蔬菜、水果農(nóng)藥殘留快速檢測操作指南

PAGE15-附1：揚州市蔬菜、水果農(nóng)藥殘留快速檢測操作指南（試行2011）本指南僅適用于蔬菜、水果有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測。一、抽樣及預(yù)處理1、抽樣同一批次同一品種隨機抽取適量樣品作為檢樣，其中葉菜類取不同植株葉片（至少8片～10片葉子）為樣本，瓜果類、根類、莖類從表皮至果肉1厘米～1.5厘米處取樣。一份檢驗，一份備查。2、預(yù)處理（1）、檢樣應(yīng)做好標(biāo)記，并及時記錄；（2）、取待檢樣，擦凈表面泥土，切或剪成1厘米左右碎片。二、檢測方法——丁酰膽堿酯酶抑制率法或乙酰膽堿酯酶抑制率法1、試劑、器具及儀器（1）緩沖液、顯色劑、底物、丁酰膽堿酯酶等試劑按說明書的要求進(jìn)行配置和貯存。（2）樣品杯、試管、滴管、洗瓶、移液槍或移液管、不銹鋼剪刀、比色皿、擦鏡紙。（3）農(nóng)藥殘留快速檢測儀。（4）天平或臺秤（精確度0.1g）。（5）冰箱。（6）恒溫裝置按儀器使用說明書要求配備。2、儀器性能（1）穩(wěn)定性：儀器預(yù)熱10分鐘后，數(shù)字顯示值漂移在3分鐘內(nèi)不超過0.04(V)。（2）透射比準(zhǔn)確度:±1.0%。（3）工作環(huán)境溫度:5～40℃。（4）測定精度：≤5%。（5）檢測通道：8通道。（6）測量范圍：0.00%～100.00%（抑制率）。（7）檢出下限：0.1～3.0mg/kg。（8）檢測時間：30分鐘以內(nèi)（含前處理）。3、操作步驟（1）開機后設(shè)置或檢查儀器工作（顯色反應(yīng)時間3分鐘），并校準(zhǔn)預(yù)熱儀器。（2）稱取處理好的2g（非葉菜類稱取4g）樣品放入樣品杯中，加入20mL緩沖液，振蕩1~2分鐘進(jìn)行提取，靜置3~5分鐘后取出上清液待用。（3）空白對照：在小試管內(nèi)加入50uL酶液、3mL緩沖液、50uL顯色劑，于37~38℃下放置30分鐘后再加入50uL底物，立即倒入比色皿中上機測試。（4）樣品測試：在小試管內(nèi)加入50uL酶液、3mL樣品提取液、50uL顯色劑，于37~38℃下放置30分鐘后加入50uL底物，立即倒入比色皿中上機測試。（5）3分鐘顯色反應(yīng)后儀器自動顯示或打印酶抑制率，同一條件下應(yīng)作一個空白對照。4、結(jié)果判定當(dāng)樣品提取液對酶的抑制率小于說明書規(guī)定值時，樣品為陰性結(jié)果；當(dāng)樣品提取液對酶的抑制率大于或等于說明書規(guī)定值時，樣品為陽性結(jié)果，表示產(chǎn)品中有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在。陽性結(jié)果的樣品應(yīng)重復(fù)檢測2次以上。5、注意事項（2）試劑切勿冷凍至結(jié)冰，使用前請搖晃均勻。用完再取，應(yīng)防止其它物質(zhì)的污染，未用完的試劑可放在清洗干凈的瓶中并用封口膜封口，在0℃～4℃環(huán)境條件下保存。（3）蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時，可采取整株（體）蔬菜浸提。對一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株（體）蔬菜浸提的方法，減少色素的干擾。樣品不宜剪切過碎，浸提時間不宜過長，以免滲出葉綠素等物質(zhì)，影響顯色結(jié)果。

附2：揚州市食用菌中熒光增白劑快速檢測操作指南（試行2011）1、抽樣隨機抽取同一批次同一品種鮮食用菌或干食用菌適量作為檢樣，并用不含熒光物質(zhì)的包裝材料盛裝樣品，及時檢測。2、試劑、器具及儀器（1）臺式紫外分析儀：具備254納米和365納米的紫外光；（2）數(shù)碼照相機；（3）培養(yǎng)皿。3、操作步驟（1）戴上一次性手套，除去食用菌外包裝，將菌形完整的樣品放入潔凈的培養(yǎng)皿中，再將培養(yǎng)皿擺放在鋪有深色絨布的紫外分析儀臺面上，在避光的條件下打開254納米和365納米的紫外燈，觀察樣品表面是否有可見的紫色或藍(lán)紫色熒光。（2）必要時可用數(shù)碼相機記錄下樣品在紫外燈下的真實影像。4、結(jié)果判定在254納米和365納米的紫外光下，樣品表面無可見的紫色或藍(lán)紫色熒光，樣品為陰性結(jié)果；如果樣品表面有可見紫色或藍(lán)紫色熒光，則判定該樣品含有熒光物質(zhì)，樣品為陽性結(jié)果。陽性結(jié)果的樣品應(yīng)重復(fù)檢測2次以上。5、注意事項（1）抽取樣品時，須戴一次性手套（不含熒光增白劑），每抽取一個樣品，須更換一次性手套，避免樣品產(chǎn)生交叉污染。（2）應(yīng)用不含熒光物質(zhì)的包裝材料盛裝樣品，以免污染樣品。（3）對某些采用熒光增白劑處理過的包裝紙包裝的食用菌，易造成污染，因此須除去所有沾在食用菌上的小紙屑，以免由于紙屑產(chǎn)生的熒光而影響對樣品檢測結(jié)果的判斷。

附3：揚州市畜產(chǎn)品（尿樣）中瘦肉精快速檢測操作指南（試行2011）本指南僅適用于畜產(chǎn)品（尿樣）中鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇?xì)埩袅康目焖贆z測。一、抽樣及預(yù)處理1、抽樣用干燥、潔凈的離心管或適當(dāng)容器采集50mL左右尿液。如果不立即檢測，尿樣在2-8℃冷藏可保存24小時，要注意避免腐敗造成失效或污染。2、預(yù)處理（1）檢樣應(yīng)做好標(biāo)記，并及時記錄；（2）檢測前將樣品溶液恢復(fù)至室溫。二、檢測方法——快速檢測試劑卡法1、試劑、器具及儀器（1）快速檢測試劑卡。（2）冰箱。（3）一次性吸管。（4）離心管或樣品瓶。2、試劑卡技術(shù)指標(biāo)（1）鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺檢測下限為3ng/mL，沙丁胺醇檢測下限為5ng/mL。（2）不同濃度下檢測線的梯度顯著。（3）平行樣的重現(xiàn)性好，基本無差異。（4）檢測時間在5分鐘以內(nèi)。（5）必須設(shè)立質(zhì)量控制線。（6）檢測結(jié)果顯示在30分鐘之內(nèi)無原則性改變。（7）保質(zhì)期2年。3、操作步驟（1）測試前將未開封的檢測卡及尿樣恢復(fù)至室溫。（2）從原包裝中取出檢測卡，打開后應(yīng)在一個小時內(nèi)盡快地使用。（3）將檢測卡平放，用一次性吸管吸取待檢樣品溶液，垂直滴加3滴于加樣孔中，加樣后開始計時。（4）反應(yīng)3～5分鐘后觀察結(jié)果，30分鐘后的結(jié)果無效。4、結(jié)果判定當(dāng)C線顯色，而T線不顯色時判為陽性；當(dāng)C線顯色，同時T線也顯色時判為陰性；當(dāng)C線不顯色時，則無論T線顯色與否，該試劑卡判為無效。陽性結(jié)果的樣品應(yīng)重復(fù)檢測2次以上。5、注意事項（1）檢測卡在室溫下一次性使用，注意未使用產(chǎn)品的防潮保護(hù)，確保封口的緊密度，否則會產(chǎn)生錯誤或者不確定的結(jié)果。（2）自來水、蒸餾水或去離子水不能作為陰性結(jié)果。若需直接檢測標(biāo)準(zhǔn)品，請用陰性豬尿溶液進(jìn)行配制。（3）滴加樣品的過程在一定程度上影響產(chǎn)品的有效判斷，因此，請務(wù)必嚴(yán)謹(jǐn)操作，滴加樣液速度均勻。（4）一次性吸管不可混用，以免交叉污染。（5）檢測時避免陽光直射和空調(diào)、風(fēng)扇直吹。（6）陽性樣品應(yīng)重復(fù)檢測2次以上。

附4：揚州市水產(chǎn)品中孔雀石綠及結(jié)晶紫快速檢測操作指南（試行2011）本指南僅適用于水產(chǎn)品中孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫殘留量的快速檢測。一、抽樣及預(yù)處理1、抽樣同一批次同一品種隨機抽取適量樣品作為檢樣，具體數(shù)量視品種而定。實際操作中需根據(jù)所取樣品的個體大小，在保證最終檢樣量的基礎(chǔ)上，抽取樣品。2、預(yù)處理（1）魚類：清洗后，去頭、骨、內(nèi)臟，取肌肉等可食部分絞碎混合均勻后備用，試樣量為100g。（2）蝦類：清洗后，去蝦頭、蝦皮、腸腺，得到整條蝦肉絞碎混合均勻后備用，試樣量為100g。（3）蟹類：清洗后，取可食部分(肉及性腺)，絞碎混合均勻后備用，試樣量為100g。（4）龜鱉類產(chǎn)品：清洗后，取可食部分，絞碎混合均勻后備用，試樣量為100g。二、檢測方法——快速檢測試劑盒法1、試劑、器具及儀器（1）試劑按說明書的要求進(jìn)行配置和貯存。（2）快速檢測試劑盒。（3）天平或臺秤（精確度0.1g）。（4）冰箱。（5）洗耳球、不銹鋼剪刀、食品攪拌機。2、試劑盒技術(shù)指標(biāo)（1）檢測下限為1ug/kg。（2）可進(jìn)行多殘留分析。（3）平行樣的重現(xiàn)性好，基本無差異。（4）檢測時間在60分鐘以內(nèi)（含前處理）。（5）檢測結(jié)果顯示在30分鐘之內(nèi)無原則性改變。（6）保質(zhì)期1年。3、操作步驟（1）稱取約10g樣品于研缽中,加入樣品提取液后研磨約3~5分鐘，用濾紙過濾后擠干殘渣,收集濾液10mL于100mL量筒中，用蒸餾水定容至30mL。（2）層析柱激活：層析柱在使用前依次加入2mL洗脫劑、5mL蒸餾水，吸耳球上加壓，廢液舍棄。（3）過層析柱：將50mL注射器與層析柱連接，將步驟⑴中收集到的樣液倒入注射筒里，用注射塞加壓，加快流速，建議30mL樣本通過柱子的時間為5~8分鐘，待樣液完全流干，棄去流出液，然后依次加2mL洗滌劑及2mL蒸餾水于層析柱中，吸耳球上加壓，廢液舍棄。（4）觀察結(jié)果：觀察層析柱中吸附劑顏色變化，若吸附劑逐漸形成綠色環(huán)帶，可初步判斷樣本中含有孔雀石綠；若吸附劑逐漸形成紫色環(huán)帶，可初步判斷樣本中含有結(jié)晶紫；加0.8mL洗脫劑于層析柱中，吸耳球上加壓，用離心管1收集流出液,看液體顏色來判斷。（5）衍生化：依次用2mL洗脫劑及2mL蒸餾水于層析柱中，吸耳球上加壓，廢液舍棄，將衍生化試劑加入層析柱中，加入2mL蒸餾水用吸耳球從上口加壓擠干，棄去流出液；將步驟⑷中離心管1的洗脫劑加入柱中,吸耳球上加壓，用離心管2收集流出液,再加0.8mL洗脫劑于層析柱中，吸耳球上加壓，用此離心管2收集混勻。（6）萃?。喝〔襟E⑸中的離心管2，加入0.5mL蒸餾水后,再加入0.5mL萃取劑，扣上管塞混勻靜置,離心管2下層若有明顯的綠色或紫色則可判斷樣品中含有孔雀石綠或結(jié)晶紫，若無明顯的綠色或紫色需進(jìn)一步的判斷。（7）檢測：用1mL注射器取步驟⑹中離心管2中的下層的萃取液(注意不要吸到上層的液體),加到白色點滴板的一個孔上，樣液漸漸揮干，若在孔上形成綠色斑環(huán)說明樣品中含有孔雀石綠，形成紫色斑環(huán)樣品中含有結(jié)晶紫。4、結(jié)果判定萃取液加到點滴板上后，若在孔上形成綠色斑環(huán)或紫色斑環(huán)說明樣品中含有孔雀石綠或結(jié)晶紫，判定為陽性；若在孔上未形成綠色斑環(huán)或紫色斑環(huán)說明樣品中不含有孔雀石綠或結(jié)晶紫，判定為