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備案號：56303-2017DB22DB22/T2688.3—2017飼料中三種致病菌檢測微滴數(shù)字PCR法第3部分：產(chǎn)氣莢膜梭菌DeterminationofthreepathogenicbacteriainfeedbydropletdigitalPCRmethodPart3：Clostridiumperfringens吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015給出的規(guī)則1警示——使用本標(biāo)準(zhǔn)的人員應(yīng)有正規(guī)實驗室工作的實踐經(jīng)驗。本標(biāo)準(zhǔn)并未指出所有可能的安全問本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中產(chǎn)氣莢膜梭菌檢測微滴數(shù)字PCR法的試劑和材料、儀器和設(shè)備、樣品、試驗步GB4789.1食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗總則GB4789.13-2012食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗WS/T230-2002臨床診斷中聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技理及陽性微滴的個數(shù)與比例得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。本標(biāo)準(zhǔn)通針特異性引物和探針進(jìn)行數(shù)字4.5裂解液：2%CTAB(cetyltrithylammoniumbromide，十六烷基三甲基溴化銨)，Tris(trishydroxymethylaminomethane，三羥甲基氨基甲烷)，1.4mol/LNaClEDTA(ethylenediaminetetr24.10異丙醇。探針-5＇-FAM-TCATCATTCAACCAAAGGAG按照GB/T14699.1對飼料進(jìn)行采樣（6.1產(chǎn)氣莢膜），311143反應(yīng)條件：95℃/5min，1個循環(huán)；95℃/15s，60℃/1min，40個循環(huán)；98℃/1根據(jù)數(shù)字PCR體系中陰性分割體系的終點熒光值設(shè)定熒光的閾值限。閾值限需要對空白和陽性擴(kuò)增8.3.1樣品基因沒有得到擴(kuò)增，擴(kuò)增終點熒光信號小于閾值，可判定樣品結(jié)果8.3.2樣品基因得到擴(kuò)增，擴(kuò)增終點熒光
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