HIV病原學(xué)與實驗室生物安全

教學(xué)ppt1獲得性免疫缺陷綜合征（Acquiredimmunodeficiencysyndrome,AIDS）人類免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirus,HIV)2一、HIV病原學(xué)教學(xué)ppt3HIV的結(jié)構(gòu)病毒呈球形，直徑100～120nm，電鏡下可見一致密的圓錐狀核心核心：

2個逆轉(zhuǎn)錄酶-將RNA轉(zhuǎn)錄成DNA。蛋白酶(p11)-將大片斷蛋白切小。整和酶(p32)-將HIV原病毒DNA插入宿主細(xì)胞DNA中。核衣殼蛋白(p24,p17)包膜：

脂質(zhì)膜：“借用”宿主細(xì)胞的細(xì)胞膜。

gp120-病毒的膜蛋白，可與被感染細(xì)胞CD4相結(jié)合部分。

gp41-病毒的膜蛋白，跨脂質(zhì)膜的部分。HIV基因結(jié)構(gòu)HIV基因組由兩條單鏈RNA組成，每個RNA基因組約為9.7kb，編碼9個基因。3個結(jié)構(gòu)基因gag、env和pol，6種調(diào)控基因tat,vif,vpr,vpx(vpu),nef,rev。polgagenvvifLTRrevvprtatvpurevtatnefLTRP55gp160P17P24P7P6P10P66/51P15P32gp120gp414gag基因編碼病毒的核心蛋白；pol基因編碼病毒復(fù)制所需要的酶類（逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和蛋白酶）；env基因所編碼病毒包膜蛋白。調(diào)控基因編碼輔助蛋白，調(diào)節(jié)病毒蛋白合成和復(fù)制。polgagenvvifLTRrevvprtatvpurevtatnefLTRP55gp160P17P24P7P6P10P66/51P15P32gp120gp415HIV-1通過gp120與靶細(xì)胞表面CD4分子和趨化因子受體結(jié)合第二受體與HIV有關(guān)的輔助受體有2類：

CC型輔助受體：CCR1,CCR2b,CCR3,CCR5

CXC型輔助受體：CXCR4CCR5是最主要的第二受體，第二受體基因在不同人種中遺傳的突變率有明顯差異。7現(xiàn)有兩型HIV：HIV-1和HIV-2種類HIV-1 M（Major）組 A~D、F~H、J和K

O（Outlier）組 O

N（Non-Mnon-O）組 NHIV-2 A→H特點不同亞型傳播途徑和致病性不一,對抗-HIV藥物引起耐藥不同亞型重組意義流行規(guī)律、傳播途徑、診斷質(zhì)量、藥物與疫苗評估8BEAABBEECCB'B'B'B'B'B'B'B'B'B'B'B'B'EB'B'B'CB'B'EEELasaHaErbinShenYangChangChunHuhehaoteBeijingTianJingXiNingShiJiazhuangTaiYuanYinChuanLanZhouXianHeFeiZhengZhouJiNanB'NanJingShangHaiNanChangWuHanHangZhouChangShaFuZhouGuangZhouNanNingGuiYangHaiKouKunMingChengDuTaiBeiIndiaMyanmarThailandLaosVietNamUrumqi/CB'ECB'CC/B'CC/B'C/B'ABC9急性感染期無癥狀期艾滋病期10二、HIV感染史感染艾滋病病毒后1～2周左右。HIV大量復(fù)制,CD4細(xì)胞急劇下降，50～70%的感染者出現(xiàn)HIV病毒血癥和免疫系統(tǒng)急性損傷所產(chǎn)生的臨床癥狀。主要表現(xiàn)在全身性以及皮膚、神經(jīng)系統(tǒng)和腸道的癥狀。11WeeksCD4TCells/mm3PlasmaViremiaTiter036211110912100200300400500600700800900100011001100Years345678901:21:41:81:161:321:641:1281:2561:512PrimaryInfectionPossibleacuteHIVsyndromeWidedisseminationofvirusSeedingoflymphoidorgansClinicalLatencyConstitutionalsymptomsOpportunisticdiseaseDeath12急性HIV感染后，絕大多數(shù)有一個較長的、存在個體差異的無癥狀期，8-10年左右。有5%左右的HIV-1感染者沒有任何臨床癥狀，而且能夠維持正常的免疫狀態(tài)達(dá)12年以上，稱之為感染HIV-1的長期不感染者。13WeeksCD4TCells/mm3PlasmaViremiaTiter036211110912100200300400500600700800900100011001100Years345678901:21:41:81:161:321:641:1281:2561:512PrimaryInfectionPossibleacuteHIVsyndromeWidedisseminationofvirusSeedingoflymphoidorgansClinicalLatencyConstitutionalsymptomsOpportunisticdiseaseDeath14在長時間的無癥狀期或表現(xiàn)為ARC以后，病人可以出現(xiàn)不明原因的漸進性消瘦、發(fā)熱、乏力，繼而發(fā)生“機會性”感染，如卡氏肺囊蟲性肺炎或中樞神經(jīng)系統(tǒng)的感染，這是大多數(shù)AIDS病人死亡的直接原因。未經(jīng)治療者平均生存期為12～18個月。15WeeksCD4TCells/mm3PlasmaViremiaTiter036211110912100200300400500600700800900100011001100Years345678901:21:41:81:161:321:641:1281:2561:512PrimaryInfectionPossibleacuteHIVsyndromeWidedisseminationofvirusSeedingoflymphoidorgansClinicalLatencyConstitutionalsymptomsOpportunisticdiseaseDeath16教學(xué)ppt17HIV感染的三種臨床類型教學(xué)ppt18典型進展者

在感染早期，其免疫功能未受損害，但在8～10年內(nèi)免疫能力逐漸下降，最后發(fā)展成為艾滋病。教學(xué)ppt192-6weeksmeanof10yearsAsymptomaticphaseFlu-likeDiseaseSymptom-aticphaseAIDS10005002000CD4Tcells/mlInfectionSeroconversionDeathCD4TcelldepletionHAARTHIV感染的臨床過程(典型進展)教學(xué)ppt20快速進展者

CD4細(xì)胞計數(shù)在2～5年內(nèi)迅速下降?？焖龠M展者中最顯著的特征是HIV感染后一直維持較高的病毒載量，而且分離的HIV有均一性。教學(xué)ppt21HIV感染的臨床過程(快速進展)2-6weeksmeanof5

yearsAsymptomaticphaseFlu-likeDiseaseSymptom-aticphaseAIDS10005002000CD4Tcells/mlInfectionSeroconversionDeathCD4TcelldepletionHAART教學(xué)ppt22

長期存活者(長期不進展者)

維持健康狀態(tài)8-10年以上，CD4細(xì)胞計數(shù)維持正常。8～10%。目前最長已達(dá)17年。這些無癥狀者可在血友病患者、靜脈吸毒者、異性接觸者和新生兒中發(fā)現(xiàn)。HIV感染的臨床過程(緩慢進展)教學(xué)ppt23HIV感染的臨床過程(緩慢進展)2-6weeksmeanof20yearsAsymptomaticphaseFlu-likeDiseaseS10005002000CD4Tcells/mlInfectionSeroconversionDeathCD4TcelldepletionAHAART三、實驗室生物安全24教學(xué)ppt25保證實驗室的生物安全條件和狀態(tài)不低于容許水平避免實驗室人員、來訪人員、社區(qū)及環(huán)境受到不可接受的損害符合相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)等對實驗室保證生物安全責(zé)任的要求實驗室生物安全laboratorybiosafety教學(xué)ppt26實驗室的生物安全管理三個寶典：《病原微生物實驗室生物安全管理條例》《實驗室生物安全通用要求》GB19489—2008《人間傳染的病原微生物名錄》教學(xué)ppt27教學(xué)ppt28教學(xué)ppt2945Humanimmunodeficiencyvirus（HIV）typy1and2virus艾滋病毒（I型和II型）逆轉(zhuǎn)錄病毒科第二類BSL-3ABSL-3BSL-2BSL-1BSL-1AUN2814僅病毒培養(yǎng)物為A類46InhangapivirusInhangapi病毒彈狀病毒科第二類BSL-3ABSL-3BSL-2BSL-1BSL-1AUN2814序號病毒名稱危害程度分類實驗活動所需生物安全實驗室級別運輸包裝分類f備注病毒培養(yǎng)a動物感染實驗b未經(jīng)培養(yǎng)的感染材料的操作c滅活材料的操作d無感染性材料的操作eA/BUN編號英文名中文名分類學(xué)地位1Alastrimvirus類天花病毒痘病毒科第一類BSL-4ABSL-4BSL-3BSL-2BSL-1AUN2814

人間傳染的病原微生物名錄教學(xué)ppt30《名錄》涉及的病原微生物種類教學(xué)ppt31

應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)主管部門發(fā)布的生物危害分類名錄，在風(fēng)險評估的基礎(chǔ)上，確定實驗室的生物安全防護水平?！度碎g傳染的病原微生物名錄》生物安全防護水平的確定教學(xué)ppt32HIV在外界環(huán)境中的生存能力弱對消毒劑敏感對臭氧敏感對紫外線不敏感56℃,30min滅活干燥環(huán)境：數(shù)分鐘內(nèi)死亡教學(xué)ppt33實驗室采用的消毒滅菌條件表面消毒：75%乙醇噴灑或擦拭浸泡消毒：0.5%次氯酸30min空氣消毒：30mg/m3臭氧30min24%甲醛熏蒸12h高壓蒸汽滅菌條件：121℃30min教學(xué)ppt34HIV傳播途徑不經(jīng)空氣傳播，血、性、母嬰垂直傳播。經(jīng)破損皮膚感染是HIV職業(yè)暴露的主要途徑。禁入：免疫力低下、感冒發(fā)燒者、皮膚破損者禁用：銳器：剪刀、針頭、刀片、玻璃器材穿個人防護裝備，戴雙層乳膠手套，“檢漏”教學(xué)ppt35生物安全實驗室標(biāo)準(zhǔn)的良好工作行為建立并執(zhí)行準(zhǔn)入制度。實驗室技術(shù)培訓(xùn)合格生物安全培訓(xùn)合格教學(xué)ppt36

對個人行為的要求，如在實驗室工作區(qū)不要飲食、抽煙、處理隱形眼鏡、使用化妝品、存放食物等教學(xué)ppt37個人防護裝備

1、眼鏡（安全鏡、護目鏡）

2、口罩、面罩、防毒面具

3、帽子

4、防護衣(實驗服、隔離衣、連體衣、圍裙)5、手套

6、鞋套

7、聽力保護器等

教學(xué)ppt38工作時穿防護服。在處理生物危險材料時，穿著適用的指定防護服。離開實驗室前按程序脫下防護服。用完的防護服要消毒后再洗滌。工作用鞋要防水、防滑、耐扎、舒適。教學(xué)ppt39防護面罩一次性面罩

教學(xué)ppt40緊急洗眼（常用裝置）便攜式洗眼裝置固定式洗眼裝置教學(xué)ppt41清潔地面的時間視工作安排而定，不在日常工作時間做常規(guī)清潔工作。用浸有清潔劑的濕拖把清洗地板是最常用的方法；家用型吸塵器不適用于生物安全實驗室使用；不要使用掃帚等掃地。GB19489—2008教學(xué)ppt42氣溶膠

離心、研磨、混合、劇烈振蕩或混勻、超聲破碎、動物的鼻腔內(nèi)接種、從動物或胚胎中收集感染性組織、吸管吹吸混勻、摔碎菌液瓶等均可產(chǎn)生。80%的實驗室操作可產(chǎn)生氣溶膠。

正確使用生物安全柜可以有效減少由于氣溶膠暴露所造成的實驗室感染以及培養(yǎng)物交叉污染。生物安全柜同時也能保護環(huán)境。教學(xué)ppt43職業(yè)暴露：指醫(yī)務(wù)人員從事診療、護理、檢驗等工作過程中意外被艾滋病病毒感染者或者艾滋病病人的血液、體液污染了皮膚或者粘膜，或者被含有艾滋病病毒的血液、體液污染了的針頭及其他銳器刺破皮膚，有可能被艾滋病病毒感染的情況。摘自《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》（2009）教學(xué)ppt44影響針頭刺傷后的危險性因素傷口的深度有可見的血液從傷口溢出針頭刺破了靜脈或動脈污染源來自于晚期艾滋病病毒感染者(病毒載量高)教學(xué)ppt45暴露物是否是體液、含血體液、其他污染物或其沾染器械是否其它污染物血液或含血液體暴露的類型粘膜或可能有損傷的皮膚不需PEP只沾染完整的皮膚刺、割傷皮膚暴露量不需PEP危險度量小暴露時間短1級暴露低危：如表皮擦傷、針刺等量大暴露時間長2級暴露高危：如傷口較深、儀器上可見血液等2級暴露3級暴露步驟1：確定暴露級別（ExposureCode）

教學(xué)ppt46步驟2：確定HIV暴露源嚴(yán)重程度

HIV暴露源級別不明HIV暴露源級別1（輕度）HIV陰性HIV陽性暴露源的HIV情況如何？無需PEP暴露源不明暴露源的HIV滴度低（無癥狀、CD4計數(shù)高）暴露源的HIV滴度高（有癥狀、CD4計數(shù)低）HIV暴露源級別2（重度）教學(xué)ppt47步驟3：根據(jù)暴露級別和暴露源級別選擇預(yù)防性用藥的推薦處理方案暴露級別暴露源級別預(yù)防性用藥推薦處理方案11不一定使用ＰＥＰ，可由職業(yè)暴露者本人根據(jù)利害比較作出決定12使用基本用藥程序21使用基本用藥程序22使用強化用藥程序31或2使用強化用藥程序原因不明原因不明使用基本用藥程序教學(xué)ppt48基本用藥程序：兩種逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，使用常規(guī)治療劑量，連續(xù)服用28天。如雙汰芝（AZT與3TC聯(lián)合制劑300mg/150mg）1片/次，每日2次，用藥時間為連續(xù)服用28天?；騾⒖伎共《局委熤笇?dǎo)方案。本程序適用于輕度低危暴露。強化用藥程序：基本用藥程序加一種蛋白酶抑制劑，如佳息患或利托那韋。均使用常規(guī)治療劑量(400mg/片，2片/次，Q8h)，連續(xù)服用28天。本程序適用于嚴(yán)重暴露。教學(xué)ppt49職業(yè)暴露后，存在感染艾滋病毒的危險性，但實際感染艾滋病毒的機率是很低的。研究資料表明，醫(yī)務(wù)工作者被艾滋病病毒污染的針具刺傷后，發(fā)生艾滋病病毒感染的機率為0.33％（20/6135），粘膜表面暴露的感染艾滋病病毒的機率為0.09％（1/1143）教學(xué)ppt50最主要的職業(yè)是護士和實驗