第四章 抗體課件

第四章抗體學(xué)習(xí)內(nèi)容第一節(jié)抗體的結(jié)構(gòu)與功能第二節(jié)抗體的分類及其生物學(xué)功能第三節(jié)抗體的基因及表達第四節(jié)人工制備抗體學(xué)習(xí)要點掌握抗體的結(jié)構(gòu)與功能；掌握單克隆抗體與多克隆抗體的特性。

第四章抗體第一節(jié)抗體的結(jié)構(gòu)與功能一、抗體概念與分布1.抗體（Antibody，Ab）是機體B細胞在抗原刺激下產(chǎn)生的免疫球蛋白。2.免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）指具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白。區(qū)別：

Ab都是Ig，Ig不一定是Ab。第四章抗體3.抗體分布1體液抗體2親細胞抗體(體液,尤其是血清中)(細胞表面)第四章抗體二、抗體的基本結(jié)構(gòu)結(jié)合抗原之前結(jié)合抗原之后TY第四章抗體二、抗體的基本結(jié)構(gòu)第四章抗體V區(qū)內(nèi)氨基酸殘基組成和排列順序極易變化區(qū)為高變區(qū)（CDR區(qū)）。3個高變區(qū)即可組成抗原結(jié)合區(qū)。高變區(qū)第四章抗體第四章抗體三、抗體的功能區(qū)Ig多肽鏈折疊后由二硫鍵連接成的球狀結(jié)構(gòu)為其功能區(qū)。VH-VL功能區(qū)---結(jié)合抗原；CH1-CL功能區(qū)---遺傳標志區(qū)CH2功能區(qū)---結(jié)合補體；CH3功能區(qū)---結(jié)合某些細胞第四章抗體第二節(jié)抗體的分類及其生物學(xué)功能抗體的類抗體的亞類抗體的型抗體的亞型

korl一、抗體的類別重鏈抗原性與分子量鉸鏈區(qū)組成和二硫鍵數(shù)目輕鏈抗原性氫鏈個別氨基酸第四章抗體抗體的類γ鏈α鏈μ鏈δ鏈ε鏈第四章抗體抗體的亞類第四章抗體二、各類抗體的特性與功能1.IgG（1）單體，血清中含量最高，半衰期最長；（2）是抗感染主要抗體，發(fā)揮抗細菌、抗毒素、抗病毒

作用。（3）唯一能通過胎盤的抗體，在新生兒抗感染中起作用。第四章抗體

J鏈膜型IgM,單體，存在B細胞表面，構(gòu)成BCR。

B細胞膜BCR分泌型IgM(巨球蛋白),

五聚體，分子量最大，存在于血流中。免疫應(yīng)答中最先出現(xiàn)的抗體，早期抗感染及早期診斷指標。2.IgM第四章抗體3.IgA血清型IgA---單體，分布于血清，主要起免疫調(diào)節(jié)作用

分泌型IgA(SIgA）---二聚體，分布于外分泌液中，可經(jīng)初乳傳給胎兒。

唾液

眼淚、乳汁

鼻黏膜分泌液

支氣管分泌液

生殖道分泌物

前列腺液

小腸黏膜分泌液

SIgA是抗黏膜感染的重要抗體第四章抗體4.IgE（1）單體，最晚產(chǎn)生，主要存在于肥大細胞和嗜堿性粒細胞表面，又稱為親細胞抗體。（2）介導(dǎo)Ⅰ型超敏反應(yīng)和抗寄生蟲感染。第四章抗體5.IgD（1）血清IgD---單體,血清中含量極低，功能不清。（2）膜型IgD（mIgD）---單體,表達于成熟B細胞表面，與

B細胞成熟有關(guān)。

第四章抗體第三節(jié)抗體的基因及表達Ig基因庫V基因D基因J基因C基因基因定位染色體H鏈基因庫（IGH）96（65）279（6）11（9）14κ鏈基因庫(IGK)90（60）0512λ鏈基因庫(IGL)60（30）077（4）22一、人Ig基因庫及基因結(jié)構(gòu)第四章抗體第四章抗體二、抗體的基因重排與表達第四章抗體三、抗體多樣性（104）的機理（1）抗體基因庫存儲大量基因片段；（2）V-J和V-D-J重排時，基因片段進行隨機組合；（3）VDJ連接過程中的核苷酸可能發(fā)生突變、缺失或插入；（4）L鏈H鏈之間隨機配對組合；（5）抗原刺激后，B細胞中高頻基因突變。第四章抗體第四節(jié)人工制備抗體根據(jù)制備原理不同分：1多克隆抗體2單克隆抗體PolyclonalantibodyPcAbMonoclonalantibodyMcAb第四章抗體一、PcAb概念抗原免疫動物后，由多個不同Ｂ細胞克隆產(chǎn)生的針對多個不同表位的異質(zhì)性抗體。B1B2B3B4

Ag2341Ab1Ab2Ab3Ab4第四章抗體二、PcAb的制備---采用免疫動物法免疫原制備

免疫動物（3次）

測定抗體水平

動物采血分離血清

-20℃凍存12341231234B細胞第四章抗體免疫原制備即將抗原與佐劑進行充分研磨乳化。免疫佐劑是增強機體對抗原免疫應(yīng)答的物質(zhì)。常用的有氫氧化鋁、蜂膠、弗氏佐劑等。第四章抗體Rabbit/2kgBALB/Cmouse/20gRat/200gGuineapigSheep、Goat、Horse免疫動物的選擇第四章抗體1.免疫劑量：100-200ug/只2.免疫間隔時間:第一次和第二次間隔10-20d，三次及以后間隔7-10d3.免疫途徑:皮內(nèi)、皮下、肌肉、腹腔、腋窩淋巴結(jié)免疫程序第四章抗體三、McAb概念由單個B細胞克隆產(chǎn)生的針對單一抗原表位的同質(zhì)性抗體。第四章抗體四、單克隆抗體與多克隆抗體特性比較

PcAb

McAb

特異性專一性

免疫動物獲得淋巴細胞雜交瘤技術(shù)獲得產(chǎn)量有限產(chǎn)量無限用于一般免疫診斷鑒別診斷、制備生物導(dǎo)彈治療及免疫治療腫瘤、抗原結(jié)構(gòu)分析

第四章抗體五、McAb的制備1975年Kohler和Milstein創(chuàng)立了淋巴細胞雜交瘤技術(shù)用于生產(chǎn)McAb。原理:是B細胞是短壽細胞，在體外不能無限制增殖；骨髓瘤細胞可在體外無限增殖，但不能產(chǎn)生Ab。將免疫后具有分泌抗體能力的B細胞與骨髓瘤細胞融合形成B細胞雜交瘤，B細胞雜交瘤經(jīng)克隆后成為單細胞克隆，則該克隆既可無限生長又可分泌McAb。第四章抗體第四章抗體

免疫BALB/C小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細胞（缺乏TK，HGPRT）

收集免疫后B淋巴細胞收集骨髓瘤細胞

PEG細胞融合

HAT選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細胞篩選分泌抗體的雜交瘤細胞

單克隆化培養(yǎng)（有限稀釋法）

獲得穩(wěn)定分泌McAb的雜交瘤細胞株

McAb的生產(chǎn)（雜交瘤培養(yǎng)上清或誘生腹水）

McAb

純化及鑒定單克隆抗體的制備程序用已知抗原檢測第四章抗體第四章抗體液體石蠟