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備案號(hào)：37938-2013DB22DB22/T1819—2013飼料用酶制劑中酸性蛋白酶活力的測(cè)定分光光度法DeterminationofacidicproteaseactivityinfeedenzymepreparationsSpectrophotometricmethod2013-05-15發(fā)布2013-09-0吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I1在40℃、pH3.0條件下，酸性蛋白酶1min水解酪素生成1μg酪氨酸所需要的酶量為一個(gè)酶活力酸性蛋白酶水解酪素產(chǎn)生酪氨酸，在堿性條件下含有酚基的酪氨酸將福林試劑還原生成鉬藍(lán)與鎢標(biāo)準(zhǔn)中所有試劑，除另有規(guī)定外均為分析純?cè)噭?，?shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682規(guī)定的三級(jí)25.12L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)品（含量≥99.0%）CAS：60-18-4。），），至容量瓶中。在沸水浴中加熱至完全溶解，冷卻后用乳酸緩），6.6恒溫水浴搖床：溫控范圍30℃~60℃,精度±0.2℃。3稱取適量試樣（精確至0.001g）置研缽中，用少量乳酸緩沖液（入15mL乳酸緩沖液（5.19）混勻，靜置，將上層清液轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中。沉渣部分繼續(xù)重復(fù)上述操作至少3次，將試樣全部轉(zhuǎn)移入容量瓶中，用乳酸緩沖液（5.19）定容至刻度，搖勻。根據(jù)酶活力用℃、振搖速度100次/min的水浴搖床中預(yù)熱2min，加入2.0mL三氯乙酸溶液（），℃、振搖速度100次/min的水浴搖床中預(yù)熱2min，加1.0mL酪素溶液（5.20搖勻，再置水浴搖床中取2.0mL三氯乙酸溶液（5.16）加入上述比色管中，搖勻，準(zhǔn)確量取濾液1.0mL置于另一比色管中，加5.0mL碳酸鈉溶液（5.15加1.0mL福林工作溶液（5.14置溫度40℃±0.2℃的水浴搖床中顯色20min（準(zhǔn)確計(jì)時(shí)作為樣品mL碳酸鈉溶液（5.15）和1.0mL福林工作溶液（5.14）mL，置40℃±0.2℃水浴搖床中顯色20min（準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算出對(duì)應(yīng)的L-酪氨酸X=......................................

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