蛋白質(zhì)分子量測(cè)定 液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用法 征求意見稿

3蛋白質(zhì)分子量測(cè)定液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用法本文件規(guī)定了使用液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行蛋白質(zhì)分子量的測(cè)量以及對(duì)測(cè)量數(shù)據(jù)進(jìn)行分本文件適用于重組蛋白質(zhì)、組織提取蛋白質(zhì)以及合《中國(guó)藥典》三部-人用重組單克隆抗體制品總論GB/T37849-2019液相色譜飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用儀性能測(cè)定方法根據(jù)分子式，按組成元素的平均原子量計(jì)算所得的分子量。如碳元素按12.0107計(jì)算，氫元素按43.6飛行時(shí)間質(zhì)譜儀time-of-flightmassspectrometer飛行時(shí)間質(zhì)譜儀采用飛行時(shí)間質(zhì)量分析器進(jìn)行離子質(zhì)荷比分離。由離子源產(chǎn)生的離子在加速電場(chǎng)作用后以恒定速度經(jīng)過高真空無場(chǎng)離子漂移管到達(dá)離子接收器。離子的速度與離子的質(zhì)荷比平方根成以離子阱作為質(zhì)量分析器的質(zhì)譜分析儀器。離子阱質(zhì)量分析器是基于四極場(chǎng)理論對(duì)帶電粒子進(jìn)行3.8質(zhì)量軸校準(zhǔn)calibration質(zhì)譜儀采集數(shù)據(jù)時(shí)掃描的質(zhì)荷比范圍，測(cè)定時(shí)應(yīng)根據(jù)待測(cè)蛋白質(zhì)的分子量大小及離子化特性選擇蛋白的原始質(zhì)譜圖通過軟件算法，將一系列連續(xù)多價(jià)態(tài)帶正電荷的質(zhì)譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成不帶電荷的蛋4分析方法原理到蛋白的多價(jià)態(tài)質(zhì)譜數(shù)據(jù)，并經(jīng)解卷積化處理后獲得蛋白55.1水5.4標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)5.5色譜柱6.2質(zhì)譜儀6.3安裝環(huán)境及儀器性能為保證儀器測(cè)量結(jié)果穩(wěn)定，安裝環(huán)境溫度應(yīng)控制在15-28℃,溫度波動(dòng)在2℃以內(nèi)；相對(duì)濕度必須中的蛋白組分進(jìn)行相對(duì)定量分析，還需避免處理過6選擇反相分離模式，應(yīng)根據(jù)蛋白性質(zhì)選擇合適的色8.2測(cè)試前準(zhǔn)備8.3進(jìn)樣選擇合適的進(jìn)樣量，一般進(jìn)樣量為1~10μg。為避免多余樣品對(duì)質(zhì)譜儀的污染，原則上應(yīng)在可獲得8.4數(shù)據(jù)分析解卷積化等處理，獲得蛋白的實(shí)測(cè)分子量（單同位素分子量或平均分子量知分子量的類似蛋白質(zhì)參照物進(jìn)行分子量測(cè)定以排除儀器可能存在的問題；還可結(jié)合相關(guān)研究數(shù)據(jù)評(píng)9數(shù)據(jù)質(zhì)量的保證9.2.1.2原始質(zhì)譜圖79.2.1.3