病理檢驗(yàn)技術(shù)（第3版）課件 第10章 細(xì)胞學(xué)檢查技術(shù)

第十章細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)滄州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校崔茂香

細(xì)胞病理學(xué)又稱診斷細(xì)胞學(xué)，或臨床細(xì)胞學(xué)，是通過觀察細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和形態(tài)來研究和診斷疾病的一門科學(xué)，是病理學(xué)的分支學(xué)科之一，與活體組織檢驗(yàn)關(guān)系十分密切。一、概述細(xì)胞來源：1.脫落細(xì)胞學(xué)采集人體中各器官生理或病理情況下脫落的細(xì)胞，如胃腸道、呼吸道、泌尿道、女性生殖道表面脫落的細(xì)胞或胸腹腔、顱腦腔、關(guān)節(jié)腔等積液。2.針吸細(xì)胞學(xué)通過細(xì)針吸取的方法吸取組織中的活細(xì)胞,如乳腺、甲狀腺、淋巴結(jié)、前列腺等穿刺。（一）應(yīng)用范圍1．診斷某些良性病變

；2．適用于陰道脫落細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)；3．用于癌瘤治療后的隨診觀察；4．發(fā)現(xiàn)癌前病變；5．用于診斷癌瘤，適于防癌普查。

（二）細(xì)胞學(xué)檢查的優(yōu)點(diǎn)與不足1.優(yōu)點(diǎn)（1）方法簡單易學(xué)，容易掌握。（2）設(shè)備簡單、容易推廣，費(fèi)用低。（3）安全，患者痛苦少或無痛苦，可反復(fù)取材檢驗(yàn)，無不良反應(yīng)。（4）制片技術(shù)簡捷，報(bào)告快速，出報(bào)告時(shí)間短。（5）癌細(xì)胞檢出率較高，如技術(shù)條件好，采集細(xì)胞方法正確，某些腫瘤陽性率可達(dá)80%～90%。尤其對某些無明顯臨床表現(xiàn)的惡性腫瘤，如隱性肺癌，能夠得到早期診斷。（6）可以對某些器官局部（如宮頸）進(jìn)行多位點(diǎn)的脫落細(xì)胞學(xué)檢查。（二）細(xì)胞學(xué)檢查的優(yōu)點(diǎn)與不足2.不足（1）取材不準(zhǔn)，涂片過厚過薄，影響診斷結(jié)果。（2）對黏膜表面旳脫落細(xì)胞和體腔抽岀液中的脫落細(xì)胞，難以分辨其微細(xì)結(jié)構(gòu)。（3）標(biāo)本采集的是散在細(xì)胞成分，不能全面觀察病變組織的結(jié)構(gòu)層次，因此不利于對腫瘤做組織學(xué)分型。（4）在某些情兄下，不能確定腫瘤發(fā)生的具體部位，如尿液中檢出癌細(xì)胞，很難知道其是來自腎、輸尿管還是膀胱。不能判斷腫瘤浸潤的程度和病灶范圍。（5）脫落細(xì)胞易退變，易受人為因素影響。（三）注意事項(xiàng)1．正確采集標(biāo)本

正確采集標(biāo)本是細(xì)胞學(xué)診斷的基本條件。2．保證制片質(zhì)量

質(zhì)量上乘的涂片是細(xì)胞學(xué)診斷的重要保證。質(zhì)量好的涂片必須做到：厚薄適當(dāng)，分布均勻；及時(shí)固定；涂片無人為的變化；涂片中細(xì)胞成分過多時(shí)，應(yīng)設(shè)法溶解紅細(xì)胞，使其他細(xì)胞更為突出和清晰。3．認(rèn)真閱片

提高鏡下閱片水平是細(xì)胞學(xué)診斷的關(guān)鍵。4．努力學(xué)習(xí)，善于總結(jié)，不斷提高細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)的診斷水平

細(xì)胞學(xué)診斷只能在對涂片進(jìn)行全面、客觀的觀察、分析和思考之后做出。有下列情況之一者應(yīng)重復(fù)檢查：（1）涂片屮只有少數(shù)可疑癌細(xì)胞，難以做出結(jié)論性診斷的病例。（2）細(xì)胞學(xué)診斷與臨床診斷明顯不相符合的病例。（3）標(biāo)本中壞死細(xì)胞較多或結(jié)構(gòu)清楚的細(xì)胞較少，難以肯定診斷或分型的病例。（4）涂片取材不當(dāng)或制片技術(shù)不佳等。5．加強(qiáng)與臨床的聯(lián)系

臨床病史及有關(guān)影像學(xué)檢査和化驗(yàn)結(jié)果，是病理細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)做岀正確診斷的重要參考依據(jù)。6．應(yīng)用推廣新技術(shù)

常規(guī)涂片染色是細(xì)胞學(xué)工作者做出診斷的基礎(chǔ)。對于疑難病例，可廣泛應(yīng)用特殊染色、免疫組化和電鏡等新技術(shù)，才能推進(jìn)診斷細(xì)胞學(xué)水平不斷提高。二、標(biāo)本的采集與制片（一）標(biāo)本采集

標(biāo)本采集是脫落細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)成功與否的重要環(huán)節(jié)。取材的好壞，直接關(guān)系到檢查的準(zhǔn)確性。（一）標(biāo)本采集1.原則：（1）采集目標(biāo)細(xì)胞要盡可能直接從病變區(qū)域采集細(xì)胞，必要時(shí)可與儀器定位結(jié)合，如在B超、CT或X線透視引導(dǎo)下，直接達(dá)到病灶吸取病變細(xì)胞。（2）采集的標(biāo)本要新鮮，要防止細(xì)胞的自溶或腐敗。（3）采集標(biāo)本時(shí)要避免污染，減少干擾物的混入。（4）采集的方法應(yīng)簡便、輕柔，要減少受檢者痛苦，避免引起并發(fā)癥，防止病變（特別是腫瘤）的進(jìn)一步播散。（一）標(biāo)本采集2.方法：（1）直視采集法

（2）摩擦法

（3）液體標(biāo)本的采集

主要用于痰、尿、前列腺液、乳頭溢液等標(biāo)本的采集。（4）穿刺抽吸法主要利用穿刺針進(jìn)行抽吸采取細(xì)胞標(biāo)本。（5）灌洗法

是向空腔臟器器官（如胃、腸等）或腹腔、盆腔內(nèi)灌注一定量的液體進(jìn)行沖洗或振動，致使黏膜細(xì)胞脫落，達(dá)到采集標(biāo)本的目的。（二）涂片1.涂片制作的注意事項(xiàng)：（1）操作要輕巧，避免人為損傷脫落細(xì)胞。（2）厚薄要適宜。涂片太厚，細(xì)胞容易重疊，不利于鏡檢；涂片太薄，片中細(xì)胞數(shù)量太少，容易漏診。（3）涂片應(yīng)均勻。細(xì)胞成分應(yīng)涂布在玻片的2/3范圍內(nèi)，以利于觀察和攝影，余1/3留作貼標(biāo)簽。（4）同一標(biāo)本至少一次涂2張涂片，要做好標(biāo)記，刻寫編碼，防止錯號與漏診的發(fā)生。（二）涂片1.涂片操作方法：（1）推片法；（2）涂抹法；（3）拉片法；（4）印片法（5）噴射法。（三）固定

固定（fixation）的主要目的在于保持細(xì)胞的自然形態(tài)，防止細(xì)胞自溶或細(xì)菌性腐敗，保持細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)、糖等成分易于著色。（三）固定1.涂片制作的注意事項(xiàng)：（1）操作要輕巧，避免人為損傷脫落細(xì)胞。（2）厚薄要適宜。涂片太厚，細(xì)胞容易重疊，不利于鏡檢；涂片太薄，片中細(xì)胞數(shù)量太少，容易漏診。（3）涂片應(yīng)均勻。細(xì)胞成分應(yīng)涂布在玻片的2/3范圍內(nèi)，以利于觀察和攝影，余1/3留作貼標(biāo)簽。（4）同一標(biāo)本至少一次涂2張涂片，要做好標(biāo)記，刻寫編碼，防止錯號與漏診的發(fā)生。（三）固定1.常用固定液（1）95%乙醇固定液：是最常用的固定液，適合大規(guī)模防癌普查時(shí)使用。（2）乙醚乙醇固定液：適于一般細(xì)胞學(xué)染色，如巴氏染色和HE染色。配方:95%乙醇49.5ml

乙醚49.5ml

醋酸10ml（3）三氯甲烷乙醇固定液：又稱卡諾（Carnoy）固定液，一般只用于核酸染色、糖原染色和黏蛋白染色等特殊染色。

配方:100%乙醇60ml

氯甲烷30ml

醋酸10ml（4）甲醇

常用于瑞氏、MGG或免疫組化染色旳自然干燥涂片的預(yù)固定。（三）固定2.固定方法（1）帶濕固定法即涂片尚未干燥時(shí)即進(jìn)行固定的方法，適用于痰、宮頸刮片及食管拉網(wǎng)涂片的固定，不適用于太稀薄的標(biāo)本；包括：浸入法和滴加法。（2）干燥固定法

待涂片自然干燥，再滴加或浸入固定液進(jìn)行固定。（三）固定3.注意事項(xiàng)（1）固定液要根據(jù)染色要求，選用合適的固定液。如巴氏或HE染色，應(yīng)選用95%乙醇固定；進(jìn)行MGG染色可選甲醇固定液；而瑞氏染色則以自然干燥固定為宜。（2）防止交叉污染，保持固定液濃度。當(dāng)乙醇固定液濃度低于90%時(shí)，要及時(shí)更新固定液。（3）液體標(biāo)本涂片后，應(yīng)將其在空氣中放置片刻，待涂膜周邊稍干而中央尚未干時(shí)再浸入固定液固定（潮干固定），如等全部細(xì)胞干燥后再固定，染色后細(xì)胞腫脹、核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)模糊不清，此稱為人為退變，將嚴(yán)重影響診斷結(jié)果。（4）標(biāo)本固定時(shí)間因涂片多少與固定液不同而異，一般固定不少于15分鐘。固定時(shí)間一到要及時(shí)染色。穿透力強(qiáng)的固定液固定后不可過夜染色。（四）染色

染色的目的是利用一種或多種染料，使細(xì)胞著色，顯示不同顏色，以便細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)在顯微鏡下易于觀察。

常用的染色方法有HE染色和巴氏染色。

一般染色后即可鏡檢。對陽性或認(rèn)為有保存價(jià)值的涂片需要加蓋玻片進(jìn)行封固保存。（四）染色1.巴氏染色法巴氏染色（Papanicolaou，Pa）主要有蘇木素、橘黃-G、伊紅、亮綠、俾斯麥棕等7種染料。其中蘇木素染胞核，其他染料與胞質(zhì)中不同化學(xué)成分結(jié)合染胞質(zhì)，是細(xì)胞病理學(xué)染色常用的主要方法之一。（1）染色特點(diǎn)：是對細(xì)胞具有多種染色效果，色彩豐富而鮮艷，細(xì)核結(jié)構(gòu)凊晰，胞質(zhì)透明性好，顆粒分明。本法多用于觀察女性雌激素對陰道上皮的影響，其不足則是操作程序復(fù)雜。（四）染色1.巴氏染色法（2）染液配制：①Harris蘇木素染液的配制

配制方法同組織染色。②橘黃-G染液的配制

橘黃-G0.5g，溶于5ml蒸餾水→加無水乙醇95ml→加磷鎢酸0.015g。③EA-36染液的配制材料：0.5%亮綠45ml，0.5%伊紅Y水溶液45ml，0.45%俾斯麥棕水溶液10ml，磷鎢酸0.2g，碳酸鋰飽和液1滴(先配制原液)。亮綠液：亮録0.5g→溶于5ml蒸溜水中→再加無水乙醇至100ml。俾斯麥棕液：俾斯麥0.5g→溶于5ml蒸餾水中→再加無水乙醇至100ml。伊紅Y液：尹紅Y0.5g→溶于5ml蒸餾水中→再加無水乙醇至100ml。臨用前，將亮綠液45ml，伊紅Y液45ml，俾斯麥棕液10ml混合后，再加入磷鎢酸0.2g，飽和碳酸鋰水溶液1滴共同組成EA-36染液。（四）染色1.巴氏染色法（3）染色步驟：固定（15～30min）漸進(jìn)脫水（依次進(jìn)80%、70%、50%乙醇液各1min后水洗）

染細(xì)胞核（Harris蘇木素液5min）

分色

（0.5%鹽酸乙醇分化液數(shù)秒鐘后，流水沖洗）

漸進(jìn)脫水（依次經(jīng)70%、80%，90%乙醇液內(nèi)各脫水1min）染細(xì)胞質(zhì)（浸入橘黃-G染1～2分鐘→進(jìn)95%乙醇液Ⅰ、Ⅱ各1分鐘；再用EA-36染色5分鐘→進(jìn)95%乙醇液浸Ⅰ、Ⅱ各1分鐘）

脫水透明（無水乙醇Ⅰ、Ⅱ；二甲苯Ⅰ、Ⅱ）

封片（中性樹膠封固）。（四）染色1.巴氏染色法（4）染色結(jié)果：①上皮細(xì)胞：核呈深藍(lán)色、核仁紅色，胞質(zhì)顏色隨細(xì)胞類型和分化程度不同而不同，可呈橘黃、粉紅或藍(lán)綠色。②紅細(xì)胞：鮮紅色。③白細(xì)胞：胞質(zhì)呈淡藍(lán)色，核呈深藍(lán)黑色。④黏液：淡藍(lán)色。（四）染色2.瑞氏染色法（1）染色特點(diǎn)：瑞氏（Wright）染色法操作簡便，易于推廣。最常用于血液、骨髓的涂片染色，在胸、腹腔積液穿刺細(xì)胞涂片中可用于鑒別診斷淋巴瘤。其染色的細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，能較好顯示胞質(zhì)及其中的顆粒，經(jīng)過乙醇固定，細(xì)胞不收縮，體積可比HE染色的細(xì)胞約大0.5倍。但對較厚的涂片染色不佳，故一般不適用于痰和宮頸涂片的染色。（四）染色2.瑞氏染色法（2）染液配制：

①瑞氏染液配制：瑞氏染粉1g置研缽中，加甲醇少許，充分研磨，當(dāng)染料溶解后，置粽色玻璃瓶內(nèi)，再同上依次加入甲醇研磨，直至600ml甲醇用完，染液置瓶內(nèi)密封保存。②磷酸緩沖液配制：1%磷酸氫二鈉20ml，1%磷酸二氫鉀30ml，加蒸餾水至100ml，調(diào)整pH為6.4～6.8。（四）染色2.瑞氏染色法（3）染色步驟：①將自然干燥的細(xì)胞涂片水平置于染色架上。②滴加瑞氏染液于涂膜上，以蓋滿涂膜為宜（保持濕潤）。③30s至1min后滴加磷酸緩沖液（染液量的1～3倍），用氣囊吹勻。④10～30min后，流水沖去染液。⑤趁濕加蓋玻片或待干后鏡檢。（四）染色2.瑞氏染色法（4）染色結(jié)果：

細(xì)胞核染紫紅色，細(xì)胞質(zhì)染紫藍(lán)色，黏液染粉紅或淡藍(lán)色。（四）染色3.邁-格-吉染色法（1）染色特點(diǎn)：邁-格-吉（May-Grunwald-Giemsa，MGG）染色法由May-Griinwald和Giemsa兩種染料組成。前者化學(xué)名為曙紅亞甲藍(lán)Ⅱ，由伊紅和亞甲藍(lán)組成，對胞質(zhì)著色較好；后者對胞核著色較好。因此MGG染色，兼有瑞氏、吉氏兩種染色法的優(yōu)點(diǎn)，常用于細(xì)胞涂片染色。此外對細(xì)菌、真菌及膽固醇結(jié)晶也能清楚顯示。MGG染色涂片可保存十余年而不褪色。（四）染色3.邁-格-吉染色法（2）染液配制：①邁-格-吉（MGG）染液:邁-格染料1g，吉氏染粉0.5g，甘油70ml，甲醇600ml，配制方法如瑞氏染液，密封保存于棕色玻璃瓶內(nèi)。自制邁-格染粉法：伊紅1g，亞甲藍(lán)1g，加蒸餾水100ml，攪勻后靜置3天，過濾取其沉淀，用蒸餾水洗3遍，溫箱烤干即成，也可用瑞氏粉（曙紅-亞甲藍(lán)Ⅰ）代替。②磷酸緩沖液:同瑞氏染色。（四）染色3.邁-格-吉染色法（3）染色步驟：①干燥的細(xì)胞涂片水平置于染色架上。②滴加邁-格-吉（MGG）染液在涂膜上，以蓋滿涂膜為宜（保持濕潤）。③30s至1min后滴加磷酸緩沖液（染液量的1～3倍），用氣囊吹勻。④10～30min后，流水沖去染液。⑤趁濕加蓋玻片或待干后鏡檢。（四）染色3.邁-格-吉染色法（4）染色結(jié)果：

MGG染色將細(xì)胞核染成紫紅色，細(xì)胞質(zhì)和核仁染成紫藍(lán)色。（四）染色4.蘇木素-伊紅染色

又稱HE染色，適用于各種細(xì)胞的染色，是細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)中最常采用的染色方法。

步聚與組織切片染色基本相似，但是不需經(jīng)過脫蠟處理，涂片固定后，即可直接染色，時(shí)間也相應(yīng)縮短。

本法操作簡便，染色效果也好，只是胞質(zhì)色彩不豐富，不宜用于觀察陰道涂片的激素水平測定。三、標(biāo)本的采集與制片（一）食管、胃脫落細(xì)胞學(xué)檢查（二）支氣管、肺脫落細(xì)胞學(xué)檢查（三）泌尿道脫落細(xì)胞學(xué)檢查（四）女性生殖道脫落細(xì)胞學(xué)檢查（五）漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)檢查三、標(biāo)本的采集與制片（一）食管、胃脫落細(xì)胞學(xué)檢查1.食管脫落細(xì)胞學(xué)檢查：主要方法有食管拉網(wǎng)和食管鏡刷。（1）食管拉網(wǎng)法：臨床常用于食管脫落細(xì)胞標(biāo)本的采集方法，是食管癌的早期診斷及癌前病變篩查的采集方法。特點(diǎn)：設(shè)備和操作簡便、安全經(jīng)濟(jì)、陽性率高，特別適合基層醫(yī)療單位進(jìn)行大規(guī)模食管癌普查。采集器具的類型：有雙腔橡膠管采集器、單腔塑料管采集器和帶膠囊海綿球采集器三種。三、標(biāo)本的采集與制片（一）食管、胃脫落細(xì)胞學(xué)檢查1.食管脫落細(xì)胞學(xué)檢查拉網(wǎng)方法：以做3次為宜。拉網(wǎng)網(wǎng)囊前端第1次吞咽到達(dá)部位距切牙20cm；第2次到達(dá)部位距切牙25cm；第3次到達(dá)部位距切牙30cm。每次網(wǎng)囊的上半部和下半部都要分別涂片，并做好標(biāo)記。禁忌證：食管靜脈曲張、食管潰瘍、胃及十二指腸潰瘍伴岀血、疾病晩期或長期不能進(jìn)食而體質(zhì)極度衰弱、急性咽喉炎、嚴(yán)重心臟病、高血壓病患者等，以及臨床醫(yī)生認(rèn)為不適宜的患者。三、標(biāo)本的采集與制片（一）食管、胃脫落細(xì)胞學(xué)檢查1.食管脫落細(xì)胞學(xué)檢查（2）食管鏡下刷片法：此法刷片應(yīng)該由消化?？漆t(yī)師操作為宜。采集標(biāo)本后要立即直接涂片4～6張，如有血絲或陳舊性血液，應(yīng)重點(diǎn)涂片。用乙醇乙醚固定液帶濕固定15～30分鐘，然后染色鏡檢。三、標(biāo)本的采集與制片（一）食管、胃脫落細(xì)胞學(xué)檢查2.胃脫落細(xì)胞學(xué)檢查標(biāo)本采集方法：沖洗法;摩擦法;胃鏡直視下細(xì)胞收集法。檢查步驟:（1）抽取第一液讓患者飲下含蛋白酶10mg的溫開水300～400ml或生理鹽水后，經(jīng)口腔置入胃管達(dá)距門齒60cm左右為止，囑患者采取平臥或左側(cè)臥位，用100ml（或50ml）注射器，反復(fù)加壓沖洗胃腔，同時(shí)輕輕按摩上腹部或轉(zhuǎn)換體位，然后將胃內(nèi)液體及胃內(nèi)容物全部抽出丟掉。（2）抽取第二液

向胃內(nèi)注入生理鹽水或林格液300～400ml，再用力反復(fù)抽注，并讓患者轉(zhuǎn)動體位或按摩上腹部使胃腔各部充分水洗，隨后將胃內(nèi)沖洗液抽出。（3）抽取第三液將pH5.6的醋酸緩沖液300～400ml注入胃內(nèi)，以同樣的方法進(jìn)行沖洗后，抽出胃內(nèi)沖洗液為第三液。（4）離心

將抽出的第二、第三液立即冷卻，以3000r/min離心5分鐘，棄去上清液，取出沉淀物涂片，稍干即固定。電動洗胃機(jī)沖洗法操作簡便，沖洗液噴射充分均勻，陽性檢出率高，因此臨床應(yīng)用更為廣泛。三、標(biāo)本的采集與制片（一）食管、胃脫落細(xì)胞學(xué)檢查2.胃脫落細(xì)胞學(xué)檢查注意事項(xiàng)：（1）檢查前準(zhǔn)備要充分，胃內(nèi)不能有食物殘留；（2）要保持壓力適宜、恒定；（3）患者體位一般采取左側(cè)臥位進(jìn)行沖洗，醫(yī)生要根據(jù)病變部位調(diào)整放置胃管的位置和深度；（4）從胃沖洗到涂片固定最好在10分鐘內(nèi)完成。（5）沖洗液應(yīng)為新配制的，溫度要適宜，操作要迅速準(zhǔn)確；（6）如胃沖洗液內(nèi)有多量新鮮血時(shí)，要及時(shí)調(diào)整壓力，改變胃管的深度和位置，并變換體位。（7）臨床檢查與X線高度懷疑是胃癌，而沖洗液檢查為陰性時(shí)，應(yīng)考慮重新檢查。三、標(biāo)本的采集與制片（二）支氣管、肺脫落細(xì)胞學(xué)檢查支氣管、肺脫落細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)是肺癌早期診斷的重要方法。包括痰脫落細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)法（簡稱痰檢）、支氣管鏡刷取或沖洗法、經(jīng)胸腔細(xì)針穿刺法等。其中痰液檢驗(yàn)法陽性檢出率非常高，是確診肺癌的主要方法之一。標(biāo)本采集方法：自然咳痰法、Saccomanno法、超聲波噴霧吸入引痰法。選材：觀察和挑選有診斷意義的痰液是很重要。首先將痰液平鋪在玻璃平皿中，用竹簽或眼科鑷子把痰液撥開，用放大鏡在黑色背景下仔細(xì)觀察，選取帶血絲的痰液、鮮血旁的黏液、灰白色痰絲以及粗如細(xì)絲、呈螺旋卷曲狀、牽引時(shí)可伸長，放松又縮短的痰絲。三、標(biāo)本的采集與制片（二）支氣管、肺脫落細(xì)胞學(xué)檢查涂片：方法：用竹簽將有診斷價(jià)值的痰液1ml左右置于玻片上，然后將無用多余痰液刮去。留黏稠液約0.2ml，用竹簽將痰液慢慢鋪開，涂膜厚度1～2mm(在整個玻片的2/3區(qū)或鋪滿一層黏稠的痰膜)，厚薄要均勻。一次一般涂片2～4張。痰細(xì)胞濃集：目的是去掉痰中黏液，提取細(xì)胞成分，提高陽性檢出率。方法有：乙醇固定沉淀法和胰蛋白酶消化法。固定：帶濕固定。固定液多為乙醚乙醇，時(shí)間20min，再放入水中1min，洗去固定液后，略加溫使其干燥則著色較好。染色：痰液涂片標(biāo)本可采用HE染色或Wright-Giemsa復(fù)合染色法。三、標(biāo)本的采集與制片（三）泌尿道脫落細(xì)胞學(xué)檢查目的：主要用于診斷泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤；細(xì)胞主要來源：腎、輸尿管、膀胱以及尿道的脫落細(xì)胞。在男性，還有前列腺及精囊腺等處的上皮細(xì)胞。標(biāo)本采集要求：尿液標(biāo)本要；防止污染標(biāo)本瓶必須清潔，無灰塵和異物；尿量充足

尿液內(nèi)細(xì)胞量一般較少，標(biāo)本又要經(jīng)離心處理，所以一次收集尿量不能少于50m1。三、標(biāo)本的采集與制片（三）泌尿道脫落細(xì)胞學(xué)檢查標(biāo)本采集方法：①自然排尿

（晨取中段清潔尿）；②導(dǎo)尿管導(dǎo)尿

（用于懷疑患有腎盂或輸尿管腫瘤的患者）；③膀胱沖洗（膀胱憇室內(nèi)癌、原位癌或鱗癌）；④細(xì)胞刷片。制片方法：離心沉淀法

和自然沉淀法

三、標(biāo)本的采集與制片（三）泌尿道脫落細(xì)胞學(xué)檢查1.離心沉淀法：尿液中細(xì)胞成分較少時(shí)，采用二次離心濃集法處理。步驟如下：（1）將尿液搖勻后，倒入4～6支離心管內(nèi)，以1500r/min離心5～10min。（2）取出離心管，傾去上清液后，把各離心管沉淀物集中于同一試管內(nèi)，再以同樣條件離心5～10min。（3）再次取出離心管傾去上清液，搖勻后立即涂片。如細(xì)胞成分多，可取一滴推成薄片；如細(xì)胞成分仍較少，則取2～3滴加在載玻片的偏中位，用竹簽向兩邊涂開，制成厚片，厚度以略能流動為度。每份標(biāo)本涂片4～6張，待風(fēng)干后，立即浸入固定液中固定。三、標(biāo)本的采集與制片（三）泌尿道脫落細(xì)胞學(xué)檢查注意事項(xiàng)：（1）防止涂片脫落，可在沉淀物內(nèi)滴加血清1滴，或在玻片上先涂抹少量蛋白甘油，隨后進(jìn)行涂片。（2）沉淀物中含大量紅細(xì)胞時(shí)宜采用快速推片，使上皮細(xì)胞聚集在標(biāo)本片尾部，便于觀察。（3）當(dāng)尿內(nèi)含大量鹽類結(jié)晶或膠凍樣物時(shí)，會影響鏡檢，可先用0.5mol/LNaOH或0.5mol/L鹽酸滴加到尿液中，調(diào)節(jié)尿液的pH至6.0，使鹽類結(jié)晶溶解。然后離心沉淀，在沉淀物內(nèi)加入95%乙醇5～l0ml靜置5min固定細(xì)胞。最后加入蒸餾水輕輕振動試管使膠凍樣物溶解，再離心留沉淀物制片。三、標(biāo)本的采集與制片（三）泌尿道脫落細(xì)胞學(xué)檢查2.自然沉淀法：用毛細(xì)吸管吸取尿液底部的沉淀物放入沉降筒中，尿中的細(xì)胞成分在重力作用下自然沉降，尿中的水分不斷被濾紙吸干，30分鐘內(nèi)沉降吸收完成。取出標(biāo)本片，風(fēng)干后即可固定染色。三、標(biāo)本的采集與制片（四）女性生殖道脫落細(xì)胞學(xué)檢查是早期防治生殖道腫瘤的重要檢查方法。女性生殖器官包括外陰、陰道、子宮、輸卵管和卵巢。標(biāo)本采集方法：宮頸刮片法和陰道后穹隆吸取法。女性內(nèi)分泌水平檢測：取材最佳部位在陰道側(cè)壁的上1/3處，其次是陰道后穹隆部位；未婚女性宜在小陰唇內(nèi)側(cè)壁取材。三、標(biāo)本的采集與制片（四）女性生殖道脫落細(xì)胞學(xué)檢查注意事項(xiàng)：（1）采集標(biāo)本必須避免接觸宮頸。（2）近期內(nèi)無論是局部還是全身均不能應(yīng)用對陰道上皮有影響的藥物；如炎癥明顯，則不能用于評價(jià)激素水平。（3）涂片厚薄要均勻，涂片上細(xì)胞不能少于300個。（4）一般多用巴氏染色，亦可用邵氏染色。三、標(biāo)本的采集與制片（五）漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)檢查目的：主要用以尋找有無腫瘤細(xì)胞。意義：漿膜腔積液脫落細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)不但能鑒別積液中的良惡性腫瘤細(xì)胞，而且也可根據(jù)脫落細(xì)胞的形態(tài)推測腫瘤的原發(fā)病灶，其臨床診斷陽性檢出率可達(dá)70%～90%，很少有假陽性，是一種很好的診斷方法。三、標(biāo)本的采集與制片（五）漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)檢查標(biāo)本采集：量一般以100～200ml為宜，積液抽出后觀察顏色、性狀并記錄，立即送檢。標(biāo)本保存：如穿刺積液不能立即送檢，應(yīng)：（1）在標(biāo)本內(nèi)加入約為標(biāo)本總量1/20～1/10的40%甲醛溶液固定。（2）加與標(biāo)本等體積的50%乙醇充分混合。（3）置4℃～6℃冰箱保存，但不能超過4小時(shí)。（4）如積液內(nèi)含有較多纖維蛋白原，抽出后容易凝固，可在抽取的標(biāo)本中加入相當(dāng)于1/10標(biāo)本總量的0.l06mol/L枸櫞酸鈉溶液，混勻后送檢。三、標(biāo)本的采集與制片（五）漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)檢查制片步驟：（1）倒掉標(biāo)本瓶上部液體，取出20～40ml底部沉淀物，分置入2～4個離心管中，用離心機(jī)以3000r/min離心10～15min。（2）取出離心管，倒掉上清液，將沉淀物吸至玻片上，用吸管在與玻片平行方向輕輕擦涂，使沉淀物在玻片上均勻分布、厚度適宜，待稍干后固定、染色。制片4～6張。固定：制好的涂片平放待水分蒸干，至標(biāo)本片尾部或邊緣開始變干，晃動玻片無液體流動時(shí)浸入95%乙醇固定10～15分鐘，然后染色。染色：可選擇巴氏染色或HE染色。四、液基薄層細(xì)胞制片技術(shù)概念：是指通過特制取樣器，采集標(biāo)本，將細(xì)胞100%保存于細(xì)胞保存液內(nèi)，在通過技術(shù)手段，去除紅細(xì)胞、黏液等非診斷成分，通過不同原理的制片技術(shù)將細(xì)胞均勻、薄層的涂布在載玻片上。類型：包括膜式液基薄層細(xì)胞制片技術(shù)（TCT）和比重離心沉淀式細(xì)胞制片技術(shù)（LCT）兩種。應(yīng)用范圍：應(yīng)用于所有傳統(tǒng)脫落細(xì)胞學(xué)檢查，包括婦科涂片、體液標(biāo)本（如尿）、體腔滲出/漏出液（如胸腹腔積液、腦脊液等）、痰液、支氣管沖洗液、食管拉網(wǎng)式標(biāo)本以及細(xì)針穿刺細(xì)胞標(biāo)本的檢測等。另外，還可用于免疫組織化學(xué)、分子原位雜交、顯微測量以及流式細(xì)胞學(xué)檢查等。四、液基薄層細(xì)胞制片技術(shù)（一）標(biāo)本采集方法：用專用的一次性取樣器導(dǎo)入宮頸管，在宮頸移行區(qū)（鱗狀上皮細(xì)胞與柱狀上皮細(xì)胞交接區(qū)），按順時(shí)針方向緩慢旋轉(zhuǎn)五圈以上。然后將取樣器前端的刷頭放入裝有保存液的小瓶中漂洗，擰緊瓶蓋。注意事項(xiàng)：①取樣前應(yīng)先用棉簽將宮頸口表面的黏液盡可能的擦拭干凈；②取材時(shí)要施加一定的力度，朝一個方向旋轉(zhuǎn)5圈以上，施加力度不夠或者表面黏液過多時(shí)，刷頭會在黏液表面打滑，取到的成分全是黏液（非診斷成分），細(xì)胞成分少；③取樣后將刷頭在細(xì)胞保存液內(nèi)反復(fù)刷洗5～8次，將細(xì)胞洗入保存液內(nèi)，丟棄刷頭，蓋緊瓶蓋。四、液基薄層細(xì)胞制片技術(shù)（二）細(xì)胞混勻?qū)⒀b有標(biāo)本的細(xì)胞保存液瓶放在標(biāo)本混勻器上，震蕩、混勻1～2min。將過濾器安裝到自動制片機(jī)旋轉(zhuǎn)頭下方，將保存液安放到標(biāo)本平座上，啟動程序，高速電機(jī)帶動過濾器在瓶里以3700r/min的速度自轉(zhuǎn)，分散黏液，混勻細(xì)胞，但又不損傷細(xì)胞，并保存成團(tuán)的細(xì)胞如頸管細(xì)胞或生化細(xì)胞不被打散。四、液基薄層細(xì)胞制片技術(shù)（三）細(xì)胞采集細(xì)胞混勻后，過濾器停止轉(zhuǎn)動，負(fù)壓管開始抽吸，標(biāo)本瓶中的液體穿過過濾膜被吸入過濾器，其中的細(xì)胞貼附在過濾膜外表面。過濾膜上均勻分布著許多微細(xì)的小孔，足以保證細(xì)胞成分甚至沾滯在一起的霉菌孢子等不被穿過。機(jī)器通過傳感器檢測過濾器內(nèi)液體流速來控制負(fù)壓抽吸過程。（四）細(xì)胞轉(zhuǎn)移過濾膜被細(xì)胞覆蓋后，過濾器提起并旋轉(zhuǎn)180°，過濾膜與上方平置玻片相對，二者接觸后，過濾膜內(nèi)微弱正壓及玻片與細(xì)胞間正、負(fù)電荷的作用，膜上的細(xì)胞被轉(zhuǎn)移到玻片上直徑20mm特定區(qū)域上，形成細(xì)胞薄層。每小時(shí)可處理約30份標(biāo)本。

通過上述細(xì)胞混勻、采集和轉(zhuǎn)移等自動制片程序制成細(xì)胞薄層玻片，會自動拋入玻片杯內(nèi)，取出玻片，放入染色架內(nèi)，然后進(jìn)行固定染色封片鏡檢。四、液基薄層細(xì)胞制片技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：采用的是軟質(zhì)毛刷，創(chuàng)傷較少；黏液等非診斷成分極少；薄層分布，片面清晰，細(xì)胞不重疊，不易變形，標(biāo)本均勻；在檢查高度和低度病變方面比傳統(tǒng)宮頸涂片準(zhǔn)確度明顯提高，并且有可重復(fù)性。因而大大提高了宮頸癌的檢出率和組織活檢的確認(rèn)率。缺點(diǎn)：是成本高導(dǎo)致檢查費(fèi)用高。五、細(xì)胞包埋技術(shù)細(xì)胞包埋技術(shù)是使細(xì)胞固定化的一種技術(shù)方法。固定化細(xì)胞技術(shù)是指通過物理或化學(xué)的方法將分散、游離的細(xì)胞固定在某一限定空間區(qū)域內(nèi)，以提高細(xì)胞的濃度，使其保持較高的生物活性并反復(fù)利用的方法。方法：直接法、瓊脂法、蛋清法、戊二醛法和冷凍法等。六、涂片的識別

涂片的識別是細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)的基礎(chǔ)。

細(xì)胞涂片的標(biāo)本是在不同疾病狀態(tài)下獲得的，細(xì)胞涂片制成后即可進(jìn)行鏡檢，在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)的變化，識別涂片中各種細(xì)胞成分，根據(jù)典型細(xì)胞做出細(xì)胞學(xué)診斷，是病理細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)的主要目的。

六、涂片的識別（一）涂片中的背景成分涂片中除脫落細(xì)胞以外的物質(zhì)統(tǒng)稱為背景成分，對細(xì)胞學(xué)診斷有一定的提示作用。常見的背景成分有兩類。1．非上皮來源的細(xì)胞成分：在涂片中可有紅細(xì)胞、白細(xì)胞、漿細(xì)胞、組織細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及多核巨噬細(xì)胞等背景細(xì)胞，對鑒別診斷有較大意義。2．其他物質(zhì)

涂片中有時(shí)可見到大小不等深藍(lán)色顆?；驁F(tuán)塊狀的蘇木素沉淀，淺紫紅色條狀、片狀或云霧團(tuán)塊狀的黏液，以及棉花纖維等污染物質(zhì)。

六、涂片的識別（二）炎癥時(shí)的脫落細(xì)胞（1）急性炎癥：脫落細(xì)胞以變性、壞死為主，上皮細(xì)胞腫脹退變。背景中有較多壞死組織碎片、纖維蛋白及大量中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。（2）慢性炎癥：主要以細(xì)胞的增生、再生及化生為主，涂片中可見較多成團(tuán)增生的上皮細(xì)胞，其核稍增大，核仁明顯，胞質(zhì)呈嗜堿性。炎細(xì)胞以淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞為主，有時(shí)可見較多巨噬細(xì)胞。（3）亞急性炎癥：凃片中除有退變的上皮細(xì)胞和壞死組織碎屑，還有增生的上皮細(xì)胞及中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞。（4）肉芽腫性炎：最常見的肉芽腫性炎是結(jié)核病，其涂片中可見構(gòu)成結(jié)核結(jié)節(jié)的各種成分，如上皮樣細(xì)胞、Langhans巨細(xì)胞、干酪樣壞死物質(zhì)及淋巴細(xì)胞等。但要明確診斷，還必須要檢見病原體（需特殊染色）。六、涂片的識別（三）核異質(zhì)核異質(zhì)是指脫落細(xì)胞的核發(fā)生異常改變核異質(zhì)表現(xiàn)核大小、形態(tài)異常，核染色質(zhì)增多，分布不勻，核膜增厚，核邊界不整齊等，可出現(xiàn)雙核與多核。核異質(zhì)細(xì)胞又稱間變細(xì)胞，相當(dāng)于病理組織學(xué)上的不典型增生。核異質(zhì)細(xì)胞分為：1．輕度核異質(zhì)細(xì)胞：細(xì)胞核輕度增大，約較正常大半倍，輕度或中度畸形，可見雙核或多核，核染色較深，但核染色質(zhì)顆粒細(xì)致、均勻，偶見個別細(xì)胞呈粗顆粒狀，一般多見于鱗狀上皮的表層和中層細(xì)胞。常出現(xiàn)在慢性炎癥時(shí)又稱炎癥性核異質(zhì)細(xì)胞。2．中度核異質(zhì)細(xì)胞：形態(tài)特征介于輕度和重度之間。3．重度核異質(zhì)細(xì)胞：細(xì)胞核體積增大，比正常大1～2倍，有中度以上的畸形，染色質(zhì)顆粒較粗，核染色較深。形態(tài)上接近于癌細(xì)胞，且有可能發(fā)展為癌，故又稱癌前核異質(zhì)。重度核異質(zhì)細(xì)胞常見于底層細(xì)胞和部分中層細(xì)胞。六、涂片的識別1.惡性腫瘤細(xì)胞的形態(tài)特征（1）核異型性：是診斷性惡性腫瘤細(xì)胞的依據(jù)。表現(xiàn)：核體積增大；核質(zhì)比例增大；核大小不等；核畸形；核染色加深；核仁明顯；多核；裸核；異常核分裂等。（2）胞質(zhì)異型性：胞質(zhì)可反映細(xì)胞的分化傾向，決定細(xì)胞的大小和形態(tài)。惡性腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)一般有以下特征：細(xì)胞分化越差，胞質(zhì)越少；胞質(zhì)多少不等；胞質(zhì)嗜堿性增強(qiáng)

；胞質(zhì)內(nèi)有時(shí)可見吞噬的異物，并偶見

“封入細(xì)胞”。（3）癌細(xì)胞團(tuán)：癌有成巢狀排列的形態(tài)特征，癌細(xì)胞的黏聚力明顯低