(fā)生最主要的方式。臨床上常用的免疫抑制劑有三類：二、免疫抑制措施1、化學(xué)性的免疫抑制劑

常見有：環(huán)孢素A、糖皮質(zhì)激素、硫唑嘌呤、環(huán)磷酰胺、他克莫司麥考酚嗎乙酯，西羅莫司等。2、生物免疫抑制劑

常見有：抗淋巴細(xì)胞球蛋白、抗細(xì)胞因子或細(xì)胞因子受體抗體、融合蛋白、反義寡核苷酸等。3、某些中草藥如雷公藤等。意義早期診斷排斥反應(yīng)和監(jiān)測排斥危象的發(fā)生，以便及時(shí)采取措施。項(xiàng)目體液免疫水平的檢測（抗體、補(bǔ)體）細(xì)胞免疫水平的檢測

免疫分子的監(jiān)測第四節(jié)移植后的免疫監(jiān)測T細(xì)胞亞群及功能檢測

單克隆抗體免疫熒光法和流式細(xì)胞儀測定T細(xì)胞亞群，T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)測定T細(xì)胞功能，4hT細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)檢測受者致敏T細(xì)胞。

NK細(xì)胞活性檢測

形態(tài)學(xué)法、熒光標(biāo)記剩余法一、細(xì)胞免疫水平的監(jiān)測血清抗體的檢測包括抗供者HLA抗體、抗供者組織細(xì)胞抗體、抗血管內(nèi)皮細(xì)胞抗體、B細(xì)胞細(xì)胞毒抗體、冷凝集素等的檢測。方法：CDC、交叉配型等。血清補(bǔ)體的檢測

CH50試驗(yàn)檢測活性，免疫擴(kuò)散和免疫比濁試驗(yàn)檢測含量。二、體液免疫水平的監(jiān)測細(xì)胞因子及其受體的檢測黏附分子的檢測其他分子的檢測

C反應(yīng)蛋白（CRP）、β2-微球蛋白（β2m）三、免疫分子的監(jiān)測主要問題

移植排斥反應(yīng)供體不足第五節(jié)器官移植面臨的主要問題和解決方案設(shè)想

方案1.誘導(dǎo)同種異型反應(yīng)性T細(xì)胞耐受2.阻斷T細(xì)胞活化的協(xié)同刺激信號(hào)誘導(dǎo)T細(xì)胞無能3.調(diào)控Th細(xì)胞向Th2亞群轉(zhuǎn)化4.T細(xì)胞疫苗的研制一、誘導(dǎo)同種異體免疫耐受探索異種器官移植，是緩解目前器官移植供需矛盾的手段之一，目前異種器官移植尚不能成功地應(yīng)