DB37T 2959-2017 甲砜霉素粉添加磺胺二甲嘧啶的測定 高效液相色譜法　

DB37DB37/T2959—2017甲砜霉素粉添加磺胺二甲嘧啶的測定高效液相色譜法山東省質量技術監(jiān)督局發(fā)布IDB37/T2959—2017本標準按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標準由山東省畜牧獸醫(yī)局提出并管理。本標準由山東省畜牧業(yè)專業(yè)標準化技術委員會歸口。本標準起草單位：山東省獸藥質量檢驗所。本標準主要起草人：高迎春、徐恩民、楊修鎮(zhèn)、李淑花、陳玲、王燕、薄永恒、魏秀麗、劉少寧、1DB37/T2959—2017本標準規(guī)定了甲砜霉素粉中添加磺胺二甲嘧啶的高效液相色譜(HPLC)測定方法。本標準適用于甲砜霉素粉中添加磺胺二甲嘧啶的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。光譜對照定性，外標法定量。4試劑或材料4.1乙腈(CH?CN):色譜純。4.2冰乙酸(CH3COOH):優(yōu)級純。4.3氫氧化鈉溶液(0.1mol/L):稱取氫氧化鈉4g(準確至0.01g),加水溶解，轉移至1000mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。4.427%乙腈：量取乙腈27mL,置100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。4.50.2%冰乙酸溶液：吸取冰乙酸(4.2)2.0mL,置1000mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，4.6乙腈+0.2%冰乙酸溶液(27+73):量取乙腈(4.1)270mL與0.2%冰乙酸溶液(4.5)730mL,4.8磺胺二甲嘧啶對照品：含量≥98%。注：除非另有規(guī)定，所用試劑均為分析純；水符合GB/T6682一級水的規(guī)定。5儀器設備5.1高效液相色譜儀：配二極管陣列檢測器。5.2分析天平：感量0.00001g、0.0001g、0.01g。2DB37/T2959—20176試驗步驟6.1對照品溶液的制備稱取磺胺二甲嘧啶對照品(4.8)50mg(準確至0.01mg),置50mL容量瓶中，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液(4.3)5.0mL并用27%乙腈(4.5)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL置50mL容量瓶中，用27%乙腈稀6.2供試品溶液的制備化鈉溶液(4.3)5.0mL溶解，用27%乙腈(4.5)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL置50mL容量瓶中，用27%乙腈稀釋至刻度，搖勻，待測。6.3儀器參考條件6.3.1液相參考條件色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，4.6mm×250mm,5μm,或性能相當者；流動相：乙腈+0.2%冰乙酸溶液(27+73)(4.6);流速：1.0mL/min;柱溫：25℃;6.3.2二極管陣列檢測器參考條件定性采集波長范圍：200nm～400nm;定量波長：270nm。6.4.1定性測定通過保留時間和色譜峰的紫外光譜相對照定性。樣品溶液與對照品溶液保留時間的相對偏差不大于2.5%;樣品溶液色譜峰的紫外光譜與對照溶液色譜峰的紫外光譜特征峰一致，則可判斷樣品中存在磺胺二甲嘧啶，典型的磺胺二甲嘧啶光譜圖參見圖A.1。6.4.2定量測定取供試品溶液和對照品溶液各10HL注入液相色譜儀，在上述色譜條件下進行測定，提取270nm波長處的色譜圖，外標法定量，典型的色譜圖參見附錄A.2～A.3。7試驗數(shù)據(jù)處理樣品中磺胺二甲嘧啶的含量(mg/g)按下式計算：3DB37/T2959—2017X——供試品中磺胺二甲嘧啶的含量，單位為毫克每克(mg/g);Cx——供試品溶液中磺胺二甲嘧啶濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);Cs——對照品溶液中磺胺二甲嘧啶濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);Ax——供試品溶液中磺胺二甲嘧啶峰面積；As——對照品溶液中磺胺二甲嘧啶峰面積；m——供試品取樣量，單位為克(g)。測定結果用平行測定的算術平均值表示，結果保留三位有效數(shù)字。8檢測方法的靈敏度、準確度和精密度本方法的檢出限為0.03mg/g(甲砜霉素粉規(guī)格5%)、0.10mg/g(甲砜霉素粉規(guī)格15%),本方法的報告限為1mg/g(甲砜霉素粉規(guī)格5%)、3mg/g(甲砜霉素粉規(guī)格15%)。8.2準確度本方法在150mg/g~600mg/g添加濃度水平上的回收率為95%～105%。8.3精密度本方法重復性測定條件下，兩次測定結果的相對偏差≤2%。4(資料性附錄)光譜圖和色譜圖光譜圖和色譜圖見A.1～A.3。3.692提取的0.900.80266.60.700.600.400.300.200.100.00220.00240.00260.00280.00300.00DB37/T2959—2017320.00340.00360.00380.00400.00圖A.1磺胺二甲嘧啶光譜圖蜂十…3.687蜂十…3.6870.60足0.103.00ZZ圖A.2磺胺二甲嘧啶對照品色譜圖5D