DB32T 4526-2023 雙孢蘑菇菌種工廠化生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

雙孢蘑菇菌種工廠化生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程發(fā)出布版發(fā)出布版江蘇省市場監(jiān)督管理局Ⅰ前言 Ⅲ 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4技術(shù)要求 5生產(chǎn)工藝 6質(zhì)量控制與檢驗(yàn) 附錄A（資料性）雙孢蘑菇各級菌種的常用培養(yǎng)基配方 附錄B（資料性）雙孢蘑菇各級菌種培養(yǎng)質(zhì)量要求 Ⅲ本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由江蘇省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：江蘇省農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站、江蘇蕈源種業(yè)科技有限公司、江蘇省質(zhì)量和標(biāo)準(zhǔn)化研究院。1雙孢蘑菇菌種工廠化生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了雙孢蘑菇菌種工廠化生產(chǎn)的技術(shù)要求、生產(chǎn)工藝、質(zhì)量控制與檢驗(yàn)及標(biāo)簽、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸和貯存。本文件適用于雙孢蘑菇菌種工廠化生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志GB/T12728食用菌術(shù)語GB19171雙孢蘑菇菌種GB50072冷庫設(shè)計(jì)規(guī)范GB50073潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1742食用菌菌種通用技術(shù)要求3術(shù)語和定義GB/T12728界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。同一來源、同一品種、同一培養(yǎng)基配方、同一天接種、同一培養(yǎng)條件和質(zhì)量基本一致的符合規(guī)定數(shù)量的菌種。4技術(shù)要求4.1菌種廠條件4.1.1廠區(qū)選址地勢高燥、通風(fēng)良好、排水暢通、交通便利。1000m之內(nèi)無規(guī)模養(yǎng)殖的禽畜舍、垃圾和糞便堆積場，24.1.2廠房布局4.1.2.1總體要求應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定。4.1.2.2攤曬場4.1.2.3原材料庫水電方便，空間充足。用于拌料機(jī)、裝袋機(jī)等大型機(jī)具作業(yè)。4.1.2.5滅菌室水電安裝合理，操作安全，應(yīng)用高溫高壓自動(dòng)化控制滅菌柜，滅菌柜進(jìn)、出口分離。4.1.2.6冷卻室配套安裝新風(fēng)輸送系統(tǒng)，冷卻室與外界隔絕，具備空氣萬級凈化度，潔凈、無塵、制冷散熱。應(yīng)符合4.1.2.7接種室配套安裝新風(fēng)輸送系統(tǒng)，新風(fēng)口處新風(fēng)長期開通，保持室內(nèi)風(fēng)壓高于室外。接種平臺(tái)上層流罩下空氣凈化程度應(yīng)達(dá)百級，內(nèi)壁和地面光滑，易于清洗和消毒。應(yīng)符合GB50073的規(guī)定。4.1.2.8培養(yǎng)室配套新風(fēng)輸送系統(tǒng)，空氣凈化程度達(dá)萬級，溫度自動(dòng)控制；內(nèi)壁和房屋頂部光滑，便于清洗和消毒；墻壁厚度適當(dāng)。應(yīng)符合GB50073的規(guī)定。4.1.2.9檢驗(yàn)室配套新風(fēng)輸送系統(tǒng)。應(yīng)符合GB50073的規(guī)定。4.1.2.10冷藏庫應(yīng)符合GB50072的要求。4.2培養(yǎng)容器4.2.1使用原則每批次菌種的容器規(guī)格保持一致。34.2.2母種培養(yǎng)容器使用20mm×200mm規(guī)格玻璃試管，或直徑9cm的培養(yǎng)皿。棉塞應(yīng)使用梳棉或化纖棉，也可用硅膠塞代替棉塞，不可使用脫脂棉。4.2.3原種培養(yǎng)容器使用耐126℃高溫、不影響觀察菌絲生長情況的帶蓋塑料瓶或玻璃瓶，或耐126℃高溫、具孔徑0.2μm~0.5μm透氣膜的聚丙烯塑料袋。4.2.4栽培種培養(yǎng)容器使用尺寸≥18cm×34cm，耐126℃高溫的聚丙烯塑料折角袋，或耐126℃高孔徑透氣膜的聚丙烯塑料袋。4.3培養(yǎng)基原料4.3.1化學(xué)試劑類化學(xué)試劑類原料如硫酸鎂、磷酸二氫鉀等，應(yīng)使用化學(xué)純或以上級別的試劑。4.3.2生物制劑和天然材料類4.4人員要求生產(chǎn)技術(shù)人員、檢驗(yàn)人員應(yīng)取得菌種生產(chǎn)檢驗(yàn)所需相應(yīng)資質(zhì)。5生產(chǎn)工藝5.1工藝流程5.1.1母種生產(chǎn)工藝流程培養(yǎng)基配制→高壓滅菌→冷卻→接種→培養(yǎng)→成品→冷貯。5.1.2原種、栽培種生產(chǎn)工藝流程培養(yǎng)基配制→浸泡→蒸煮→分裝→滅菌→冷卻→接種→培養(yǎng)→成品→裝箱→冷貯→冷鏈運(yùn)輸。5.2培養(yǎng)基配方配方見附錄A。5.3.1原種培養(yǎng)基裝料宜用850mL耐高溫塑料瓶、玻璃瓶，裝料500g后，擦洗瓶口旋緊瓶蓋；或18cm×40cm，具孔徑0.2μm~0.5μm透氣膜的聚丙烯塑料袋，裝料1000g，料裝好后折下袋口與并排的菌袋靠緊。45.3.2栽培種培養(yǎng)基裝料0.5μm~1.5μm透氣膜的聚丙烯塑料袋，裝料2500g，裝料后折下袋口與并排菌袋靠緊。應(yīng)在培養(yǎng)基配制完成后4h內(nèi)進(jìn)行滅菌。母種培養(yǎng)基滅菌條件：0.11MPa~0.12MPa，121℃,50min。原種培養(yǎng)基、栽培種培養(yǎng)基滅菌條件0.14MPa~0.15MPa，2.5h，121℃。裝料容量較大時(shí)，滅菌時(shí)間要適當(dāng)延長。5.5冷卻滅菌完畢并降溫后，將料拖出滅菌柜。待接種的原種瓶（袋）或栽培種瓶（袋經(jīng)冷卻到25℃±1℃,及時(shí)接種。5.6.1接種準(zhǔn)備接種前15h內(nèi)，將接種室室內(nèi)空間和地面進(jìn)行消毒，接種2h前開啟室內(nèi)循環(huán)風(fēng)凈化空氣。接種人員在準(zhǔn)備室穿上防護(hù)工作服，經(jīng)過風(fēng)淋門進(jìn)入接種室。5.6.2接種方法在無菌室內(nèi)百級空氣凈化工作臺(tái)上按無菌操作程序接種。用塑料蓋子的菌種，開蓋接種時(shí)間不超過5s。用無菌透氣膜的聚丙烯塑料袋接種，原種接入一塊約1.5cm×1.5cm母種，栽培種播入約50g菌種，及時(shí)將袋口用封口機(jī)封閉，并將袋內(nèi)菌種與培養(yǎng)料搖勻，整理好菌袋豎立于周轉(zhuǎn)筐中。每一筐培養(yǎng)容器應(yīng)接同一菌株，接種完成后及時(shí)貼好標(biāo)簽。5.6.3接種后處理接種后，要及時(shí)清理，掃除廢物，應(yīng)用吸塵器吸除灰塵，并擦洗消毒傳送帶和地面。不同菌株應(yīng)分區(qū)分室培養(yǎng)。培養(yǎng)室使用前1d~2d，進(jìn)行清潔消毒并開啟新風(fēng)系統(tǒng)。在發(fā)菌12d內(nèi)室內(nèi)溫度控制24℃±1℃,發(fā)菌13d~30d溫度控制21℃±1℃,發(fā)菌30d至菌絲長滿溫度控制19℃±1℃。保持空氣相對濕度60%，二氧化碳濃度5000×10-6，黑暗培養(yǎng)。當(dāng)菌絲長滿時(shí)，應(yīng)及時(shí)整架移入冷庫貯存。56質(zhì)量控制與檢驗(yàn)6.1品種與種源質(zhì)量檢驗(yàn)從具有相應(yīng)技術(shù)資質(zhì)的供種單位引種，且種性清楚。不應(yīng)使用來歷不明、種性不清的菌種和生產(chǎn)性狀未經(jīng)系統(tǒng)試驗(yàn)驗(yàn)證的組織分離物作種源生產(chǎn)的菌種。6.1.2種源質(zhì)量檢驗(yàn)?zāi)阜N生產(chǎn)單位每年在種源進(jìn)入擴(kuò)大生產(chǎn)程序之前，應(yīng)進(jìn)行菌種質(zhì)量和種性檢驗(yàn)，包括純度、活力、菌絲長勢一致性、菌絲生長速度、菌落外觀等，做出菇試驗(yàn)，驗(yàn)證種性。種源出菇試驗(yàn)方法及種源質(zhì)量應(yīng)符合NY/T1742的規(guī)定。6.2擴(kuò)繁移植1支母種擴(kuò)大繁殖不應(yīng)超過20支母種，擴(kuò)繁代數(shù)不應(yīng)超過5代。1支母種移植擴(kuò)大原種不應(yīng)超過6.3滅菌效果檢驗(yàn)?zāi)阜N培養(yǎng)基隨機(jī)抽取3%~5%的試管，直接置于28℃恒溫培養(yǎng)；原種和栽培種培養(yǎng)基按每次滅菌的數(shù)量隨機(jī)抽取1%作為樣品，挑取其中的基質(zhì)顆粒經(jīng)無菌操作接種于PDA培養(yǎng)基中，于28℃恒溫培養(yǎng)。48h后檢查，無微生物長出的為滅菌合格。6.4培養(yǎng)質(zhì)量要求各級菌種培養(yǎng)質(zhì)量要求見附錄B，應(yīng)符合GB19171的規(guī)定。生產(chǎn)各個(gè)環(huán)節(jié)都應(yīng)有詳細(xì)記錄，建立菌種可追溯制度，保存記錄至此批菌種栽培出菇采收結(jié)束。各級菌種都應(yīng)留樣備查，留樣的數(shù)量應(yīng)以每個(gè)批號2支（瓶、袋母種于4℃±1℃貯存；原種和栽培出售的菌種應(yīng)貼標(biāo)簽，注明品種名稱、菌種級別、接種日期、生產(chǎn)單位、地址電話等。外包裝上應(yīng)有防母種的外包裝用木盒或有足夠強(qiáng)度的紙盒，原種和裁培種的外包裝使用有足夠強(qiáng)度的紙箱。盒（箱）6內(nèi)除菌種外的空隙用輕質(zhì)材料填滿塞牢。各級菌種運(yùn)輸時(shí)不應(yīng)與有毒有害物品混裝混運(yùn)。運(yùn)輸中應(yīng)做好防曬、防潮、防雨、防凍、防高溫及防止雜菌污染等措施，當(dāng)氣溫高于20℃時(shí)應(yīng)使用冷鏈運(yùn)送。應(yīng)在干燥、低溫、無陽光直射、無污染的冰箱或冷庫中貯存。母種置于4℃±1℃冰箱、原種和栽培種置于5℃±1℃的冷庫內(nèi)貯存，母種貯存期不超過90d，原種貯存期不超過40d，栽培種貯存期不超過7（資料性）雙孢蘑菇各級菌種的常用培養(yǎng)基配方A.1母種培養(yǎng)基使用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）或綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（CPDA加上3%發(fā)酵草料A.2原種培養(yǎng)基A.2.1小米棉籽殼培養(yǎng)基小米20%~40%，棉籽殼發(fā)酵料55%~75%，生石灰2%，碳酸鈣3%，含水量55%~60%，pH值8~9。A.2.2棉籽殼麥麩培養(yǎng)基棉籽殼和麥麩發(fā)酵料98%，石灰2%，含水量50%~55%，pH值8~9。培養(yǎng)料裝瓶填料要松緊適度，瓶中間打一小孔。A.3栽培種培養(yǎng)基A.3.1小麥棉籽殼紅皮小麥86%，棉籽殼發(fā)酵料10%，生石灰1%，碳酸鈣3%，經(jīng)浸泡后小麥含水量43%，浸泡后的小麥經(jīng)100℃蒸煮，蒸煮后小麥含水量45%，棉籽殼發(fā)酵料含水量52%，pH值8~9。A.3.2小米棉籽殼小米35%，棉籽殼發(fā)酵料60%，生石灰2%，碳酸鈣3%，含水量46%~50%，pH值8（資料性）雙孢蘑菇各級菌種培養(yǎng)質(zhì)量要求雙孢蘑菇各級菌種培養(yǎng)質(zhì)量要求見表B.1。表B.1雙孢蘑菇各級菌種培養(yǎng)質(zhì)量要求菌種菌絲菌落或培養(yǎng)基培養(yǎng)物鏡檢氣味培養(yǎng)周期母種菌絲體潔白或米白、濃密、羽毛狀或葉脈狀，菌絲體表面分泌物菌落邊緣整齊，無膏狀、蠟狀細(xì)菌或酵母菌菌落及霉菌菌落鏡檢菌絲粗壯，無雜菌菌絲及孢子，無蟲及蟲卵有雙孢蘑菇菌種特有的±1℃)下，15d~培養(yǎng)皿）原種菌絲體潔白濃密、生長旺健，培養(yǎng)物表面菌絲體生長均基及菌絲體緊貼瓶壁，無干縮培養(yǎng)物表面無分泌物，無