《《苦郎樹枝葉》編制說明》

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《苦郎樹枝葉》

（征求意見稿）編制說明

一、項(xiàng)目來源

根據(jù)《廣西中藥材產(chǎn)業(yè)協(xié)會(huì)關(guān)于印發(fā)2023年《廣西中藥材產(chǎn)業(yè)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)立

項(xiàng)項(xiàng)目申報(bào)指南》的通知》（？〔2023〕009號(hào)）文件精神，由廣西壯族自治區(qū)

中醫(yī)藥研究院提出，廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室起草的團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《苦郎

樹枝葉》（項(xiàng)目編號(hào)：廣西中藥材產(chǎn)業(yè)協(xié)會(huì)2023年第一批團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)制定項(xiàng)目6

號(hào)）。

二、項(xiàng)目背景及目的意義

苦郎樹VolkameriainermisL.為馬鞭草科（Verbenaceae）苦郎樹屬

（Volkameria）植物，生于海岸沙灘和潮汐能至的地方，分布于印度、東南亞至

大洋洲北部。國(guó)內(nèi)主要分布于廣西、福建、臺(tái)灣、廣東?？嗬蓸渚哂袕V泛的藥

用價(jià)值，其根、樹皮、葉均可入藥，具有散瘀逐濕，通經(jīng)祛痹，清熱消腫，止

痛，除濕殺蟲截瘧之功效。用于風(fēng)濕骨痛，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，腰腿痛，坐骨神經(jīng)

痛，胃痛，感冒發(fā)熱，瘧疾，肝炎，肝脾腫大，跌打損傷，血瘀腫痛，內(nèi)傷吐

血，外傷出血，瘡癬疥癩，濕疹瘙癢。

苦郎樹作為東南亞國(guó)家傳統(tǒng)藥用植物，有著廣泛的使用歷史。在越南民間

醫(yī)學(xué)中，苦郎樹被用于治療各種疾病，如肝炎、風(fēng)濕、發(fā)燒、瘧疾、胃痛等。

在印度作為退熱和抗瘧藥以及奎寧的替代品用于退燒和間歇性發(fā)熱；其葉粉與

樟腦、大蒜或辣椒一起用于水腫、肌肉疼痛、風(fēng)濕疼痛，根可用于性病。在泰

國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中，苦郎樹的新鮮葉子外用于治療皮膚病。在我國(guó)廣西京族使用苦

1

郎樹枝葉搗汁飲用治療肝炎。

京族藥用植物具有獨(dú)特的醫(yī)藥價(jià)值，在歷史上對(duì)京族的生存與繁衍起到了

至關(guān)重要的作用，但目前有關(guān)京族醫(yī)藥的挖掘和探索報(bào)道，不夠充分、社會(huì)認(rèn)

知度較低，仍需進(jìn)一步研究。因此“一帶一路”背景下京族醫(yī)藥文化的傳承和發(fā)展，

顯得更為必要和迫切?？嗬蓸錇榫┽t(yī)常用藥物，其作為藥用植物的淵源較長(zhǎng)，

且具有較廣的藥用范圍和分布范圍，可作為植物藥、獸用藥及人用藥使用，其

藥用價(jià)值已經(jīng)得到廣泛認(rèn)可。

國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)苦郎樹進(jìn)行了一些研究，發(fā)現(xiàn)苦郎樹含有黃酮類、萜類、酚

酸類、苯乙醇苷類等化合物，具有抗氧化、抗炎、抗癌等多種藥理活性。然而

目前國(guó)內(nèi)外未見有關(guān)于藥材苦郎樹的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究相關(guān)報(bào)道，這給苦郎樹的種

植、采收、加工、貿(mào)易以及藥物研究開發(fā)等方面帶來了困難。為了更好的開發(fā)

利用民族藥材，保護(hù)我區(qū)特色藥材資源，控制好藥材質(zhì)量，保障人民用藥安全，

使之符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，開發(fā)出新的藥用途徑，為資源的利用及提高應(yīng)用價(jià)值打下

科學(xué)基礎(chǔ)，有必要建立一套科學(xué)、準(zhǔn)確評(píng)價(jià)苦郎樹枝葉藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

三、項(xiàng)目編制過程

（一）成立標(biāo)準(zhǔn)編制工作組

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《苦郎樹枝葉》項(xiàng)目任務(wù)下達(dá)后，成立了標(biāo)準(zhǔn)編制工作組，制定

了標(biāo)準(zhǔn)編寫方案，明確任務(wù)職責(zé)，確定工作技術(shù)路線，開展標(biāo)準(zhǔn)研制工作，具

體標(biāo)準(zhǔn)編制工作由廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)

驗(yàn)室相關(guān)人員配合。

苦郎樹枝葉標(biāo)準(zhǔn)主要起草人員

研制人員姓名職務(wù)/職稱現(xiàn)從事專業(yè)所在單位

2

項(xiàng)目

柴玲副研究員藥物分析廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院

負(fù)責(zé)人

主劉布鳴研究員中藥質(zhì)量研究廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

要

袁健童助理研究員中藥質(zhì)量研究廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

參

陳明生助理研究員中藥分析廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

加

馮軍副主任藥師中藥學(xué)廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

人

員黃艷副研究員中藥化學(xué)廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

（二）收集整理文獻(xiàn)資料

標(biāo)準(zhǔn)編制工作組收集了相關(guān)文獻(xiàn)資料。主要有：

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（三）研討確定標(biāo)準(zhǔn)主體內(nèi)容

標(biāo)準(zhǔn)編制工作組在對(duì)收集的資料進(jìn)行整理研究之后，2023年5月到6月，

標(biāo)準(zhǔn)編制工作組召開了標(biāo)準(zhǔn)編制會(huì)議，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的整體框架結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，并

對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)鍵性內(nèi)容進(jìn)行了初步探討。經(jīng)過研究，標(biāo)準(zhǔn)的主體內(nèi)容確定為范圍、

規(guī)范性引用文件、術(shù)語和定義、要求、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)志、包裝、運(yùn)

輸和貯存。

6

（四）調(diào)研、形成文本草案、征求意見稿

2023年6月至7月，標(biāo)準(zhǔn)起草工作小組進(jìn)行了廣泛實(shí)地調(diào)研工作，查閱了

大量的國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)資料，對(duì)苦郎樹枝葉的前人研究成果進(jìn)行系統(tǒng)總結(jié)，形成了

標(biāo)準(zhǔn)的基本構(gòu)架，對(duì)主要內(nèi)容進(jìn)行了討論并對(duì)項(xiàng)目的工作進(jìn)行了部署和安排。

2023年7月至9月，在前期工作的基礎(chǔ)之上，通過理清邏輯脈絡(luò)，整合已

有的參考資料中有關(guān)苦郎樹枝葉技術(shù)要求，并結(jié)合檢驗(yàn)實(shí)際要求的基礎(chǔ)上，按

照簡(jiǎn)化、統(tǒng)一等原則編制完成團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《苦郎樹枝葉》（草案）。

2023年9月至10月，深入?yún)^(qū)內(nèi)苦郎樹種植、加工及檢驗(yàn)的有代表性的村鎮(zhèn)、

單位、企業(yè)針對(duì)苦郎樹枝葉技術(shù)情況進(jìn)行分組實(shí)地調(diào)研學(xué)習(xí)。通過實(shí)地調(diào)研，

掌握各地方產(chǎn)品的具體要求。并實(shí)際征求意見，通過收集反饋了大量意見，標(biāo)

準(zhǔn)編制工作組多次召開會(huì)議，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)草案進(jìn)行了反復(fù)修改和研究討論。最終形

成了團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《苦郎樹枝葉》（征求意見稿）和（征求意見稿）編制說明。

四、標(biāo)準(zhǔn)主要章節(jié)內(nèi)容及確定依據(jù)

（一）標(biāo)準(zhǔn)涉及的技術(shù)原理及依據(jù)

采用現(xiàn)代分析技術(shù)對(duì)苦郎樹枝葉的感官指標(biāo)、理化指標(biāo)進(jìn)行分析測(cè)定，對(duì)

苦郎樹枝葉進(jìn)行質(zhì)量控制是本標(biāo)準(zhǔn)制定的出發(fā)點(diǎn)。

薄層色譜鑒別：按照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則0502的規(guī)

定測(cè)定。

水分的測(cè)定：按照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則0832中第二

法的規(guī)定測(cè)定。

總灰分的測(cè)定：按照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則2302的規(guī)

定測(cè)定。

浸出物的測(cè)定：按照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則2201項(xiàng)水

7

溶性浸出物測(cè)定法中的熱浸法規(guī)定測(cè)定，以水作溶劑。

毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷的含量測(cè)定：按照《中華人民共和國(guó)藥典》2020

年版四部通則0512的規(guī)定測(cè)定。

（二）標(biāo)準(zhǔn)涉及技術(shù)的具體實(shí)施方案

按照廣西壯族自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)編制工作的要求，標(biāo)準(zhǔn)起草

小組成員于項(xiàng)目實(shí)施期間，深入廣西北海、廣西欽州、廣西防城等地區(qū)開展資

源調(diào)查、樣品采集。

苦郎樹枝葉采集于廣西北海、欽州、防城、海南?？?、三亞等地，總計(jì)10

批，經(jīng)廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院胡仁傳副研究員鑒定為馬鞭草科植物苦郎

樹（VolkameriainermisL.）的枝葉，批號(hào)如表1所示。

表1不同產(chǎn)地苦郎樹枝葉的樣品來源信息

編號(hào)產(chǎn)地采收時(shí)間

S1海南?？?023.05

S2海南三亞2023.05

S3廣西合浦2023.11

S4廣西欽州2023.10

S5廣西合浦2023.05

S6廣西合浦2023.07

S7廣西欽州2023.11

S8廣西北海20221108

S9廣西北海2023.11

S10廣西北海2023.11

S11廣西防城2023.09

S12廣西北海2023.11

S13福建省福州市2023.11

8

1.顯微鑒別

參照中國(guó)藥典方法。

供試品粉碎，過二號(hào)篩，混合均勻。取適量于載玻片上，滴數(shù)滴水合氯醛

溶液將粉末浸潤(rùn)后，酒精燈加熱，再滴加適量稀甘油溶液，充分混合，蓋上蓋

玻片，置于顯微鏡下觀察。代表性顯微特征見圖1。樣品粉末黃綠色。非腺毛

細(xì)胞1~4個(gè)，有的細(xì)胞內(nèi)含棕黃色物質(zhì)，直徑15~33μm。草酸鈣方晶單個(gè)散在或

存在于薄壁細(xì)胞中，直徑10~21μm。纖維成束或單個(gè)分離，直徑18~35μm。石

細(xì)胞長(zhǎng)方形或方圓形，單個(gè)散在或數(shù)個(gè)相聚，壁厚，孔溝明顯，直徑25~55μm。

葉表皮細(xì)胞垂周壁平直或稍彎曲，氣孔不定式，副衛(wèi)細(xì)胞3~5個(gè)。導(dǎo)管為螺紋導(dǎo)

管或具緣紋孔導(dǎo)管，直徑25~35μm。

圖1苦郎樹枝葉的顯微鑒別

2.薄層色譜鑒別

2.1儀器

ZF1-Ⅱ暗箱紫外分析儀。

2.2試劑

9

環(huán)己烷、石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、冰醋酸、甲酸均為分析純，

水為超純水。

毛蕊花糖苷對(duì)照品（111530-201914，中國(guó)食品藥品檢定研究院），異毛蕊

花糖苷對(duì)照品（CFS201701，ChemFaces）。

2.3供試品溶液的制備方法

精密稱取1g苦郎樹藥材細(xì)粉，加入50mL80%甲醇，超聲（頻率40KHz，

功率400W）30min，收集濾液，蒸干后，殘?jiān)尤?mL甲醇溶解后取上清液，

0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.4對(duì)照品溶液的制備方法

取毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)品與異毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，精密稱量，分別取甲醇

制得每1mL溶液含有毛蕊花糖苷1mg、異毛蕊花糖苷1mg的溶液，0.45μm濾

膜濾過，取濾液即得。

2.5薄層色譜條件考察

2.5.1不同展開體系考察

實(shí)驗(yàn)比較了3種展開體系，如表2所示，按照吸取供試品溶液3~5μL、對(duì)照

品溶液3μL的點(diǎn)板方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。

表2薄層展開條件

薄層板展開劑顯色劑

環(huán)己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-冰10%硫酸乙醇溶液

預(yù)制硅膠G板

醋酸(20：5：8：0.1)

乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(18：2：0.5%香草醛硫酸溶液

高效預(yù)制硅膠GF254板

1.5：1)

預(yù)制聚酰胺薄層板甲醇-乙酸-水(5：1：4)無

10

圖2不同展開體系的對(duì)比

對(duì)比上述三種展開體系點(diǎn)板結(jié)果，發(fā)現(xiàn)相較于其他薄層色譜體系，選用預(yù)

制聚酰胺薄膜板，以甲醇-乙酸-水（5：1：4）作為展開劑時(shí)，在板上顯出的斑

點(diǎn)清晰，無干擾，對(duì)照品毛蕊花糖苷及異毛蕊花糖苷所對(duì)應(yīng)的斑點(diǎn)與周邊的斑

點(diǎn)能夠分離開來，且Rf值適中，因此確定以預(yù)制聚酰胺薄層板作為固定相，以

甲醇-乙酸-水（5：1：4）作為展開劑來作為苦郎樹薄層鑒別的展開體系。

2.5.2不同展開溫度考察

按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4”項(xiàng)下方法制備對(duì)照品溶液，使用

預(yù)制聚酰胺薄膜板，以甲醇-乙酸-水（5：1：4）作為展開劑進(jìn)行展開，比較15℃、

25℃和35℃不同溫度下的展開情況，如圖3所示。

圖3不同溫度下薄層色譜展開

11

結(jié)果表明，35℃環(huán)境溫度，15℃與25℃相比，25℃環(huán)境溫度下斑點(diǎn)顯

示更為清晰，因此選擇在25℃環(huán)境溫度下進(jìn)行展開。

2.6苦郎樹枝葉樣品的薄層鑒別

利用建立的薄層鑒別方法，對(duì)苦郎樹枝葉樣品進(jìn)行鑒別。結(jié)果如圖4所示。

供試品溶液中，在與毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷對(duì)照品相應(yīng)的位置上，均顯相

同顏色的熒光斑點(diǎn)。

圖413批苦郎樹枝葉樣品薄層鑒別結(jié)果

（聚酰胺薄膜板，100×200mm）（25℃）

3.水分

水分檢查采用藥典通則0832第二法進(jìn)行測(cè)定。樣品的水分結(jié)果如表3所示，

13批樣品的平均水分為8.40%，以平均值上浮20%作為水分限度，規(guī)定不得超

過10.0%。

12

表313批苦郎樹藥材水分含量測(cè)定

批號(hào)含水量（%）

S15.8

S26.4

S36.1

S410.2

S58.3

S67.4

S77.5

S86.3

S97.2

S1010.2

S1110.4

S1212.1

S1311.3

平均值8.4

4.總灰分的測(cè)定

總灰分檢查采用藥典通則2302進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果如表4所示。13批苦郎樹枝葉

樣品的平均灰分為5.6%，以平均值上浮20%作為總灰分限度，規(guī)定不得過6.7%。

表413批苦郎樹藥材總灰分含量測(cè)定

批號(hào)含水量（%）

S14.2

S25.4

S36.4

S46.1

S56.5

S66.6

S76.2

S84.2

S96.3

S105.2

S114.5

S125.4

S134.7

平均值5.6

5.浸出物的測(cè)定

5.1醇溶性浸出物

13

照醇溶性浸出物測(cè)定法（通則2201）項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定，用甲醇作為溶劑。

13批樣品的檢測(cè)結(jié)果見表5，醇溶性浸出物平均值為25.4%，以平均值下浮20%

作為限度，規(guī)定不得少于30.5%。

表5苦郎樹枝葉樣品浸出物測(cè)定結(jié)果

批號(hào)含水量（%）

S118.3

S217.5

S325.3

S423.2

S526.5

S622.6

S724.2

S824.2

S921.3

S1025.2

S1128.5

S1225.4

S1327.7

平均值23.8

6.毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷含量測(cè)定方法

6.1材料

6.1.1儀器

萬分之一電子分析天平（AR-224CN，奧豪斯儀器（常州）有限公司）；

Waters1525-2707-2489高效液相色譜儀（美國(guó)沃特世公司）；色譜柱：Dionex

Acclaim120C18（4.6×150mm，3μm），WelchXB-C18（4.6×250mm，5μm）；

數(shù)控超聲波清洗器（KQ500DE，昆山市超聲儀器有限公司）；移液管。

6.1.2試藥

毛蕊花糖苷對(duì)照品（111530-201914，中國(guó)食品藥品檢定研究院，純

度>98.0%），異毛蕊花糖苷對(duì)照品（CFS201701，ChemFaces，純度>98.0%）。

甲醇（廣東光華科技股份有限公司，分析純）；甲醇、乙腈（上海星可純?nèi)軇?/p>

14

有限公司，色譜純）；磷酸、冰醋酸（廣東光華科技股份有限公司，色譜純），

水為超純水。

6.2對(duì)照品溶液的制備

取毛蕊花糖苷與異毛蕊花糖苷對(duì)照品適量，置于同一量瓶中，加甲醇制成

每1mL含毛蕊花糖苷920μg、異毛蕊花糖苷917μg的混合對(duì)照品溶液。

6.3供試品溶液的制備

取本品粉末（過二號(hào)篩）約0.2g，精密稱定，精密加入80%甲醇10mL，

稱定重量，超聲處理（功率400W，頻率40KHz）30min，放冷后，再次稱定重

量，使用80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻后過濾，收集過濾液，即得供試品溶液。

6.4含量測(cè)定條件考察

6.4.1檢測(cè)波長(zhǎng)選擇

取毛蕊花糖苷對(duì)照品的甲醇溶液及異毛蕊花糖苷的甲醇溶液測(cè)定紫外吸收

光譜，毛蕊花糖苷對(duì)照品的最大吸收波長(zhǎng)為329nm，異毛蕊花糖苷對(duì)照品的最

大吸收波長(zhǎng)為326nm，且在330nm下其他干擾峰較小，依據(jù)國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程

對(duì)二極管陣列檢測(cè)器波長(zhǎng)示值最大允許誤差為±2nm，因此選擇330nm為檢測(cè)

波長(zhǎng)。通過比較各吸收波長(zhǎng)下的圖譜最終選擇330nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

6.4.2色譜柱選擇

根據(jù)毛蕊花糖苷及異毛蕊花糖苷的結(jié)構(gòu)特征，為苯乙醇苷類物質(zhì)，具有多羥

基結(jié)構(gòu)，也因此選用C18柱作為分離柱較為合適。對(duì)比安捷倫ZORBAXSB-C18

柱（250mm×4.6mm,5μm）、伊利特C18柱（250mm×4.6mm,5μm）、Sunfire

C18柱（250mm×4.6mm,5μm）這三種品牌的色譜柱，如圖5所示。

15

圖5不同色譜柱測(cè)定的苦郎樹藥材HPLC色譜圖

經(jīng)比較，在使用WatersSunFireC18分析柱（250mm×4.6mm,5μm）時(shí)分離

效果最佳，峰型尖且窄，因此選用該柱作為含量測(cè)定所使用的分析柱。

6.4.3不同梯度條件選擇

按本章節(jié)“6.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，使用如表6所示洗脫梯度，進(jìn)樣檢

測(cè)得到對(duì)應(yīng)色譜圖結(jié)果如圖6所示。

表6不同洗脫梯度表

梯度S1梯度S2

時(shí)間0.1%磷酸時(shí)間0.1%磷酸

乙腈（%）乙腈（%）

（分鐘）水溶液（%）（分鐘）水溶液（%）

0→10901000→59010

10→2090→8010→205→1090→8110→19

20→3580→8020→2010→3081→8119→19

35→3680→3020→7030→3181→3019→70

36→4830→3070→7031→4130→3070→70

48→4930→9070→1041→4230→9070→10

49→559010042→459010

梯度S3梯度S4

時(shí)間0.1%磷酸時(shí)間0.1%磷酸

乙腈（%）乙腈（%）

（分鐘）水溶液（%）（分鐘）水溶液（%）

0→3081→8119→190→3082→8018→20

30→3181→3019→1930→3180→3020→70

31→4030→3070→7031→4030→3070→70

40→4130→8170→1940→4130→8270→18

41→4581→8119→1941→4582→8218→18

16

圖6不同梯度洗脫考察結(jié)果

從結(jié)果對(duì)比中可以看出，使用梯度S4的方法進(jìn)行洗脫時(shí)，峰型最好且分離

度最佳，因此決定選用梯度S4作為洗脫流動(dòng)相方法。

6.4.4不同流動(dòng)相考察

按照本章“6.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照本章“6.4.3”項(xiàng)下液相方法考察

乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸溶液、甲醇-0.1%磷酸、甲醇-水這四種流動(dòng)相對(duì)峰分離

度的影響。發(fā)現(xiàn)以甲醇作為有機(jī)相時(shí)，難以將供試品洗脫出來，相比于乙腈作

為有機(jī)相洗脫效果較差差，因此考慮使用乙腈作為流動(dòng)相的有機(jī)相。

其中，以0.1%磷酸的水-乙腈的流動(dòng)相能夠使得峰形尖窄并且保證較好的分

離度，因此，選擇以乙腈-0.1%磷酸水作為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫。

6.4.5不同流速考察

按照本章“6.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照本章“6.4.3”項(xiàng)下所述液相梯度

洗脫條件，對(duì)比一下3種不同流速，為0.8、1.0、1.2mL/min，結(jié)果如圖7所示。

17

圖7不同流速考察結(jié)果

根據(jù)結(jié)果顯示，選用了不同流速僅是改變出峰時(shí)間，而對(duì)于分離效果并無明

顯影響，因此采用常用的1mL/min的流速來作為液相洗脫流速。

6.4.6不同柱溫的考察

按照本章“6.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，“6.4.3”項(xiàng)下所述液相梯度洗脫條

件，對(duì)比25℃、30℃、35℃這3種不同溫度下進(jìn)樣測(cè)試，在這三種柱溫條件

下分離效果如圖所示。

圖8不同柱溫條件下分離情況

隨著柱溫的升高，各峰出峰時(shí)間均略有提前，但對(duì)分離度及峰型并無較大影

18

響，因此選擇25℃作為分離時(shí)所采用的柱箱溫度。

6.4.7供試品提取條件考察

主要對(duì)比了不同提取溶劑、不同提取方法、不同提取時(shí)間以及料液比對(duì)實(shí)驗(yàn)

結(jié)果的影響。使用的樣品為K4（20211008），按照本章“6.4.3”項(xiàng)下所述液相梯

度洗脫條件進(jìn)行方法學(xué)考察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖9所示。

圖9供試品提取條件考察

曾對(duì)比乙醇、甲醇、水、80%甲醇、60%甲醇分別作為提取溶劑時(shí)的效果，

對(duì)比發(fā)現(xiàn)，當(dāng)乙醇作為提取溶劑時(shí)，提取效果很差，而80%甲醇作為提取溶劑

時(shí)表現(xiàn)最佳，因此選擇80%甲醇作為提取溶劑。對(duì)比超聲提取、加熱回流提取

和靜置提取，使用超聲提取和加熱回流提取效果相差不大，而超聲提取較為簡(jiǎn)

單快捷，選擇超聲提取法。進(jìn)行超聲處理30min和60min時(shí)，差別不大，從效

率上考慮，選擇超聲30min。對(duì)比1：25、1：50和1：100這幾種不同料液比，

幾乎無太大差別，但在進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，使用的藥材量較少，為保障溶液能完

全浸沒藥材粉末，選擇1：50的料液比。最后確定供試品的提取條件為80%甲

醇超聲（頻率40KHz,功率400W）提取30min，料液比為1：50。

6.5方法學(xué)驗(yàn)證

19

6.5.1對(duì)照品溶液的制備

取毛蕊花糖苷與異毛蕊花糖苷對(duì)照品適量，置于同意量瓶中，加甲醇制成每

1mL含毛蕊花糖苷920μg、異毛蕊花糖苷917μg的混合對(duì)照品溶液。

6.5.2供試品溶液的制備

取本品粉末（過三號(hào)篩）約0.2g，精密稱定，精密加入80%甲醇10mL，

稱定重量，超聲處理（功率400W，頻率40KHz）30min，放冷后，再次稱定

重量，使用80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻后過濾，收集過濾液，即得供試品

溶液。

6.5.3色譜條件

選用WatersSunFireC18柱、乙腈和0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，

洗脫梯度見下表7所示，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)330nm。

表7洗脫梯度

時(shí)間（分鐘）0.1%磷酸水溶液（%）乙腈（%）

0→3082→8018→20

30→3180→3020→70

31→4030→3070→70

40→4130→8270→18

41→4582→8218→18

6.5.4線性關(guān)系

取毛蕊花糖苷對(duì)照品母液進(jìn)行稀釋，配置成為濃度分別為4.6、18.6、46、

92、138、230μg/mL的對(duì)照品溶液，采用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣20μL，最終毛蕊花糖

苷的進(jìn)樣量分別為0.092、0.368、0.92、1.84、2.76、4.6μg，在波長(zhǎng)330nm下

進(jìn)行檢驗(yàn)測(cè)定。

以對(duì)照品峰面積積分值A(chǔ)作為縱坐標(biāo)（Y），以對(duì)照品進(jìn)樣量C作為橫坐標(biāo)

（X）進(jìn)行線性回歸分析，其回歸方程為A=1.4688*106C+5.8934*104，相關(guān)系

數(shù)的平方值R2=0.9998；結(jié)果表明毛蕊花糖苷在4.6~230μg/mL范圍之內(nèi)，峰面

20

積積分值A(chǔ)與進(jìn)樣量C(μg)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。線性關(guān)系數(shù)據(jù)見表8，標(biāo)準(zhǔn)曲

線見圖10。

表8毛蕊花糖苷線性及線性范圍

毛蕊花糖苷對(duì)照毛蕊花糖苷對(duì)照毛蕊花糖苷對(duì)照

編號(hào)

品濃度(μg/ml)品進(jìn)樣量(μg)品峰面積

14.60.092141367

218.60.368581347

3460.921443676

4921.842885536

51382.764030327

62304.66810832

圖10毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

取異毛蕊花糖苷對(duì)照品母液進(jìn)行稀釋，配置成為濃度分別為2.2925、9.17、

18.34、36.68、55.02、91.7μg/mL的對(duì)照品溶液，采用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣20μL，

最后異毛蕊花糖苷進(jìn)樣量分別為0.04585、0.1834、0.3668、0.7336、1.1004、1.834

μg，在波長(zhǎng)為330nm下進(jìn)行檢驗(yàn)測(cè)定。

以對(duì)照品峰面積積分值A(chǔ)作為縱坐標(biāo)（Y），以對(duì)照品進(jìn)樣量C作為橫坐標(biāo)

（X）進(jìn)行線性回歸分析，其回歸方程為A=1.4686*106*C-3.1305*104，相關(guān)系

數(shù)的平方值R2=0.9994；結(jié)果表明異毛蕊花糖苷在2.29μg/mL~91.7μg/mL范圍

之內(nèi)，峰面積積分值A(chǔ)與進(jìn)樣量C(μg)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。線性關(guān)系數(shù)據(jù)見

21

表9，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖11。

表9異毛蕊花糖苷線性及線性范圍

異毛蕊花糖苷對(duì)照品異毛蕊花糖苷對(duì)照品異毛蕊花糖苷對(duì)照品

編號(hào)

濃度(μg/ml)進(jìn)樣量(μg)峰面積

12.29250.0458550538

29.170.1834232588

318.340.3668487891

436.680.73361057402

555.021.10041583689

691.71.8342662361

圖11異毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

6.5.5精密度試驗(yàn)

按本章節(jié)“6.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按本章“6.5.3”項(xiàng)下方法于高效液相

色譜儀連續(xù)上樣6次，記錄各自的峰面積及保留時(shí)間，并計(jì)算相應(yīng)的RSD值，

結(jié)果供試品中毛蕊花糖苷峰面積的RSD值為0.3777%，毛蕊花糖苷保留時(shí)間的

RSD值為0.0779%；供試品中異毛蕊花糖苷峰面積的RSD值為0.4068%，異毛

蕊花糖苷保留時(shí)間的RSD值為0.0371%，表明本方法精密度較為良好，具體數(shù)

據(jù)如下表10所示。

22

表10苦郎樹供試品精密度試驗(yàn)

異毛蕊花糖苷相

毛蕊花糖苷毛蕊花糖苷相對(duì)異毛蕊花糖苷峰

進(jìn)樣次數(shù)對(duì)保留時(shí)間

峰面積保留時(shí)間(min)面積

(min)

158735015.04725913321.003

259475415.05325699820.998

359800115.04925303420.993

459576715.03425938520.984

559651015.03225625420.991

659581515.02325364720.983

RSD(%)0.37770.07790.40680.0371

6.5.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批苦郎樹供試品溶液（批號(hào)：20211008）按本章“6.3”項(xiàng)下方法制備供

試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24h。按照本章“6.5.3”項(xiàng)下方法所述液相色

譜洗脫方法進(jìn)行含量測(cè)定，分別計(jì)算毛蕊花糖苷及異毛蕊花糖苷的峰面積及對(duì)

應(yīng)的RSD值，得知供試品中毛蕊花糖苷的峰面積的RSD值為0.1306%，對(duì)應(yīng)的

保留時(shí)間的RSD值為0.0618%；異毛蕊花糖苷的峰面積的RSD值為1.3983%，

對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間的RSD值為0.0702%。結(jié)果表明穩(wěn)定性良好，具體測(cè)定結(jié)果數(shù)

據(jù)如下表11所示。

表11苦郎樹供試品穩(wěn)定性試驗(yàn)

毛蕊花糖苷相

毛蕊花糖苷峰異毛蕊花糖苷異毛蕊花糖苷相

進(jìn)樣次數(shù)對(duì)保留時(shí)間

面積峰面積對(duì)保留時(shí)間(min)

(min)

156304815.09725759321.015

256251615.08926559321.029

356381115.07726452221.038

456399015.08026343121.023

556313415.10026070021.058

656206915.08325688221.033

RSD(%)0.13060.06181.39830.0702

6.5.7重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批苦郎樹供試品溶液（批號(hào)：20211008）按本章“6.3”項(xiàng)下方法制備供

試品溶液，平行6份，按照本章“6.5.3”項(xiàng)下方法所述液相色譜洗脫方法進(jìn)行含量

23

測(cè)定，分別計(jì)算毛蕊花糖苷及異毛蕊花糖苷的峰面積及對(duì)應(yīng)的RSD值，得知供

試品中毛蕊花糖苷的峰面積的RSD值為1.2671%，對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間的RSD值為

0.2405%；異毛蕊花糖苷的峰面積的RSD值為1.3232%，對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間的RSD

值為0.3647%。結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好，具體測(cè)定結(jié)果數(shù)據(jù)如下表12所示。

表12樣品重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

毛蕊花糖苷峰毛蕊花糖苷保留時(shí)異毛蕊花糖苷峰面異毛蕊花糖苷保

進(jìn)樣次數(shù)

面積間(min)積留時(shí)間(min)

1552033.515.76529514521.387

2563383.515.78229282221.421

3563477.515.873294458.521.398

4535466.515.798286345.521.412

5540799.515.82128159021.387

656227615.79229728821.213

RSD(%)1.26710.24051.32320.3647

6.5.8加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取同一批次的苦郎樹藥材（批號(hào)：20211008）粉末（過三號(hào)篩）0.1g，

共6份，按本章“6.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行6份，再使用100%的比例

加入對(duì)照品，按照本章“6.5.3”項(xiàng)下方法所述液相色譜洗脫方法進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)

算加樣回收率，得出毛蕊花糖苷的加樣回收率在95.78%~101.15%，平均加樣回

收率為98.35%，其RSD值為2.4013%；異毛蕊花糖苷的加樣回收率在

96.39%~100.42%，平均加樣回收率為97.76%，其RSD值為1.4378%。結(jié)果表明

加樣回收率合格。具體數(shù)據(jù)見下表13所示。

24

表13加樣回收率測(cè)定結(jié)果

取樣量樣品中含加入量測(cè)得量回收率平均回收

成分