實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物樣本質(zhì)量控制規(guī)范

2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物樣本質(zhì)量控制規(guī)范GB/T39767-2021《人類生物GB/T37864-2019《生物樣本庫質(zhì)量和能從病理形態(tài)、分子水平和特定指標(biāo)等方面對(duì)4.1樣本質(zhì)量控制應(yīng)符合GB/T334.2樣本及相關(guān)數(shù)據(jù)的質(zhì)量控制應(yīng)符合預(yù)期用途，并依據(jù)該預(yù)期用途確定質(zhì)量控制的最低關(guān)鍵性能指5.1方法的確認(rèn)應(yīng)依據(jù)GB/T37864-2019中7.9的要求，使用經(jīng)過確認(rèn)和/或驗(yàn)證的方法來完成樣本及相關(guān)數(shù)據(jù)的質(zhì)5.2相關(guān)影響因素在進(jìn)行方法確認(rèn)和/或驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)考慮人員、環(huán)境、生物樣本的前處理過程、獲取、保存、銷毀、運(yùn)輸?shù)炔僮鲬?yīng)符合GB/T37864-2019的要求。應(yīng)建立6.2.1應(yīng)定期隨機(jī)抽檢，系統(tǒng)性評(píng)價(jià)樣本生命周期中的6.2.2.3應(yīng)記錄抽樣質(zhì)檢程序的改動(dòng)，并體現(xiàn)在質(zhì)檢報(bào)6.2.2.5如抽樣導(dǎo)致樣本耗盡時(shí)，抽樣質(zhì)控可6.3.1.1組織樣本質(zhì)量評(píng)估是指從組織學(xué)形態(tài)、分子水平和特定指標(biāo)等方面對(duì)樣本進(jìn)行評(píng)價(jià)，并判斷6.3.1.3分子水平評(píng)價(jià)是通過檢測(cè)樣本的核酸（濃度、純度、完整性）、蛋白質(zhì)（46.3.5其他樣本質(zhì)量評(píng)估，如糞便、唾液、乳汁、陰道內(nèi)液、羊水等，應(yīng)依據(jù)各自預(yù)期用途，建5A.1DNA樣本的濃度測(cè)定A.1.1分光光度法A.1.2熒光染料檢測(cè)法一般用標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度(ng/mL)對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度作回歸曲線,將樣本溶液的絕對(duì)定量分析：起始濃度(Log)與Ct值呈線性關(guān)系,通過已相對(duì)定量分析(2-ΔΔCt法):即通過計(jì)算測(cè)試樣本目的基因相對(duì)于對(duì)照樣本采用微滴發(fā)生器將含有核酸分子反應(yīng)體系形成成千上萬納升級(jí)的微滴,其中每個(gè)微滴或A.2.1分光光度法A.2.2瓊脂糖凝膠電泳法若電泳條帶最前面如果有較小的條帶,說明存在RNA污染,應(yīng)在提取過程中加入適當(dāng)濃度的RNA酶進(jìn)A.3.1凝膠電泳法6A.3.2毛細(xì)管凝膠電泳法毛細(xì)管凝膠電泳分析方法可提供DNA片段峰分布分析如下:A.4RNA樣本的濃度測(cè)定A.4.1分光光度法A.4.2熒光染料檢測(cè)法一般用標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度(ng/mL)對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度作直線回歸,將樣本溶液的程,計(jì)算出樣本的核酸含量。對(duì)于微量和低濃度樣本,宜采用熒光染料檢測(cè)法,此方法受其A.5RNA樣本的純度測(cè)定A.5.1分光光度法A.5.2瓊脂糖凝膠電泳法電泳后點(diǎn)樣孔較亮甚至點(diǎn)樣孔與目標(biāo)帶之間有明顯拖尾現(xiàn)象在4kb-5kb甚至更高分子量處出現(xiàn)條帶,說明有明顯A.6RNA樣本的完整性測(cè)定A.6.1凝膠電泳法顯示28S(2kb左右):18S(1kb左自動(dòng)化凝膠電泳可以提供RNA完整值參數(shù),用于評(píng)價(jià)從高度完整的RNA(RIN值為10)到嚴(yán)重降解的RNA(RINA.6.2毛細(xì)管凝集電泳法依據(jù)RIS值可對(duì)RNA的完整性進(jìn)行評(píng)分，RIS值越高,代表RNA的7B.1蛋白質(zhì)樣本的濃度測(cè)定B.1.1蛋白凱氏定氮法B.1.2雙縮脲法本方法應(yīng)用于微量蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。蛋白質(zhì)在堿性溶液中可形成銅-蛋白質(zhì)的復(fù)合物，此考馬斯亮藍(lán)顯色法基于蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán)染料結(jié)合的原理，通過測(cè)定染料與蛋白質(zhì)結(jié)B.1.5二辛可寧酸法(又名BCA法)B.1.6紫外分光度檢測(cè)法B.2蛋白質(zhì)樣本的完整性測(cè)定B.2.1SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法聚丙稀酰胺凝膠電泳時(shí),不同的蛋白質(zhì)按照其分子量大小進(jìn)行分布,電泳遷移率僅取決于量。由于不連續(xù)的PH梯度作用樣品被壓縮成一條狹窄區(qū)帶,采用染觀察結(jié)果。通過該方法測(cè)定蛋