實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)

Thalassemia地中海貧血是全球最大的單基因遺傳病之一全球有3.5億人為地中海貧血基因攜帶者（占總?cè)丝诘?%）中國南方不同高發(fā)地區(qū)人群攜帶率3~

24%當(dāng)前1頁，共44頁，星期日。地貧的發(fā)病率、地域分布及危害

地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；廣西發(fā)病率為20%；重型地貧給家庭社會(huì)帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和難以估量的精神負(fù)擔(dān)；當(dāng)前2頁，共44頁，星期日。當(dāng)前3頁，共44頁，星期日。中國南方人群地貧基因攜帶率

地區(qū)攜帶率(%)

地貧β地貧合計(jì)廣西17.66.424.0廣東8.52.511.0海南12.72.715.4云南9.8

7.317.1貴州4.25.19.3重慶5.22.07.2當(dāng)前4頁，共44頁，星期日。高發(fā)區(qū)人群遺傳負(fù)荷評(píng)估當(dāng)前5頁，共44頁，星期日。定義地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：

由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導(dǎo)致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時(shí)成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。當(dāng)前6頁，共44頁，星期日。其特點(diǎn)是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或幾種合成減少或不能合成，導(dǎo)致血紅蛋白的組成成分改變。本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶血性貧血。當(dāng)前7頁，共44頁，星期日。地中海貧血的病理生理當(dāng)前8頁，共44頁，星期日。當(dāng)前9頁，共44頁，星期日。α-地中海貧血

重型α地貧（HbBart’s胎兒水腫綜合征）4個(gè)α基因都缺失了(--/--)

，在孕后期或出生后即死亡。當(dāng)前10頁，共44頁，星期日。當(dāng)前11頁，共44頁，星期日。當(dāng)前12頁，共44頁，星期日。當(dāng)前13頁，共44頁，星期日。當(dāng)前14頁，共44頁，星期日。當(dāng)前10頁，共44頁，星期日。當(dāng)前8頁，共44頁，星期日。實(shí)驗(yàn)：紅細(xì)胞滲透脆性檢驗(yàn)其特點(diǎn)是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或幾種合成減少或不能合成，導(dǎo)致血紅蛋白的組成成分改變。6、將混勻后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波長比色，讀取光密度D2。當(dāng)前39頁，共44頁，星期日。當(dāng)前39頁，共44頁，星期日。當(dāng)前1頁，共44頁，星期日。中國南方人群地貧基因攜帶率1、取試管一只，加入A試驗(yàn)液1ml，放37℃，預(yù)熱1-2分鐘。SG-B母液采用氯化鈉制成；3、5分鐘后，加入B試驗(yàn)液1ml。地中海貧血確診試驗(yàn)區(qū)人群攜帶率3~24%當(dāng)前14頁，共44頁，星期日。重度β-地中海貧血當(dāng)前15頁，共44頁，星期日。重度β-地中海貧血骨髓腔擴(kuò)大，骨質(zhì)變薄，頭大、眼間距增寬、鼻梁塌陷、顴骨突起等當(dāng)前16頁，共44頁，星期日。地中海貧血初篩檢查2、加入待測(cè)抗凝全血10μl，立刻混勻，繼續(xù)放在37℃保溫5分鐘。當(dāng)前19頁，共44頁，星期日。無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷是未來發(fā)展的方向。SG-B母液采用氯化鈉制成；溶血％=D1×100％當(dāng)前3頁，共44頁，星期日。3、5分鐘后，加入B試驗(yàn)液1ml。當(dāng)前33頁，共44頁，星期日。常見于地貧或低頻基因攜帶者、嚴(yán)重缺鐵性貧血者，小性紅細(xì)胞增多癥貧血者等。常見于地貧或低頻基因攜帶者、嚴(yán)重缺鐵性貧血者，小性紅細(xì)胞增多癥貧血者等。(β0-thalmajor)4、將上清液輕輕倒入1.當(dāng)前18頁，共44頁，星期日。5%,則高度懷疑為α地貧基因攜帶者;ξ陽性為標(biāo)準(zhǔn)α地貧.重度β-地中海貧血當(dāng)前17頁，共44頁，星期日。重度β-地中海貧血當(dāng)前18頁，共44頁，星期日。重度β-地中海貧血當(dāng)前19頁，共44頁，星期日。重度β-地中海貧血當(dāng)前20頁，共44頁，星期日。重度β-地中海貧血當(dāng)前21頁，共44頁，星期日。當(dāng)前22頁，共44頁，星期日。當(dāng)前23頁，共44頁，星期日。結(jié)論1.廣西人群地貧基因攜帶率很高。一方為基因攜帶者，推薦配偶行基因檢測(cè)。2.父母雙方同類型地貧者需行遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷。3.產(chǎn)前診斷可預(yù)防重癥和中間型地貧患兒出生，結(jié)合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。4.絨毛活檢和羊膜腔穿刺均可行地貧產(chǎn)前診斷，但推薦羊膜腔穿刺。5.無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷是未來發(fā)展的方向。當(dāng)前24頁，共44頁，星期日。羊膜腔穿刺術(shù)當(dāng)前25頁，共44頁，星期日。羊膜腔穿刺術(shù)當(dāng)前26頁，共44頁，星期日。實(shí)驗(yàn)室檢查當(dāng)前27頁，共44頁，星期日。--靶型RBC當(dāng)前28頁，共44頁，星期日。

紅細(xì)胞脆性實(shí)驗(yàn)Erythrocytefragilitytest地貧患者正常人當(dāng)前29頁，共44頁，星期日。血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis當(dāng)前30頁，共44頁，星期日。當(dāng)前31頁，共44頁，星期日。

βchaindisappear(β0-thalmajor)αchaindisappear

(HbBart’shydropfetalis)

12341234

肽鏈分析Peptidechain

analyses

當(dāng)前32頁，共44頁，星期日。單管多重PCR

當(dāng)前33頁，共44頁，星期日。

PCR-ASO當(dāng)前34頁，共44頁，星期日。診斷(Diagnosis)

臨床特點(diǎn)＋實(shí)驗(yàn)室檢查＋父母調(diào)查陽性＋（基因分析）當(dāng)前35頁，共44頁，星期日。

地中海貧血初篩檢查

MCV<80fl和/或MCH<27pg,則高度懷疑為地貧;紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.60):即可懷疑為地貧;HbA2<2.5%,則高度懷疑為α地貧基因攜帶者;ξ陽性為標(biāo)準(zhǔn)α地貧.HbA2>3.5%,則為β地貧基因攜帶者當(dāng)前36頁，共44頁，星期日。

地中海貧血確診試驗(yàn)

地貧診斷基因芯片(Thalachip);地貧基因診斷條膜(反向點(diǎn)雜交)/一管法多重PCRASO寡核苷酸探針點(diǎn)雜交DNA測(cè)序當(dāng)前37頁，共44頁，星期日。鑒別診斷(Differentialdiagnosis)

缺鐵性貧血遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥傳染性肝炎或肝硬化當(dāng)前38頁，共44頁，星期日。實(shí)驗(yàn)：紅細(xì)胞滲透脆性檢驗(yàn)

(試劑盒一管法)當(dāng)前39頁，共44頁，星期日。【檢驗(yàn)原理】貧血癥者常伴有紅細(xì)胞滲透脆性的改變。測(cè)定紅細(xì)胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴(yán)重缺鐵性貧血癥）當(dāng)前40頁，共44頁，星期日?！局饕M成成分】組成：由SG-A母液（紅細(xì)胞滲透脆性檢測(cè)液）；SG-B母液（終止紅細(xì)胞溶血液）；SG-C母液（紅細(xì)胞溶血液）組成；成分：

SG-A母液采用氯化鈉（NaCl）、磷酸氫二鈉（Na2HPO4）、磷酸二氫鈉（NaH2PO4）制成；SG-B母液采用氯化鈉制成；SG-C母液采用皂素（saponin）制成。當(dāng)前41頁，共44頁，星期日?！緲悠芬蟆啃迈r抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD），置2℃~8℃保存。已發(fā)生溶血或有血凝塊的標(biāo)本為不合格樣品。標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成。當(dāng)前42頁，共44頁，星期日。當(dāng)前15頁，共44頁，星期日。2、加入待測(cè)抗凝全血10μl，立刻混勻，繼續(xù)放在37℃保溫5分鐘。當(dāng)前32頁，共44頁，星期日。當(dāng)前13頁，共44頁，星期日。當(dāng)前2頁，共44頁，星期日。標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成。高發(fā)區(qū)人群遺傳負(fù)荷評(píng)估新鮮抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD），置2℃~8℃保存。當(dāng)前39頁，共44頁，星期日。當(dāng)前19頁，共44頁，星期日。βchaindisappear3、5分鐘后，加入B試驗(yàn)液1ml。高發(fā)區(qū)人群遺傳負(fù)荷評(píng)估5ml，混勻，待血液全部溶血（透明紅色）后，將比色杯中已比色的溶液倒入試管中混勻。（注56-64％為溶血率輕度降低）。【實(shí)驗(yàn)操作】1、取試管一只，加入A試驗(yàn)液1ml，放37℃，預(yù)熱1-2分鐘。2、加入待測(cè)抗凝全血10μl，立刻混勻，繼續(xù)放在37℃保溫5分鐘。3、5分鐘后，加入B試驗(yàn)液1ml?；靹颍?000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘。4、將上清液輕輕倒入1.0cm×1.0cm的比色杯中（切勿攪動(dòng)試管底的紅細(xì)胞），于530nm波長讀取光密度D1（以純化水作空白對(duì)照）。（勿倒掉比色杯中的溶液）5、向試管中加入C試驗(yàn)液0.5ml，混勻，待血液全部溶血（透明紅色）后，將比色杯中已比色的溶液倒入試管中混勻。6、將混勻后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波長比色，讀取光密度D2。7、按下列公式計(jì)算出溶血率百分比。溶血

％=D1

×100％D2X1.2