血液學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 課件 19.項(xiàng)目十九：血管壁和血小板止血作用及檢驗(yàn)

單元四：出血和血栓性疾病的檢驗(yàn)項(xiàng)目十九：血管壁和血小板止血作用及檢驗(yàn)任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)?zāi)夸涰?xiàng)目十九：血管壁和血小板止血作用及檢驗(yàn)任務(wù)二血小板的止血作用及檢驗(yàn)1.掌握：血管壁以及血小板的止血作用；血漿VWF測(cè)定、血漿血栓調(diào)節(jié)蛋白檢測(cè)、血漿內(nèi)皮素-1檢測(cè)、血漿6-酮-前列腺素F1a、出血時(shí)間測(cè)定、血小板粘附、聚集試驗(yàn)，血小板相關(guān)抗體檢測(cè)的檢測(cè)方法、結(jié)果分析和臨床意義。2.熟悉：血小板花生四烯酸代謝、血小板活化表現(xiàn)。3.了解：束臂試驗(yàn)、血塊收縮試驗(yàn)結(jié)果分析和臨床意義。4.學(xué)會(huì)依據(jù)臨床表現(xiàn)，選擇相關(guān)試驗(yàn)，并對(duì)其結(jié)果進(jìn)行分析。學(xué)習(xí)目標(biāo)項(xiàng)目十九：血管壁和血小板止血作用及檢驗(yàn)任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)項(xiàng)目十九：血管壁和血小板止血作用及檢驗(yàn)任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)一、概述（一）血管壁的結(jié)構(gòu)ABC內(nèi)層，即大血管管壁的最內(nèi)層，與血液接觸，由單層內(nèi)皮細(xì)胞和基底膜組成中層,由平滑肌細(xì)胞組成，動(dòng)脈平滑肌較厚，靜脈較薄，毛細(xì)血管則沒(méi)有平滑肌層外層,主要由起支持作用的結(jié)締組織組成，能夠連續(xù)完整地與周圍的組織器官分開(kāi)血管壁的結(jié)構(gòu)任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)01收縮反應(yīng)02激活血小板03激活凝血04血栓凝固的調(diào)節(jié)任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)（二）、血管壁的作用常見(jiàn)的調(diào)節(jié)血管舒縮的活性物質(zhì)

任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)束臂試驗(yàn)出血時(shí)間測(cè)定血漿vWF檢測(cè)凝血酶調(diào)節(jié)蛋白測(cè)定

血漿6酮-前列腺

素F1a測(cè)定

血漿內(nèi)皮素-1檢測(cè)任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)

（一）束臂試驗(yàn)【原理】束臂試驗(yàn)又稱為毛細(xì)血管脆性試驗(yàn)（capillaryfragilitytest，CFT）。束臂試驗(yàn)是在手臂局部加壓，使靜脈血流受阻給毛細(xì)血管以負(fù)荷，檢查一定范圍內(nèi)新出現(xiàn)的出血點(diǎn)來(lái)估計(jì)血管壁的脆性。本試驗(yàn)主要與血管壁的結(jié)構(gòu)和功能、血小板的數(shù)量和質(zhì)量以及血漿vWF等因素有關(guān)。本試驗(yàn)測(cè)定的敏感性和特異性均較差，已趨向淘汰?！緟⒖贾怠?cm直徑圓圈內(nèi)新出血點(diǎn)的數(shù)目，男性少于5個(gè)；女性及兒童少于10個(gè)。任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)【臨床應(yīng)用】新出血點(diǎn)數(shù)目超過(guò)正常為陽(yáng)性。1．血管壁結(jié)構(gòu)和（或）功能缺陷：如遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、過(guò)敏性紫癜、單純性紫癜及其他血管性紫癜。2．血小板的數(shù)量和（或）質(zhì)量異常：如原發(fā)性和繼發(fā)性血小板減少癥，血小板增多癥、血小板無(wú)力癥等。3．血管性血友病。4．少數(shù)正常人，尤其是婦女CFT可呈陽(yáng)性。

(二)出血時(shí)間測(cè)定

在特定條件下，皮膚小血管被刺破后，血液自行流出到自然停止的時(shí)間稱為出血時(shí)間（bleedingtime，BT）。BT的異常與血小板的數(shù)量和功能、血管壁的完整性、某些凝血因子缺乏有關(guān)。任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)1）BT延長(zhǎng)主要涉及血小板和血管壁的一期止血缺陷，①血小板數(shù)量異常，如血小板減少癥及原發(fā)性血小板增多癥；②血小板功能缺陷，如血小板無(wú)力癥，巨大血小板綜合征；③血管壁結(jié)構(gòu)異常（少見(jiàn)），如遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥；

④某些凝血因子缺乏，如血管性血友病、低（無(wú)）纖維蛋白原血癥和彌散性血管內(nèi)凝血（DIC）。2）BT縮短見(jiàn)于某些嚴(yán)重的血栓性疾病。任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)（三）血漿vWF檢測(cè)

血管性血友病因子在止凝血過(guò)程中起重要作用，除了介導(dǎo)血小板黏附于血管壁的受損處外，它還作為因子Ⅷ的載體。血管性血友病因子抗原（antigenlevelofvonWillebrandfactor，vWF：Ag）的測(cè)定，通常采用兩種方法，即火箭電泳法和酶聯(lián)免疫吸附法。任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)【臨床應(yīng)用】1）.減低

見(jiàn)于血管性血友?。╲onWillebrandDiseases，vWD）是診斷vWD和vWD變異型的重要指標(biāo)。2）.增高

見(jiàn)于血管內(nèi)皮損傷，如缺血性心腦血管病、周圍血管病；高凝狀態(tài)疾病，如腎病綜合癥、妊娠高血壓、尿毒癥等；其他如大手術(shù)后、糖尿病、高脂血癥、DIC等；還可見(jiàn)于劇烈運(yùn)動(dòng)后、高原反應(yīng)等應(yīng)激狀態(tài)時(shí)。任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)(四)凝血酶調(diào)節(jié)蛋白測(cè)定

凝血酶調(diào)節(jié)蛋白（thrombomodulin，TM）測(cè)定分為T(mén)M活性測(cè)定（TM：A，發(fā)色底物顯色法）和TM抗原測(cè)定（TM：Ag，放射免疫法）。任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)

【臨床應(yīng)用】目前認(rèn)為，TM：A的檢測(cè)是血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的標(biāo)志物。血中TM增高見(jiàn)于急性心肌梗死、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、系統(tǒng)紅斑性狼瘡、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、彌散性血管內(nèi)凝血、腦血栓、惡性腫瘤和嚴(yán)重肝功能不全等。任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)

（五）血漿內(nèi)皮素-1檢測(cè)【原理】常用ELISA雙抗體夾心法測(cè)定血漿內(nèi)皮素-1（endothelin-1，ET-1）含量?！緟⒖贾怠垦獫{ET-1<5ng/L（ELISA）【臨床應(yīng)用】血漿ET-1增高可見(jiàn)于心絞痛、心肌梗死、缺血性腦血管病、原發(fā)性高血壓病、高脂蛋白血癥、腎衰竭、肺動(dòng)脈高壓休克及DIC等。因此血漿ET-1水平可作為了解血管內(nèi)皮損傷程度的一項(xiàng)指標(biāo)，用于心血管病患者的療效判斷、預(yù)后估計(jì)等。任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)

（六）血漿6酮-前列腺素F1a測(cè)定

【原理】血漿6酮-前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）測(cè)定，ELISA法：將抗原（6-keto-PGF1a-牛血清白蛋白連接物）包被于酶標(biāo)反應(yīng)板，與游離的抗原（待測(cè)樣品和6-keto-PGF1a標(biāo)準(zhǔn)品）競(jìng)爭(zhēng)性地與一定量的抗6-keto-PGF1a抗體結(jié)合，洗滌后加入過(guò)量的酶標(biāo)二抗，再加底物顯色。任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)

【臨床應(yīng)用】血漿6酮-前列腺素F1a的水平能客觀地反映血管內(nèi)皮功能，有助于血管內(nèi)皮損傷程度的了解和療效評(píng)價(jià)。血漿6酮-前列腺素F1a減低見(jiàn)于糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化、急性心肌梗死、心絞痛、腫瘤轉(zhuǎn)移、腦血管病變及周圍血管血栓形成等。任務(wù)一血管壁的止血作用及檢驗(yàn)任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)項(xiàng)目十九：血管壁和血小板止血作用及檢驗(yàn)

1.血小板的止血作用（1）血小板的組成與結(jié)構(gòu)

血小板（platelet）由骨髓中成熟巨核細(xì)胞的胞質(zhì)脫落而產(chǎn)生，由細(xì)胞膜包裹著含有顆粒的胞質(zhì)。直徑1-4μm，平均容積為7.2fl，是哺乳動(dòng)物中體積最小的血細(xì)胞。任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)產(chǎn)血小板型巨核細(xì)胞任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)

血小板結(jié)構(gòu)可分為表面結(jié)構(gòu)、溶膠質(zhì)層結(jié)構(gòu)、細(xì)胞器內(nèi)含物。任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)1）血小板表面結(jié)構(gòu)由血小板膜和開(kāi)放管道系統(tǒng)（opencanalicularsystem，OCS）組成。血小板表面結(jié)構(gòu)血小板膜開(kāi)放管道系統(tǒng)膜蛋白膜脂質(zhì)任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)主要的血小板膜糖蛋白和功能任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)2）溶膠質(zhì)層結(jié)構(gòu)01微管0203致密管道系統(tǒng)微絲任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)3）細(xì)胞器內(nèi)容物結(jié)構(gòu)

01α-顆粒0203γ-顆粒（溶酶體）δ-顆粒（致密顆粒）任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)（2）血小板的花生四烯酸代謝任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)（3）血小板活化表現(xiàn)

血小板參與止血要通過(guò)三個(gè)步驟才能完成：

首先是血小板與膠原物質(zhì)間的粘著，以防止血液從損傷的血管內(nèi)皮外流；

其次是加速內(nèi)皮損傷處的凝血因子活化，使纖維蛋白在損傷處沉著；

最后是釋放血小板內(nèi)容物，活化更多的血小板，并促使血管收縮，以利傷口的愈合。這些步驟都可以找到血小板活化的依據(jù)。任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)1）血小板形態(tài)改變

血小板呈多角形或多偽足形活化狀態(tài)2）血小板表面特殊蛋白的表達(dá)GPⅡb/Ⅲa受體和α顆粒膜上的P-選擇素（3）血小板活化表現(xiàn)任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)3）血小板的止血功能黏附聚集釋放促凝收縮任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)

血小板止血功能示意圖任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)2血小板檢驗(yàn)

（1）血小板計(jì)數(shù)（見(jiàn)《臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)》）

（2）血塊退縮試驗(yàn)

【臨床應(yīng)用】血塊收縮小于40%，表明收縮不佳，見(jiàn)于血小板無(wú)力癥、特發(fā)性血小板減少性紫癜、血小板增多癥、低（無(wú)）纖維蛋白原血癥、嚴(yán)重凝血障礙等。任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)（3）血小板粘附試驗(yàn)

【臨床應(yīng)用】血小板粘附率增高見(jiàn)于高凝狀態(tài)和血栓性疾病，如心肌梗死、心絞痛、動(dòng)脈粥樣硬化、腦血管疾病、糖尿病、腎小球腎炎、口服避孕藥、妊娠高血壓綜合征；血小板粘附率減低見(jiàn)于血管性血友病、巨大血小板綜合征、血小板無(wú)力癥、骨髓增生性疾病、尿毒癥及服用血小板抑制藥物（如潘生丁等）。任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)（4）血小板聚集試驗(yàn)

【臨床應(yīng)用】增高反映血小板聚集功能增強(qiáng)。見(jiàn)于血栓前狀態(tài)和血栓性疾病，如心肌梗死、心絞痛、糖尿病、腦血管病變、妊高癥、靜脈血栓形成、口服避孕藥、晚期妊娠、高脂血癥、人工心臟、瓣膜移植術(shù)和吸煙等；減低反映血小板聚集功能減退。見(jiàn)于血小板無(wú)力癥、巨大血小板綜合征、尿毒癥、肝硬化、特發(fā)性血小板減少性紫癜（Idiopathicthrombocytopenicpurpura，ITP）、急性白血病、服用抗血小板藥物（如阿司匹林等）、低（無(wú)）纖維蛋白原血癥等。任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)（5）血小板第三因子有效性測(cè)定【臨床應(yīng)用】PF3aT是最常用的血小板凝血活性檢測(cè)試驗(yàn)，方法簡(jiǎn)單，易于操作。PF3有效性減低見(jiàn)于先天性血小板PF3缺乏癥，血小板無(wú)力癥、巨大血小板綜合征、肝硬化、尿毒癥、彌散性血管內(nèi)凝血、系統(tǒng)紅斑性狼瘡、特發(fā)性血小板減少性紫癜、骨髓增生異常綜合征、急性白血病及服用抗血小板藥物等；PF3有效性增高，見(jiàn)于高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗死、糖尿病伴血管病變等。任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)（6）血小板膜糖蛋白測(cè)定

【臨床應(yīng)用】本試驗(yàn)具有比較高的敏感性和特異性。GPⅡb/Ⅲa（CD41/CD61）缺乏見(jiàn)于血小板無(wú)力癥；GPⅠb（CD42b）缺乏見(jiàn)于巨大血小板綜合征。任務(wù)二血小板的止血作用與檢驗(yàn)（7）血小板相關(guān)抗體測(cè)定

【臨床應(yīng)用】作為診斷特發(fā)性血小板減少性紫癜（ITP）的指標(biāo)之一。90%以上ITP患者PAIgG增高，若同時(shí)測(cè)定PAIgA、PAIgM，則陽(yáng)性率可達(dá)100%；血小板相關(guān)抗體也可以作為ITP觀察療效及判斷預(yù)后的指標(biāo)。ITP患者經(jīng)腎上腺素治療有效者，PAIgG會(huì)下降。若PAIgG在2周內(nèi)下降者其預(yù)后良好；PAIgG也有助于研究其他一些疾病的免疫機(jī)制，如系統(tǒng)紅斑性狼瘡、Evans綜合征、慢性活動(dòng)性肝炎、惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤等疾病PAIgG增高。任務(wù)二血小