(高清版)DB22∕T 243-2019 霍亂弧菌檢測 氣相色譜-質(zhì)譜法　

DB22DB22/T243—2019霍亂弧菌檢測氣相色譜-質(zhì)譜法MethodofVibriocholeraWithGaschromatography-massspectrometry吉林省市場監(jiān)督管理廳發(fā)布I）；――修改了“試劑和材料”（見4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6，2000年版的3――增加了“Ⅱ級生物安全柜”（見5.10）；1警示——使用本標(biāo)準(zhǔn)的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗室工作的實(shí)踐經(jīng)驗，本標(biāo)準(zhǔn)并未指出所有可能的安全問種分析方法。不同菌屬或同屬不同血清型細(xì)菌全細(xì)胞脂肪酸組成成分不同，它們有各自不同的色譜-質(zhì)譜指紋圖，根據(jù)峰值不同進(jìn)行判斷。根據(jù)霍亂弧菌種共有特異性峰值判斷可檢出羥基十四烷酸甲酯弧菌埃爾托生物型稻葉血清型菌株細(xì)胞脂肪酸---十六烯酸甲酯（C17H32O2）進(jìn)行霍亂弧菌埃爾托生物4.6石油醚：色譜純（60℃~90℃)。24.16氮?dú)?.9恒溫培養(yǎng)箱（36℃±1℃)。將樣本（5.10）及標(biāo)準(zhǔn)菌株（4.11a和4.11b）接種到堿性蛋白胨水（4.13）36℃±1℃增菌培養(yǎng)（5.9）6h～8h后，從菌膜下表層取1接種環(huán)接18h～24h；必要時進(jìn)行2次增菌培養(yǎng)。從分離培養(yǎng)基上挑取疑似菌落接種于TCBS培養(yǎng)基（4.14）進(jìn)行純培養(yǎng)，36℃±1℃,18h～24h。用生理鹽水(430min（5.6）滅活。從滅活菌懸液中吸取（5.11）100uL無菌菌液接種到大豆胰酶解酪蛋白肉基（4.15）中，37℃培養(yǎng)18h～24將滅活后菌懸液離心（5.3）12000r/min,5m3勻，熔封安瓶。在80℃水浴(5.6)水解酯化18h，冷卻后加入2mL石油醚(4.過碳酸氫鈉過濾器(4.17a)過濾，液，皂化瓶中連接冷凝管，并向瓶中通入氮?dú)猓?.16），在60℃水浴上反應(yīng)20min冷卻后，從冷凝管的上口加入4mL三氟化硼一甲醇溶液(4.8)反應(yīng)2min，取下加入少量的飽和氯化鈉(4.4)水溶液，混勻后，再加大量的飽和氯化鈉水溶液液至瓶口，將上清水硫酸鈉(4.5)脫水后，移入1.5mL離7.3.1.3進(jìn)樣口溫度230℃,檢測溫度250℃,柱流量2mL/min；分流比5:1。7.3.1.4色譜質(zhì)譜接口溫度280℃,載氣為氦氣（4.4流量為1.0mL/min。）；8.1.2檢出十六烯酸甲酯（C17H32O2）特異性峰，判定為霍4）；）；4X圖1稻葉細(xì)胞脂肪酸色譜圖134049B331665944.233Total34乏22426圖2小川細(xì)胞脂肪酸色譜圖1224.34624.258-24.483zoUT70so0o?91325.06324.950-25.108232401425.11725.108-25.1671525.24125.167-25.3501625.39325.350-25.5089749726