122微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用

1.2.2微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用Part1目標(biāo)任務(wù)：對接課標(biāo)，了解目標(biāo)Part1目標(biāo)任務(wù)：對接課標(biāo)，了解目標(biāo)Part2預(yù)習(xí)導(dǎo)學(xué)：自主梳理+預(yù)習(xí)檢測，掌握基本知識點(diǎn)Part3探究提升：代入情景+典例精講，深入學(xué)習(xí)知識要點(diǎn)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)Part4網(wǎng)絡(luò)梳理：建立知識間的聯(lián)系Part5強(qiáng)化訓(xùn)練：必刷經(jīng)典試題，能力提升內(nèi)容導(dǎo)航新課程標(biāo)準(zhǔn)學(xué)習(xí)目標(biāo)1.舉例說明通過調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物。

2．概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計(jì)數(shù)法是測定微生物數(shù)量的常用方法。

1.舉例說明通過調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物。2概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計(jì)數(shù)法是測定微生物數(shù)量的常用方法。3.討論土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)的方法。自主梳理一、選擇培養(yǎng)基1.概念：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。2.實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選原理人為提供有利于目的菌生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度和PH），同時(shí)抑制或阻止其他微生物的生長。二、微生物的選擇培養(yǎng)(1)稀釋涂布平板法分離分解尿素的細(xì)菌土壤中細(xì)菌的數(shù)量龐大，要想得到能分解尿素的細(xì)菌的純培養(yǎng)物，必須要對土樣進(jìn)行充分稀釋，然后再將菌液涂布到制備好的選擇培養(yǎng)基，操作過程如下。①取樣：鏟取土樣，將樣品裝入紙袋中。②稀釋涂布平板法A．系列稀釋操作：將10g土樣加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻。取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中，依次等比稀釋。B．涂布平板操作C．培養(yǎng)與觀察待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放入30℃～37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2d。在涂布有合適濃度菌液的平板上就可以觀察到分離的單菌落。三、微生物的數(shù)量測定1.稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)的原理：稀釋涂布平板法除可以用于分離微生物外，也常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，當(dāng)樣品的稀釋足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。2.稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的平板菌落數(shù)范圍：30300。3.稀釋涂布平板法的統(tǒng)計(jì)方法：在同一稀釋度下，應(yīng)至少對3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值。4.稀釋涂布平板計(jì)數(shù)的特點(diǎn)及原因分析：統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少，這是因?yàn)閮蓚€(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。因此。統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示。5.除上述的活菌計(jì)數(shù)外，利用顯微鏡進(jìn)行直接計(jì)數(shù)，也是一種常用的、快速直觀的測定微生物數(shù)量的方法。該方法利用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)，然后再計(jì)算一定體積的樣品中的微生物數(shù)量，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和。預(yù)習(xí)檢測（限時(shí)10分鐘）1．下表是培養(yǎng)某種微生物的培養(yǎng)基配方，說法錯(cuò)誤的是（

）組分含量KH2PO41.4gNaHPO42.1gMgSO47H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0gH2O定容至1000mLA．該培養(yǎng)基從功能上分屬于選擇培養(yǎng)基B．使用稀釋涂布平板法才能得到單菌落C．配制微生物培養(yǎng)基時(shí)，不一定含碳源D．在培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，需將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性【答案】B【詳解】A、該培養(yǎng)基以尿素為唯一氮源，只有分解尿素的微生物才能生長，所以是選擇培養(yǎng)基，A正確；B、使用稀釋涂布平板法和平板劃線法均可得到單菌落，B錯(cuò)誤；C、如果培養(yǎng)的微生物為自養(yǎng)微生物，培養(yǎng)基中不需要添加碳源，C正確；D、在培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，需將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性，D正確。故選B。2．下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A．涂布接種時(shí)，需將涂布器沾酒精后在酒精燈外焰上引燃，冷卻后再使用B．分離計(jì)數(shù)時(shí)，可用稀釋涂布平板法對需計(jì)數(shù)的微生物進(jìn)行分離C．觀察菌落時(shí)，不需要將培養(yǎng)皿蓋拿掉D．培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)濃度越高，對微生物的生長越有利【答案】D【詳解】A、涂布接種時(shí)，涂布器應(yīng)從盛酒精的燒杯中取出，并在火焰上引燃，冷卻后再進(jìn)行涂布接種，A正確；B、稀釋涂布平板法除可以用于分離微生物外，也常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，因此可用稀釋涂布平板法對需計(jì)數(shù)的微生物進(jìn)行分離，B正確；C、為防止空氣中的雜菌污染培養(yǎng)物，觀察菌落時(shí)，不能打開培養(yǎng)皿的蓋子，C正確；D、按照微生物對營養(yǎng)基質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)，培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度適宜，對微生物的生長有利，如果營養(yǎng)物質(zhì)濃度過高會(huì)導(dǎo)致微生物失水，影響其生長繁殖，D錯(cuò)誤。故選D。3．中國科學(xué)院海洋研究所首次發(fā)現(xiàn)能有效降解聚乙烯[（CH）n]塑料的海洋真菌及其分泌的有降解聚乙烯效果的酶種。某興趣小組欲通過培養(yǎng)獲得高品質(zhì)的該種真菌，下列說法錯(cuò)誤的是（

）A．篩選該種真菌的培養(yǎng)基可以聚乙烯為唯一碳源B．該種真菌分泌降解聚乙烯的酶的過程所需要的能量主要由線粒體提供C．利用稀釋涂布法接種時(shí)，稀釋倍數(shù)越高，越容易得到單菌落D．可通過觀察菌落的形狀、顏色等特征對該種真菌進(jìn)行初步鑒定【答案】C【詳解】A、該菌能夠分泌的有降解聚乙烯效果的酶，篩選該種真菌的培養(yǎng)基可以聚乙烯為唯一碳源，A正確；B、真菌為真核生物，該種真菌分泌降解聚乙烯的酶的過程所需要的能量主要由線粒體提供，B正確；C、利用稀釋涂布法接種時(shí)，稀釋倍數(shù)過高或過低，均不容易得到單菌落，C錯(cuò)誤；D、可通過觀察菌落的形狀、顏色等特征對該種真菌進(jìn)行初步鑒定，D正確。故選C。4.閱讀下列材料，回答下列題。當(dāng)培養(yǎng)基以尿素為唯一氮源時(shí)，只有能分泌脲酶的微生物才能在該培養(yǎng)基中生長，利用這種培養(yǎng)基就可分離出土壤中能產(chǎn)生脲酶的微生物。微生物利用脲酶分解尿素產(chǎn)生的氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，使培養(yǎng)基中的酚紅指示劑呈紅色，根據(jù)菌落周圍是否出現(xiàn)紅色區(qū)域，就可進(jìn)一步鑒定尿素分解菌。（1）尿素分解菌能在只有尿素作為氮源的尿素固體培養(yǎng)基中生長，其直接利用的氮源是（

）A．尿素 B．氨 C．脲酶 D．蛋白胨（2）在進(jìn)行“能分解尿素的微生物的分離與計(jì)數(shù)”活動(dòng)時(shí)，用來判斷培養(yǎng)基是否發(fā)揮選擇作用的對照組是（

）A．未接種的選擇培養(yǎng)基 B．已接種的選擇培養(yǎng)基C．未接種的全營養(yǎng)培養(yǎng)基 D．已接種的全營養(yǎng)培養(yǎng)基【答案】（1）B（2）D（1）題干信息：能分泌脲酶的微生物利用脲酶分解尿素產(chǎn)生的氨，故尿素分解菌能在只有尿素作為氮源的尿素固體培養(yǎng)基中生長，其直接利用的氮源是氨，ACD錯(cuò)誤，B正確。故選B。（2）實(shí)驗(yàn)遵循單一變量和對照原則，實(shí)驗(yàn)：進(jìn)行“能分解尿素的微生物的分離與計(jì)數(shù)”活動(dòng)，該實(shí)驗(yàn)使用的培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基，故用來判斷培養(yǎng)基是否發(fā)揮選擇作用的對照組是已接種的全營養(yǎng)培養(yǎng)基，ABC錯(cuò)誤，D正確。故選D。5．欲研究被石油污染過的土壤中細(xì)菌的數(shù)量，并從中篩選出能分解石油的細(xì)菌。下列操作錯(cuò)誤的是（

）A．利用平板劃線法對細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)B．用以石油為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選C．采用稀釋涂布平板法分離菌種D．稱取和稀釋土壤樣品均需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行【答案】A【詳解】A、平板劃線法能對細(xì)菌分離純化，但是不能計(jì)數(shù)，A錯(cuò)誤；B、該實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖呛Y選出能分解石油的細(xì)菌，培養(yǎng)基的配方應(yīng)以石油為唯一碳源，B正確；C、分離菌種常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，后者還可以用于菌種的計(jì)數(shù)，C正確；D、微生物的分離和培養(yǎng)的關(guān)鍵技術(shù)是無菌技術(shù)，因此在微生物的分離和培養(yǎng)的過程中，稱取和稀釋土壤時(shí)應(yīng)在火焰旁等活動(dòng)要在火焰旁進(jìn)行，D正確。故選A。6．下表為某培養(yǎng)基的配方，有關(guān)敘述正確的是（）成分牛肉膏葡萄糖K2HPO4伊紅美藍(lán)青霉素瓊脂蒸餾水含量10g10g2g0.4g0.065g1萬單位適量1000mLA．該培養(yǎng)基pH調(diào)好后就可以接種菌種B．此培養(yǎng)基可以用于基因工程選育轉(zhuǎn)入含青霉素抗性基因的大腸桿菌C．此培養(yǎng)基可以用來檢測自來水中細(xì)菌含量是否符合飲用水標(biāo)準(zhǔn)D．此培養(yǎng)基是天然培養(yǎng)基【答案】B【詳解】A、該培養(yǎng)基pH調(diào)好后還需要滅菌后才能用于接種，A錯(cuò)誤；B、不是所有的大腸桿菌都能在此培養(yǎng)基上生長，只有能抗青霉素的大腸桿菌及其他抗青霉素的微生物才能在此培養(yǎng)基上生長，且大腸桿菌在含有伊紅美藍(lán)的培養(yǎng)基上生長的菌落為黑紫色，因此此培養(yǎng)基可以用于基因工程選育轉(zhuǎn)入含青霉素抗性基因的大腸桿菌，B正確；C、由于此培養(yǎng)基中加入了青霉素，絕大多數(shù)細(xì)菌不能在此培養(yǎng)基上生長，因此此培養(yǎng)基不可以用來檢測自來水中細(xì)菌含量是否符合飲用水標(biāo)準(zhǔn)，C錯(cuò)誤；D、此培養(yǎng)基屬于鑒定大腸桿菌的人工合成培養(yǎng)基，D錯(cuò)誤。故選B。7．下列關(guān)于統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法的敘述，正確的是（

）A．顯微鏡直接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示B．當(dāng)樣品稀釋度足夠高時(shí)，一個(gè)活菌會(huì)形成一個(gè)菌落C．為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選用菌落密度較大的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)D．采用平板劃線法和稀釋涂布平板法都可以對培養(yǎng)基中的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)【答案】B【詳解】A、利用顯微鏡進(jìn)行直接計(jì)數(shù)不分區(qū)活、死菌，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和，稀釋涂布平板法的統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)，A錯(cuò)誤；B、當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，一個(gè)活菌會(huì)形成一個(gè)菌落，B正確；C、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選取菌落數(shù)在30300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，C錯(cuò)誤；D、采用平板劃線法不能對培養(yǎng)基中的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤。故選B。8．有關(guān)“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)，下列相關(guān)敘述正確的是（）A．培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源，其上生長的都是能分解尿素的細(xì)菌B．培養(yǎng)一段時(shí)間后，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分會(huì)減少，pH會(huì)降低C．稀釋涂布平板進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)屬于菌種密度的直接計(jì)數(shù)方法D．牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基接種稀釋液后同時(shí)培養(yǎng)，判斷選擇培養(yǎng)基是否起選擇作用【答案】D【詳解】A、某些固氮菌不需要培養(yǎng)基提供氮源，但能在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上生長，A錯(cuò)誤；B、由于分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，所以培養(yǎng)一段時(shí)間后培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分會(huì)減少，分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH會(huì)升高，B錯(cuò)誤；C、稀釋涂布平板進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)屬于菌種密度的間接計(jì)數(shù)方法，通過顯微鏡的計(jì)數(shù)（如細(xì)菌計(jì)數(shù)板）是直接計(jì)數(shù)，C錯(cuò)誤；D、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基接種稀釋液后同時(shí)培養(yǎng)，目的是判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，若對照組培養(yǎng)基上的菌落數(shù)大于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，則證明選擇培養(yǎng)基起到了選擇作用，D正確。故選D。?環(huán)節(jié)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)【情景材料】尿素[CO(NH2)2]含氮量高，化學(xué)性質(zhì)相對穩(wěn)定，是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中一種重要的氮肥。尿素施人土壤后，會(huì)被土壤中的某些細(xì)菌分解成NH3，NH3再轉(zhuǎn)化為NO3、NH+等被植物吸收。而這些細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕?，脲酶催化尿素分解產(chǎn)生NH3，NH3可作為細(xì)菌生長的氨源。土壤中含有能分解尿素的細(xì)菌，我們?nèi)绾畏蛛x它們?每克土壤樣品究竟含有多少這樣的細(xì)菌?實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)請你根據(jù)前面學(xué)過的微生物的選擇培養(yǎng)、數(shù)量測定的知識以及下面的資料，思考有關(guān)問題，然后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，并寫出詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案。[資料一]土壤取樣細(xì)菌適宜在酸堿度接近中性的潮濕土壤中生長，絕大多數(shù)分布在距地表3~8cm的土壤層。因此，取樣時(shí)一般要鏟去表層土。在城市，常見的是公園里、街道旁、花盆中的土壤;在農(nóng)村，則容易收集到農(nóng)田或菜園里的土壤。你打算選擇什么樣的土壤做實(shí)驗(yàn)?zāi)?[資料二]樣品的稀釋測定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用1x104、1x105和1x106倍稀釋的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)。測定王壤中細(xì)菌的總量和能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎?如果不同，你打算選用多大的稀釋范圍?當(dāng)你第一次做這個(gè)實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，可以將稀釋的范圍放寬一點(diǎn)。例如，可以將1x103~1x107倍稀釋的稀釋液分別涂布到平板上培養(yǎng)，以保證能從中選擇出菌落數(shù)為30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。[資料三]微生物的培養(yǎng)與觀察不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。細(xì)菌一般在30~37℃的溫度下培養(yǎng)1~2d。本實(shí)驗(yàn)中，我們可以每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。一般來說，在相同的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。請仔細(xì)觀察你所分離到的菌落，最好以表格的形式將不司菌落的特征(如形狀、大小和顏色等)記錄下來。【問題探究】1.如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來，培養(yǎng)基的配方該如何設(shè)計(jì)?2．在稀釋涂布平板法中，為何需要涂布3個(gè)平板？3．在用稀釋涂布平板法對微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的理論依據(jù)是什么？4．稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法對微生物計(jì)數(shù)產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)誤差如何？試分析原因。5.得到的尿素分解菌鑒定的原理？6.如何判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用？【答案】1.利用以尿素作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌2.作為重復(fù)實(shí)驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)時(shí)取平均值，以減少偶然因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的說服力。3.當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。4.稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)的值比實(shí)際值小，原因是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落；顯微計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)的結(jié)果比實(shí)際值大，原因是顯微鏡下無法區(qū)分細(xì)胞的死活，計(jì)數(shù)時(shí)包括了死細(xì)胞。5.在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成了NH3。NH3會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果pH升高，指示劑將變紅，則可初步說明該種細(xì)菌能夠分解尿素。6.同一稀釋度的菌液同時(shí)接種到牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，觀察同兩種培養(yǎng)基的菌落數(shù)，牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上的菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基的，說明有篩選作用。典例精講【例1】日前微博傳言屏幕比馬桶按鈕單位面積上的細(xì)菌多，為辨別真?zhèn)危瑑呻娨暸_利用微生物培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，過程及結(jié)果如下。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性B．為排除實(shí)驗(yàn)操作過程中產(chǎn)生的污染，需要設(shè)置對照組C．本實(shí)驗(yàn)采用稀釋涂布平板法接種D．兩個(gè)報(bào)道結(jié)果不同，可能是因?yàn)槿迎h(huán)境不同【答案】A【詳解】A、培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需將pH調(diào)至中性或微堿性，A錯(cuò)誤；B、需要設(shè)立對照組，因?yàn)椴荒芘懦龑?shí)驗(yàn)操作、培養(yǎng)過程中、滅菌中等環(huán)節(jié)是否產(chǎn)生污染，而設(shè)置對照組則可以體現(xiàn)是否存在污染和污染程度，以確保實(shí)驗(yàn)過程的可靠，B正確；C、由圖可知，該實(shí)驗(yàn)的接種方法為稀釋涂布平板法，C正確；D、取樣環(huán)境不同、取樣時(shí)間不同、取樣量的差異都可能影響最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，D正確。故選A?！纠?】下列有關(guān)微生物分離、培養(yǎng)和計(jì)數(shù)的敘述，正確的是（

）A．分離土壤中微生物時(shí)，需要先對土壤滅菌，再進(jìn)行培養(yǎng)B．測定土壤中細(xì)菌數(shù)量時(shí)，一般選用1×103～1×106倍的稀釋液C．測定土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)目，常用稀釋涂布平板法或平板劃線法進(jìn)行計(jì)數(shù)D．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，一個(gè)活菌會(huì)形成一個(gè)菌落【答案】D【詳解】A、分離土壤中微生物時(shí)，不能先對土壤滅菌，因?yàn)闇缇赡軞⑺滥康木N而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，A錯(cuò)誤；B、測定土壤中細(xì)菌數(shù)量時(shí)，一般選用104～106倍的稀釋液，B錯(cuò)誤；C、測定土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)目，常用稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)，平板劃線法不適宜進(jìn)行計(jì)數(shù)，C錯(cuò)誤；D、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，常用稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，一個(gè)活菌會(huì)形成一個(gè)菌落，D正確。故選D?！纠?】原油中含有大量有害的、致癌的多環(huán)芳烴，土壤中有些細(xì)菌可以利用原油中的多環(huán)芳烴作為碳源，在培養(yǎng)基中形成分解圈。為篩選出能高效降解原油的菌株并投入除污，某小組同學(xué)設(shè)計(jì)了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。下列有關(guān)實(shí)驗(yàn)的敘述，不正確的是（

）A．應(yīng)配制來源于被原油污染土壤的土壤稀釋液備用B．配制以多環(huán)芳烴為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基C．將土壤稀釋液滅菌后接種到選擇培養(yǎng)基上D．在選擇培養(yǎng)基上能形成分解圈的可能為所需菌種【答案】C【詳解】A、篩選能夠利用多環(huán)芳烴為碳源的菌種，應(yīng)在被原油污染的土壤中獲取，所以應(yīng)配制來源于被原油污染的土壤稀釋液作為菌液進(jìn)行接種，A正確；B、配制選擇性培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基與通用培養(yǎng)基成分的主要區(qū)別應(yīng)該是以原油（多環(huán)芳烴）為唯一碳源，這樣在該培養(yǎng)基上只有能分解原油的微生物能在該培養(yǎng)基上生長，而其他微生物的生長被抑制，B正確；C、在無菌環(huán)境下，將土壤稀釋液接種到選擇培養(yǎng)上，若將土壤稀釋液滅菌后會(huì)殺死原有菌種，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，C錯(cuò)誤；D、題意顯示，有些細(xì)菌可以利用原油中的多環(huán)芳烴為碳源，在培養(yǎng)基中形成分解圈”，據(jù)此可知，在選擇性培養(yǎng)基上能形成分解圈的即為所需菌種，D正確。故選C?！纠?】稀釋涂布平板法是微生物培養(yǎng)中的一種常用的接種方法．下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．操作中需要將菌液進(jìn)行一系列的濃度梯度稀釋，每個(gè)稀釋度至少涂3個(gè)平板，并計(jì)算平均值，找到菌落數(shù)為30300個(gè)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)B．需將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基表面，并且涂布均勻C．不同濃度的菌液均可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落D．操作過程中對培養(yǎng)基和涂布器等均需進(jìn)行嚴(yán)格滅菌處理【答案】C【詳解】A、為減少計(jì)數(shù)誤差，在稀釋涂布過程中，需要將菌液進(jìn)行一系列的濃度梯度稀釋，每個(gè)稀釋度至少涂3個(gè)平板，并計(jì)算平均值，找到菌落數(shù)為30300個(gè)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，A正確；B、涂布平板時(shí)，需要將不同稀釋度的菌液分別均勻地涂布到固體培養(yǎng)基表面，B正確；C、只有稀釋度足夠高的菌液才可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，C錯(cuò)誤。D、稀釋涂布過程中，需對培養(yǎng)基和涂布器等進(jìn)行嚴(yán)格滅菌處理，排除培養(yǎng)基和涂布器中雜菌的干擾，D正確。故選C?！纠?】下列是關(guān)于“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是（

）A．利用稀釋涂布平板法準(zhǔn)確估計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)南♂尪菳．若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照C．在土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)采用稀釋涂布平板法D．計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)選擇菌落數(shù)為30300之間的平板，取平均值進(jìn)行計(jì)數(shù)【答案】B【詳解】A、利用稀釋涂布平板法準(zhǔn)確估計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)南♂尪龋♂尡稊?shù)太低，菌落太多會(huì)長在一起，稀釋倍數(shù)太高，平板上菌落數(shù)目過少，都不易進(jìn)行計(jì)數(shù)，A正確；B、若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需設(shè)置接種了的沒有選擇作用的細(xì)菌通用的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作對照，B錯(cuò)誤；C、在土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)采用稀釋涂布平板法，C正確；D、計(jì)數(shù)時(shí)通常選擇菌落數(shù)在30300之間的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，D正確。故選B?！纠?】下列關(guān)于微生物的培養(yǎng)與計(jì)數(shù)的描述正確的是（

）①分離分解尿素的細(xì)菌要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基②對微生物計(jì)數(shù)可以使用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種微生物③使用顯微鏡直接計(jì)數(shù)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果比樣品中的實(shí)際活菌數(shù)偏低④在某一濃度下涂布三個(gè)平板，若三個(gè)平板統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)差別不大，則以它們的平均值作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果⑤進(jìn)行微生物培養(yǎng)時(shí)要每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落的數(shù)目⑥獲得菌落數(shù)目為30~300的平板就說明實(shí)驗(yàn)操作成功A．①④⑤ B．②③⑥ C．②④⑤ D．③⑤⑥【答案】A【詳解】①分離分解尿素的細(xì)菌要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，這樣可以獲得能夠利用尿素的細(xì)菌，而其他不能利用尿素的微生物將無法生長，①正確；②對微生物計(jì)數(shù)只能使用稀釋涂布平板法來接種微生物，而平板劃線法不能用于計(jì)數(shù)，②錯(cuò)誤；③使用顯微鏡直接計(jì)數(shù)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果比樣品中的實(shí)際活菌數(shù)偏高，因?yàn)樵诶迷摲椒ㄓ?jì)數(shù)時(shí)無論菌體的死活均計(jì)數(shù)在內(nèi)，③錯(cuò)誤；④在某一濃度下涂布三個(gè)平板，若三個(gè)平板統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)差別不大，則以它們的平均值作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果，這樣可以減小使用誤差，④正確；⑤進(jìn)行微生物培養(yǎng)時(shí)要每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落的數(shù)目，這樣可以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足，導(dǎo)致某些菌體未記入總數(shù)，⑤正確；⑥如得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30～300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)，⑥錯(cuò)誤。故選A?！纠?】在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，甲同學(xué)從對應(yīng)106培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。下列有關(guān)敘述，出現(xiàn)科學(xué)性錯(cuò)誤的是A．甲同學(xué)出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是由于土樣不同，也可能是操作過程出了問題B．可以將甲同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染C．將其他同學(xué)用與甲同學(xué)一樣的土壤進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與甲同學(xué)一致，則可以證明甲同學(xué)無誤D．B、C選項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)思路都遵循了實(shí)驗(yàn)的對照原則【答案】D【詳解】甲同學(xué)獲得的菌落遠(yuǎn)大于其他同學(xué)，可能是由于所取的土樣不同，也可能操作過程被污染，A正確；污染可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底，或操作過程沒有保證無菌操作，將甲同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染，B正確；若是土樣不同造成的，讓其他同學(xué)用與甲同學(xué)一樣的土壤進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與甲同學(xué)一致，則可以證明甲同學(xué)操作正確，C正確；B選項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)思路遵循了實(shí)驗(yàn)的對照原則，C選項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)思路遵循了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性原則，D錯(cuò)誤；故選D?！纠?】（多選）營養(yǎng)缺陷性菌株是野生型菌株經(jīng)過人工誘變或自發(fā)突變失去合成某種成長因子的能力，只能在補(bǔ)充了相應(yīng)的生長因子的基本培養(yǎng)基中才能正常生長的變異菌株。某研究小組對酵母菌用紫外線照射后將其接種到甲培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基上，一段時(shí)間后將甲培養(yǎng)皿的菌落影印接種（不改變菌落位置）到乙、丙兩培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基中，進(jìn)一步培養(yǎng)得到如下圖所示結(jié)果。下列分析正確的是（

）A．接種到甲培養(yǎng)皿采用的是稀釋涂布平板法B．甲、丙兩培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基C．甲培養(yǎng)皿中菌落數(shù)有可能比接種的酵母菌數(shù)少D．甲、乙、丙三個(gè)培養(yǎng)皿都可能存在營養(yǎng)缺陷型【答案】AC【詳解】A、甲培養(yǎng)皿的菌落均勻分布，接種方法應(yīng)為稀釋涂布平板法，A正確；B、甲、丙培養(yǎng)基菌落數(shù)目多，包括野生型酵母菌菌株和某種營養(yǎng)缺陷型酵母菌菌株，乙培養(yǎng)皿菌株是某種營養(yǎng)缺陷型酵母菌菌株，乙培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基，甲和丙是加入了同種營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基，B錯(cuò)誤；C、由于基因突變具有不定向性，接種到甲培養(yǎng)皿的酵母菌可能還有其他營養(yǎng)缺陷型，且有些菌落不一定由一個(gè)酵母菌形成，所以，甲培養(yǎng)皿中菌落數(shù)有可能比接種的酵母菌數(shù)少，C正確；D、乙培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基，形成的菌落只可能是野生型菌落，D錯(cuò)誤。故選AC。要點(diǎn)歸納1．選擇培養(yǎng)基是指允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。2．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基分離能分解尿素的細(xì)菌。3．為確保結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。4．當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。5．統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。6.三種篩選方法的特點(diǎn)及舉例方法特點(diǎn)舉例利用微生物的營養(yǎng)特點(diǎn)進(jìn)行選擇培養(yǎng)通過控制培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分，使某種微生物能生長，其他微生物不能生長利用只含有尿素一種氮源的培養(yǎng)基，可篩選出分解尿素的細(xì)菌利用某種化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行的選擇培養(yǎng)在完全培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì)，利用加入的化學(xué)物質(zhì)對微生物產(chǎn)生的影響，抑制某些微生物，同時(shí)選擇所需的微生物加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌利用培養(yǎng)條件進(jìn)行的選擇培養(yǎng)改變微生物的培養(yǎng)條件將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)可以得到耐高溫的微生物7.直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法比較項(xiàng)目直接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法原理利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌主要用具顯微鏡、細(xì)菌計(jì)數(shù)板培養(yǎng)基計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)菌體本身培養(yǎng)基上菌落數(shù)優(yōu)點(diǎn)計(jì)數(shù)方便、操作簡單計(jì)數(shù)的是活菌缺點(diǎn)死菌、活菌都計(jì)算在內(nèi)操作較復(fù)雜，有一定誤差計(jì)算公式每毫升原液含菌數(shù)＝每小格平均菌體數(shù)×400×10000×稀釋倍數(shù)每毫升原液含菌數(shù)＝培養(yǎng)基上平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)÷涂布液體積1．為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上接種尿素分解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是（

）

A．圖示采用的接種方法為平板劃線法和稀釋涂布平板法B．培養(yǎng)基中的尿素被分解后，可使酚紅指示劑變?yōu)榧t色C．該實(shí)驗(yàn)結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的D．可用干熱滅菌法對盛有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿和試管等進(jìn)行滅菌【答案】B【詳解】A、據(jù)圖可知，圖中的微生物接種方法是平板劃線法，A錯(cuò)誤；B、培養(yǎng)基中的尿素被分解后呈堿性，可使酚紅指示劑變?yōu)榧t色，B正確；C、該接種方法中隨著劃線次數(shù)增加，菌落數(shù)目減少，該實(shí)驗(yàn)Ⅲ區(qū)有單菌落，可以達(dá)到菌種純化目的，C錯(cuò)誤；D、可用濕熱滅菌法對盛有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿和試管等進(jìn)行滅菌，D錯(cuò)誤。故選B。2．幽門螺桿菌（Hp）生存于人體胃的幽門部位，能夠引起慢性胃炎等胃部疾病。尿素在酶的作用下分解產(chǎn)生NH3和CO2。體檢時(shí)常用14C呼氣試驗(yàn)來診斷測試者是否感染Hp，測試者口服含14C標(biāo)記的尿素膠囊，一段時(shí)間后通過測定呼出的氣體是否含有14CO2來診斷是否感染Hp。醫(yī)務(wù)工作者也可以采集胃病患者樣本進(jìn)行微生物的純化操作，判斷是否感染Hp。下列相關(guān)分析錯(cuò)誤的是（

）A．呼氣試驗(yàn)的前提是Hp能合成和分泌脲酶，從而催化尿素分解.B．對樣本進(jìn)行微生物的純化操作時(shí)，一般采用固體培養(yǎng)基C．篩選Hp的培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源，能抑制雜菌生長D．在培養(yǎng)基中可加入醋酸洋紅液來鑒定是否分離得到了Hp【答案】D【詳解】A、幽門螺桿菌（Hp）要能產(chǎn)生脲酶，14C標(biāo)記的尿素進(jìn)入胃后才能在其產(chǎn)生的脲酶的催化下能分解生成NH3和14CO2，一段時(shí)間后通過測定呼出的氣體是否含有14CO2才能診斷是否感染Hp，A正確；B、對Hp進(jìn)行純化需要得到Hp單菌落，所以需要用到固體培養(yǎng)基，B正確；C、培養(yǎng)基應(yīng)以尿素作為唯一氮源，可以允許能分解尿素的微生物（Hp）在此培養(yǎng)基中生長，同時(shí)抑制或阻止其他不能利用尿素的微生物的生長，C正確；D、細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素，D錯(cuò)誤。故選D。3．下列與某實(shí)驗(yàn)小組分離產(chǎn)脲酶菌的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)相關(guān)的說法，不合理的是（）A．可選擇富含尿素的土壤作為樣品來分離目的菌株B．能分解酚紅指示劑使其褪色的是產(chǎn)脲酶菌株C．富集培養(yǎng)的目的是增加目的菌的濃度D．在選擇培養(yǎng)基中添加尿素作為唯一氮源【答案】B【詳解】AD、為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，可選擇富含尿素的土壤作為樣品來分離目的菌株，尿素作為唯一氮源，含脲酶的微生物在該土壤能生長，AD正確；B、在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的pH升高，酚紅指示劑將變紅，因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，能對分離的菌種做進(jìn)一步鑒定，B錯(cuò)誤；C、富集培養(yǎng)的目的是增加目的菌的濃度，以增加目的菌種數(shù)量，C正確。故選B。4．圖示為分離以尿素為氮源的微生物實(shí)驗(yàn)的其中一個(gè)培養(yǎng)皿上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。培養(yǎng)基中加了酚紅，圖中的陰影部分實(shí)際為紅色。下列對結(jié)果的分析正確的是（

）

A．菌落A能產(chǎn)生分解尿素的脲酶B．菌落C利用尿素的能力大于菌落BC．尿素為微生物提供了碳源和氮源D．能產(chǎn)生脲酶的微生物均不能將該酶分泌至細(xì)胞外【答案】B【詳解】A、由圖可知，只有菌落B和菌落C周圍出現(xiàn)紅色圈，說明菌落B和菌落C能產(chǎn)生分解尿素的脲酶，A菌落周圍沒出現(xiàn)紅色圈，所以菌落A不能產(chǎn)生分解尿素的脲酶，A錯(cuò)誤；B、由于菌落C周圍的紅色圈比菌落B的大，說明菌落C利用尿素的能力大于菌落B，B正確；C、尿素分解菌可分泌胞外酶——脲酶，將尿素分解形成NH3和CO2。因?yàn)樵摼鸀楫愷B(yǎng)型生物，不可利用尿素分解形成的CO2，所以尿素僅向尿素分解菌提供氮源，而不能提供碳源，C錯(cuò)誤；D、能產(chǎn)生脲酶的微生物能將該酶分泌至細(xì)胞外，并將細(xì)胞外的尿素分解，D錯(cuò)誤。故選B。5．如下圖為研究人員從紅棕壤中篩選高效分解尿素細(xì)菌的意圖，有關(guān)敘述不正確的是（

）A．步驟③純化分解尿素的細(xì)菌的原理是將聚集的細(xì)菌分散，以獲得單細(xì)胞形成的菌落B．配制步驟②、③的培養(yǎng)基都要進(jìn)行嚴(yán)格滅菌C．步驟④挑取③中不同種的菌落分別接種，比較細(xì)菌分解尿素的能力D．步驟③采用涂布平板法接種，并需向牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入尿素【答案】D【詳解】A、以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，利用涂布分離法將聚集的細(xì)菌分散，以獲得單細(xì)胞形成的菌落是純化分解尿素的細(xì)菌的原理，A正確；B、配制步驟②、③的培養(yǎng)基時(shí)，為防止雜菌污染，應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格滅菌，B正確；C、經(jīng)過③篩選、純化分解尿素的細(xì)菌，但不同菌分解尿素的能力不同，因此需要挑取③中的不同種的菌落接種于④中，比較細(xì)菌分解尿素的能力，C正確；D、要篩選出能高效分解尿素的細(xì)菌，所選用的培養(yǎng)基要以尿素為唯一氮源，但牛肉膏和蛋白胨中都含有氮源，因此步驟③所用的培養(yǎng)基中不能含有牛肉膏、蛋白胨，D錯(cuò)誤。故選D。6．下列有關(guān)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)描述錯(cuò)誤的是（）A．土壤中的細(xì)菌，絕大多數(shù)分布在距離地表約3～8cm的土壤中，取樣時(shí)一般鏟去表層土B．測定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用102、103、104倍數(shù)的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)C．取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的信封在使用前都需要滅菌D．在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁操作【答案】B【詳解】A、土壤中的細(xì)菌，絕大多數(shù)分布在距離地表約3～8cm的土壤中，因此在取樣時(shí)一般要鏟去表層土，A正確；B、土壤中細(xì)菌比真菌多，在測定土壤中細(xì)菌的數(shù)量時(shí)，一般選用104、105和106倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，B錯(cuò)誤；C、為了防止雜菌污染，取土壤用的小鐵鏟和盛土樣的信封在使用前都要滅菌，C正確；D、在稀釋土壤溶液的過程中，為了防止雜菌污染，每一步都要在火焰旁操作，D正確。故選B。7．某興趣小組從土壤中分離分解尿素的細(xì)菌，流程如圖所示，關(guān)于該過程的說法錯(cuò)誤的是（）

A．該實(shí)驗(yàn)配制的培養(yǎng)基中不含牛肉膏和蛋白胨B．圖中菌液稀釋10倍時(shí)所加的無菌水的量都為9mLC．實(shí)驗(yàn)的合理順序?yàn)椤胺Q量→溶解→滅菌→調(diào)pH→倒平板→接種土壤樣本→菌落計(jì)數(shù)”D．圖中接種過程所用的工具經(jīng)灼燒滅菌，冷卻后使用【答案】C【詳解】A、從土壤中分離分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)該使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，牛肉膏和蛋白胨中含有氮源，因此該實(shí)驗(yàn)配制的培養(yǎng)基中不含牛肉膏和蛋白胨，A正確；B、圖中菌液稀釋10倍時(shí)所加的無菌水的量都為9mL，B正確；C、培養(yǎng)基配置的基本過程為計(jì)算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板，因此實(shí)驗(yàn)的合理順序?yàn)椤坝?jì)算→稱量→溶解→調(diào)pH→滅菌→倒平板→接種土壤樣本→菌落計(jì)數(shù)”，C錯(cuò)誤；D、圖中接種過程所用的工具是涂布器，涂布器需經(jīng)灼燒滅菌，冷卻后使用，D正確。故選C。8．某生物興趣小組完成了“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”的實(shí)驗(yàn)，具體操作流程如圖所示。下列相關(guān)敘述不正確的是（

）A．純化培養(yǎng)階段使用選擇培養(yǎng)基，應(yīng)以尿素為唯一氮源B．梯度稀釋時(shí)可用移液管或微量移液器進(jìn)行操作C．中間試管涂布的3個(gè)平板的菌落平均數(shù)小于160D．由圖中數(shù)據(jù)可知10g土樣中的菌株數(shù)約為1.6×108個(gè)【答案】C【詳解】A、在含有尿素為唯一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，只有能夠分解尿素的微生物才能生長繁殖，故純化培養(yǎng)階段使用選擇培養(yǎng)基，應(yīng)以尿素為唯一氮源，A正確；B、用移液管或微量移液器吸取菌液進(jìn)行梯度稀釋操作，B正確；C、稀釋倍數(shù)越高，平板上出現(xiàn)的菌落數(shù)越少，所以中間試管涂布的3個(gè)平板的菌落平均數(shù)應(yīng)大于160個(gè)，C錯(cuò)誤；D、據(jù)圖示可知，平板中平均有160個(gè)菌落，該過程中稀釋的倍數(shù)為104，最后只取了0.1mL進(jìn)行涂布稀釋，因此由圖示菌落計(jì)數(shù)結(jié)果可知，10克土樣中的菌株數(shù)約為160×104÷0.1×10=1.6×108個(gè)，D正確。故選C。9．某研究小組進(jìn)行了“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)，操作流程如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）

A．需要配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基并用濕熱滅菌方法滅菌B．甲平板上的一個(gè)菌落一般來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活細(xì)菌C．上述實(shí)驗(yàn)中制備3個(gè)平板可避免因偶然因素導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差D．5號試管的計(jì)數(shù)結(jié)果表明每克土壤中的活菌數(shù)約為1.7×107個(gè)【答案】D【詳解】A、分離尿素分解菌，要制備以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，且培養(yǎng)基要進(jìn)行濕熱滅菌，A正確；B、稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)的原理是通過對菌液，使得培養(yǎng)基上一個(gè)菌落由一個(gè)活細(xì)菌繁殖而來，通過對菌落計(jì)數(shù)來反映細(xì)菌數(shù)量，B正確；C、上述實(shí)驗(yàn)中制備3個(gè)平板是為了避免因偶然因素導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差，C正確；D、每克土壤中活菌數(shù)：（168+175+167）30.1106＝1.7×109個(gè)，D錯(cuò)誤。故選D。10（多選）．下列有關(guān)“探究1g土壤中有多少能分解尿素的細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)”敘述正確的是（

）A．一般選用1×104、1×105和1×106倍稀釋的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，初次做實(shí)驗(yàn)范圍可放寬B．證明選擇培養(yǎng)基起到了選擇作用，則需要接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基做對照C．證明選擇培養(yǎng)基未被污染，則需要設(shè)置空白培養(yǎng)基做對照D．通過選擇培養(yǎng)基篩選出來的細(xì)菌都能分解尿素【答案】ABC【詳解】A、一般選用1×104、1×105和1×106倍稀釋的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，能得到在30300范圍的有效數(shù)據(jù)，初次做實(shí)驗(yàn)范圍可放寬，A正確；B、要證明選擇培養(yǎng)基起到了選擇作用，則需要接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基做對照，如果兩個(gè)培養(yǎng)基上長的菌落不同，則說明選擇培養(yǎng)基有選擇作用，B正確；C、證明選擇培養(yǎng)基未被污染，則需要設(shè)置空白培養(yǎng)基做對照，如果空白對照平板上不長菌，說明沒有被污染，C正確；D、通過選擇培養(yǎng)基篩選出來的細(xì)菌也有可能是利用了空氣中N2作N源的菌，D錯(cuò)誤。故選ABC。11．尿素最初是從人的尿液中發(fā)現(xiàn)的，但隨著科學(xué)家成功實(shí)現(xiàn)尿素的體外人工合成，尿素的生產(chǎn)逐漸走向工業(yè)化，尿素也逐步成為一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。下圖是土壤中分解尿素的細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)的基本流程，請回答有關(guān)問題：（1）配制圖中所用培養(yǎng)基，在熔化瓊脂時(shí)需要不斷用玻璃棒攪拌，目的是。配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中后，可采用方法進(jìn)行滅菌。（2）該過程采用的接種方法是，培養(yǎng)一段時(shí)間要能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，從操作層面需要滿足兩個(gè)條件：一是；二是涂布時(shí)要盡量做到均勻涂布。（3）該實(shí)驗(yàn)中的選擇培養(yǎng)基對分解尿素的細(xì)菌具有選擇作用，其原理是。若要判斷選擇培養(yǎng)基