《洗滌用纖維素酶制劑》

1QB/TXXXX—XXXX洗滌用纖維素酶制劑本文件規(guī)定了洗滌用纖維素酶制劑的感官和理化指標(biāo)、微生物指標(biāo)等要求，描述了相應(yīng)的試驗方法，規(guī)定了檢驗規(guī)則、標(biāo)志、包裝、運輸、貯存和保質(zhì)期的內(nèi)容，給出了便于技術(shù)規(guī)定的產(chǎn)品分類。本文件適用于微生物發(fā)酵、提純等工藝制得的洗滌用纖維素酶制劑的生產(chǎn)、檢驗和銷售。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲運圖示標(biāo)志GB/T4789.2食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定GB/T4789.3食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗大腸菌群計數(shù)GB/T6368表面活性劑水溶液pH值的測定電位法GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB15258化學(xué)品安全標(biāo)簽編寫規(guī)定GB/T42239.1—2022洗滌用酶制劑第1部分：堿性蛋白酶3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1纖維素酶cellulase在各種酶組分的協(xié)同作用下，能降解纖維素，使之變成纖維寡糖、纖維二糖和葡萄糖的酶。3.2纖維素酶活力cellulaseactivity1g固體酶（或1mL液體酶），在50℃,pH為7.00條件下，1min水解羧甲基纖維素鈉釋放出相當(dāng)于1μg葡萄糖的還原糖量為一個酶活力單位。4產(chǎn)品分類按產(chǎn)品形態(tài)分為液體劑型和固體劑型。5要求5.1感官和理化指標(biāo)產(chǎn)品的感官和理化指標(biāo)應(yīng)符合表1的規(guī)定。2QB/TXXXX—XXXX表1感官和理化指標(biāo)白色、灰白色或黃褐色或其他顏 ——a酶活力標(biāo)示值由供需雙方按合同規(guī)定或生產(chǎn)商明示，酶活力值測定按附錄A仲裁。酶活力只適用于對同5.2微生物指標(biāo)適用于食品用洗滌劑的酶制劑，微生物指標(biāo)應(yīng)符合表2規(guī)定。表2微生物指標(biāo)6試驗方法6.1通則除非另有說明，在分析中僅使用確認為分析純的試劑和GB/T6682中規(guī)定的三級或以上的水。6.2外觀取適量樣品，置于干燥潔凈的透明實驗器皿內(nèi)，在非直射光條件下進行觀察。6.3酶活力按附錄A進行。6.4干燥失重按GB/T42239.1—2022中6.5進行。6.5pH按GB/T6368的規(guī)定進行。6.6粒度按GB/T42239.1—2022附錄C進行。6.7菌落總數(shù)按GB4789.2的規(guī)定進行。3QB/TXXXX—XXXX6.8大腸菌群按GB4789.3的規(guī)定進行。7檢驗規(guī)則7.1檢驗分類7.1.1出廠檢驗出廠檢驗項目為表1規(guī)定的外觀、酶活力。當(dāng)適用于食品用洗滌劑產(chǎn)品時，增加表2規(guī)定的項目。7.1.2型式檢驗型式檢驗為表1規(guī)定的全部項目，當(dāng)適用于食品用洗滌劑產(chǎn)品時，增加表2規(guī)定的項目。在下列情況下應(yīng)進行型式檢驗：a)正常生產(chǎn)時，應(yīng)定期進行型式檢驗，一般情況每年一次；b)生產(chǎn)工藝、生產(chǎn)設(shè)備、原材料、催化劑等變化或不正常，以及生產(chǎn)管理要素（包括人員素質(zhì)）的變化可能影響產(chǎn)品質(zhì)量和性能時；c)長期停產(chǎn)后再恢復(fù)生產(chǎn)時；d)出廠檢驗結(jié)果與上次的型式檢驗有較大差異時；e)市場監(jiān)督管理機構(gòu)、使用單位提出型式檢驗要求時。7.2組批與抽樣原則7.2.1組批產(chǎn)品按批交付和抽樣驗收，一次交付的同一類型、規(guī)格、批號的產(chǎn)品組成交付批。7.2.2檢驗產(chǎn)品應(yīng)經(jīng)生產(chǎn)廠的質(zhì)量檢驗部門按本文件規(guī)定的檢驗方法檢驗合格，并出具產(chǎn)品質(zhì)量檢驗合格證方可出廠。收貨單位應(yīng)在到貨一個月內(nèi)，憑合格證驗收，必要時可按7.2.3抽樣驗收。7.2.3抽樣根據(jù)批量大小，按表3確定樣本大小，從批中隨機抽取樣本單位。取樣前應(yīng)將選定的樣本包裝中的樣品混合均勻，在保證均勻的前提下方可取樣。表3成品抽樣的樣品量23>50047.3判定規(guī)則與復(fù)檢外觀指標(biāo)檢驗不合格，可重新抽樣檢驗，復(fù)檢結(jié)果仍不合格則判該批產(chǎn)品不合格。理化指標(biāo)檢驗結(jié)果按修約值比較法修約后與指標(biāo)比較判定合格與否，如有一項指標(biāo)不合格，可重新取兩倍箱樣本采取樣品，對不合格項進行復(fù)檢，復(fù)檢結(jié)果仍不合格，則判該批產(chǎn)品不合格。交收雙方因檢驗結(jié)果不同，不能取得協(xié)議時，可商請仲裁檢驗，仲裁檢驗結(jié)果為最后依據(jù)。產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗及仲裁機構(gòu)抽查檢驗時不進行二次抽樣。7.4仲裁4QB/TXXXX—XXXX收貨單位如發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品質(zhì)量不符合本文件規(guī)定的要求，應(yīng)在到貨1個月內(nèi)向生產(chǎn)者交涉。若因檢驗結(jié)果不同，不能取得協(xié)議時，雙方應(yīng)按7.2.3取樣。取樣總量不應(yīng)少于450g，將選取的試樣仔細混勻后,分別裝入3個潔凈干燥的樣品瓶中，簽封。標(biāo)簽上應(yīng)注明產(chǎn)品名稱、規(guī)格、批號、生產(chǎn)者名稱、取樣日期、取樣人。交收雙方各執(zhí)一份，第三份簽封后，備仲裁檢驗用。樣品存放于暗處，按照建議貯存溫度貯存，保存期1個月。仲裁檢驗結(jié)果為最后依據(jù)。8標(biāo)志、包裝、運輸、貯存和保質(zhì)期8.1標(biāo)志產(chǎn)品的外包裝使用符合GB/T191要求的標(biāo)志。產(chǎn)品的包裝上應(yīng)貼有牢固的標(biāo)簽。標(biāo)簽內(nèi)容應(yīng)包括產(chǎn)品名稱、凈含量、生產(chǎn)者和（或）經(jīng)銷者的名稱、地址和聯(lián)系方式、生產(chǎn)日期和保質(zhì)期、貯存條件、批號及其他需要標(biāo)示的內(nèi)容?；瘜W(xué)品安全標(biāo)簽內(nèi)容應(yīng)符合GB15258的要求。8.2包裝產(chǎn)品的內(nèi)包裝和（或）包裝容器的內(nèi)涂料應(yīng)符合相關(guān)規(guī)定。8.3運輸產(chǎn)品在運輸過程中應(yīng)輕拿輕放，不應(yīng)倒置，嚴防雨淋和曝曬，不應(yīng)在箱上踩踏和堆放重物。運輸工具應(yīng)清潔、無毒、無污染。嚴禁與有毒、有害、有腐蝕性的物質(zhì)混裝混運。8.4貯存產(chǎn)品應(yīng)貯存在陰涼干燥的環(huán)境下。不應(yīng)與有毒、有害、有腐蝕性的物質(zhì)同存。堆垛要采取必要的防護措施，堆垛高度要適當(dāng)，避免損壞運輸包裝。8.5保質(zhì)期保質(zhì)期由生產(chǎn)企業(yè)自定。在規(guī)定的運輸和包裝貯存條件下，保質(zhì)期內(nèi)的酶活力不應(yīng)低于標(biāo)示酶活力。超過保質(zhì)期的產(chǎn)品仍具有使用價值，使用時重新測定酶活力。5QB/TXXXX—XXXX（規(guī)范性）酶活力的測定A.1方法概要在一定溫度和pH條件下，纖維素酶水解纖維素產(chǎn)生單糖和寡糖。具有還原性末端的寡糖和有還原基團的單糖在沸水浴條件下與3,5－二硝基水楊酸（DNS）試劑發(fā)生顯色反應(yīng)，用分光光度計于波長540nm下測定溶液的吸光度。酶活力與吸光度成正比，由此可計算纖維素酶活力。A.2試劑A.2.1羧甲基纖維素鈉（CMC，RnOCH2COONa），25℃時2%（質(zhì)量分數(shù)）的水溶液，黏度為800mPa?s~1200mPa?s。因底物影響較大，每批羧甲基纖維素鈉使用前要進行自控。A.2.23，5－二硝基水楊酸（C7H4N2O7）。A.2.3酒石酸鉀鈉（KOCO(CHOH)2COONa·4H2O）。A.2.4無水亞硫酸鈉（Na2SO3）。A.2.5苯酚（C6H5OH）。A.2.6氫氧化鈉（NaOH）。A.2.7磷酸二氫鉀（KH2PO4）。A.3儀器A.3.1恒溫水浴鍋：精度為±0.2℃。A.3.2移液器。A.3.3pH計：精度為0.01pH單位。A.3.4磁力加熱攪拌器。A.3.5磁力攪拌器。A.3.6分析天平：精度為0.0001g。A.3.7分光光度計：10mm比色皿。A.4溶液A.4.1磷酸緩沖液（pH=7）稱取磷酸二氫鉀6.8g，加1mol/L氫氧化鈉溶液29.1mL，用蒸餾水稀釋至1000mL即得。A.4.210mg/mLCMC溶液配制稱取CMC1.0g（稱準(zhǔn)至0.001g），緩慢加入緩沖液（A.4.1）60mL，溶解8h，稀釋完全后定容到100mL容量瓶中，標(biāo)記為10mg/mLCMC溶液，同時標(biāo)記配制日期。4℃條件下保存，有效期7d。A.4.310mg/mL標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液配制稱取在105℃條件下烘干至恒重的無水葡萄糖1.0g（稱準(zhǔn)至0.001g），置于80mL緩沖液（A.4.1）中攪拌溶解，待完全溶解后定容至100mL。標(biāo)記為10mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，同時標(biāo)記配制日期，4℃條件下保存。A.4.4DNS試劑的配制6QB/TXXXX—XXXX稱取3,5－二硝基水楊酸31.50g（稱準(zhǔn)至0.001g），緩慢加入5000mL蒸餾水中，不斷攪拌，水浴加熱至45℃,逐步加入1000mL氫氧化鈉溶液（200gNaOH,用水溶解定容到1000mL），不斷攪拌至溶液清澈透明（在加入氫氧化鈉溶液過程中，溶液溫度不應(yīng)超過48℃)。再逐步加入四水酒石酸鉀鈉910.0g、苯酚25.0g、無水亞硫酸鈉25.0g，繼續(xù)45℃水浴加熱，同時補水3000mL，不斷攪拌，至上述物質(zhì)完全溶解后，冷卻至室溫，并定容至10000mL。用濾布過濾，將濾液儲存于棕色瓶中，標(biāo)識配制日期和名稱，避光，室溫保存7d后可使用，有效期6個月（可按照自己的需求按比例縮小配制）。A.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取8支試管按表A.1加入相關(guān)試液后再加入1.5mLDNS試劑，充分搖勻，置沸水浴中反應(yīng)5min。迅速冷卻至室溫，用緩沖液（A.4.1）定容至5.0mL，用0號試管試液作為對照，在540nm波長下測其他各試管試液的吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，以葡萄糖含量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。表A.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制01234567緩沖液加入量(μL）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液加入量(μL）0葡萄糖含量(μg/mL）0A.6樣品溶液的制備液體酶：用緩沖液稀釋原酶液，控制待測酶液的吸光度落在0.29~0.33之間，所測得的酶活數(shù)據(jù)相對穩(wěn)定。固體酶：稱取固體酶顆粒1.0g（稱準(zhǔn)至0.001g）溶于80mL緩沖液（A.4.1）中（稀釋倍數(shù)小于等于500倍的直接用緩沖液溶解）；室溫磁力攪拌10min；用100mL容量瓶定容。6000r/min離心5min，取上清液測試，控制待測酶液的吸光度落在0.29~0.33之間，所測得的酶活數(shù)據(jù)相對穩(wěn)定。A.7試驗步驟A.7.1取四支試管各加入0.5mLCMC底物，與待測酶液一起于（50±0.2）℃水浴鍋中預(yù)熱5min。A.7.2在第一、二、三支試管中各加入0.5mL待測液，并計時，于（50±0.2）℃水浴鍋中反應(yīng)15min。A.7.3反應(yīng)完后在四支試管中均加入1.5mL的DNS試劑，取出并搖勻.A.7.4將待測酶液與四支試管一起放在沸水浴中反應(yīng)5min。A.7.5取出試管后，在第四支試管中補加0.5mL的待測酶液。A.7.6迅速冷卻之室溫，用緩沖液（A.4.1）定容到5.0mL。以第四支試管試液為對照，在540nm波長條件下測第一、二、三支試管試液的吸光度，吸光度在0.29~0.33之間為宜。若不在此范圍，應(yīng)改變稀釋倍數(shù)重新測定。或按照圖A.1所列步驟分別進行空白和樣品試驗。QB/TXXXX—XXXXA.8結(jié)果計算從標(biāo)準(zhǔn)曲線上