《大麥苗及其制品中大麥黃苷和皂草黃苷含量的測(cè)定 高效液相色譜法》

ICSXX.XXX.XX

CCSXXXX

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/CSTMXXXXX—202X

大麥苗及其制品中大麥黃苷和皂草黃苷含

量的測(cè)定高效液相色譜法

Determinationoflutonarinandsaponarininbarleyseedlingandtheir

products-highperformanceliquidchromatography

202X-XX-XX發(fā)布202X-XX-XX實(shí)施

中關(guān)村材料試驗(yàn)技術(shù)聯(lián)盟發(fā)布

T/CSTMXXXXX—2023

大麥苗及其制品中大麥黃苷和皂草黃苷含量的測(cè)定高效液相色譜

法

重要提示（危險(xiǎn)或警告或注意）：使用本文件的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。本文件并未

指出所有可能的安全問(wèn)題。使用者有責(zé)任采取適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧?，并保證符合國(guó)家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的

條件。

1范圍

本文件規(guī)定了青稞苗、皮大麥苗、青稞苗制品、皮大麥苗制品中大麥黃苷和皂草黃苷含量測(cè)定的高

效液相色譜方法。

本文件適用于青稞苗、皮大麥苗、青稞苗制品、皮大麥苗制品中大麥黃苷和皂草黃苷含量的測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅

該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

大麥苗barleyseedlingorbarleygrass

新鮮的青稞嫩莖葉和皮大麥嫩莖葉。

3.2

大麥苗制品barleygrassproduct

以大麥苗為主要原料，添加或不添加其它的輔料以及食品添加劑，經(jīng)挑選、清洗、干燥、粉碎、提取、

濃縮、配料、混合、滅菌、包裝等工序加工而成的產(chǎn)品。

4原理

試樣用60%乙醇溶液超聲提取，微孔濾膜過(guò)濾，高效液相色譜法測(cè)定，外標(biāo)法定量。

5試劑和材料

5.1無(wú)水乙醇（CH3CH2OH）：分析純。

5.2甲酸（HCOOH）：色譜純。

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5.3甲醇（CH3OH）：色譜純。

5.4實(shí)驗(yàn)用水：應(yīng)符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水要求。

5.5乙醇溶液（60%）：量取無(wú)水乙醇60mL于100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

5.6乙醇溶液（30%）：量取無(wú)水乙醇30mL于100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

5.7甲酸溶液（0.5%）：量取5mL甲酸于1000mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，臨用時(shí)配制。

5.8大麥黃苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（500μg/mL）

稱取25mg大麥黃苷標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（純度不低于95%），精確到0.01mg，至50mL容量瓶中，用60%

乙醇溶液（5.5）超聲至溶解，定容。-18℃下冷凍保存，保存期12個(gè)月。

5.9皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（500μg/mL）

稱取25mg皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（純度不低于95%），精確到0.01mg，至50mL容量瓶中，用乙醇

（5.1）超聲至溶解，定容。-18℃下冷凍保存，保存期12個(gè)月。

5.10混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（100μg/mL）

精密移取各1.0mL的大麥黃苷（5.8）和皂草黃苷（5.9）儲(chǔ)備液于5mL容量瓶中，用水定容。0?4℃

下冷藏保存，保存期3個(gè)月。

5.11混合標(biāo)準(zhǔn)工作液

用30%乙醇溶液（5.6）將混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（5.10）逐級(jí)稀釋，得到濃度為0.500、1.00、5.00、10.0、

20.0、50.0μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。臨用時(shí)配制。

5.12濾膜：0.45μm有機(jī)微孔濾膜。

6儀器設(shè)備

6.1高效液相色譜儀：配紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。

6.2分析天平：感量1mg、0.1mg和0.01mg。

6.3超聲波清洗儀：功率≥500W。

6.4超純水機(jī)。

6.5離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥8000rpm。

6.6粉碎機(jī)。

6.7不銹鋼金屬篩：孔徑0.425mm。

7試驗(yàn)步驟

7.1試樣制備

7.1.1大麥苗

將青稞苗和皮大麥苗陰干或低溫干燥，用四分法分取適量或取全部，取有代表性試樣50g?100g，

用粉碎機(jī)粉碎后，過(guò)孔徑0.425mm篩（6.7），混勻后常溫陰涼處保存。

7.1.2大麥苗制品

7.1.2.1膠囊、固體飲料等粉末狀產(chǎn)品

將膠囊內(nèi)容物或固體飲料等粉末狀產(chǎn)品倒出，置于能容納2-5倍試樣體積的帶蓋容器中，通過(guò)反復(fù)

振搖和顛倒容器使試樣充分混勻，過(guò)孔徑0.425mm篩（6.7），混勻后常溫陰涼處保存。

7.1.2.2片狀或顆粒狀產(chǎn)品

用四分法分取適量或取全部，取有代表性試樣25g?50g，用粉碎機(jī)粉碎后，過(guò)孔徑0.425mm篩

（6.7），混勻后常溫陰涼處保存。

7.1.2.3液體產(chǎn)品

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液體產(chǎn)品置0?4℃冷藏保存。檢測(cè)前取出放置室溫，通過(guò)反復(fù)振搖和顛倒容器使試樣充分混勻后用

于檢測(cè)。

7.2試樣供試品溶液的制備

7.2.1固體試樣供試品溶液的制備

稱取0.5（g精確至0.1mg）的固體試樣，置于150mL三角瓶中，準(zhǔn)確加入25mL60%乙醇溶液（5.5），

稱定質(zhì)量。超聲30min，冷卻至室溫，用60%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻。8000rpm離心5min，取上

清液1mL，加1mL水稀釋，混勻，過(guò)0.45μm（5.12）濾膜，待測(cè)。

7.2.2液體試樣供試品溶液的制備

稱取10g（精確至1mg）的液體試樣，置于50mL容量瓶中，加入15mL無(wú)水乙醇（5.1），超聲

30min，冷卻至室溫，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻。8000rpm離心5min，取上清液1mL，加1mL

水稀釋，混勻，過(guò)0.45μm（5.12）濾膜，待測(cè)。

7.3液相色譜參考條件

a)色譜柱：C18（250mm×4.6mm，5μm），或性能相當(dāng)者。

b)流動(dòng)相：甲醇（5.1.3）-0.5%甲酸水溶液（5.2.3）（30:70，體積比）等度洗脫。

c)柱溫：30℃。

d)流速：1mL/min。

e)檢測(cè)波長(zhǎng)：大麥黃苷355nm，皂草黃苷338nm。

f)進(jìn)樣量：10μL。

7.4校準(zhǔn)工作曲線的繪制

將標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（5.11）進(jìn)樣測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱

坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)工作曲線，得到回歸方程。大麥黃苷和皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖，見附錄A。在

實(shí)際檢測(cè)中，可根據(jù)樣品的含量進(jìn)行單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)曲線，做單點(diǎn)校準(zhǔn)曲線時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度應(yīng)

接近供試品溶液的濃度，做多點(diǎn)校準(zhǔn)曲線時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液應(yīng)不少于5個(gè)點(diǎn)。

7.5試樣供試品溶液的測(cè)試

將試樣供試品溶液進(jìn)樣測(cè)定，以保留時(shí)間定性，峰面積定量，按照外標(biāo)法計(jì)算供試品溶液中大麥黃

苷和皂草黃苷的濃度。試樣供試品溶液中目標(biāo)物的響應(yīng)值應(yīng)在校準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，超過(guò)線性范圍則應(yīng)適當(dāng)

稀釋或濃縮后再進(jìn)樣分析?；蛑匦略O(shè)計(jì)校準(zhǔn)工作曲線的各個(gè)濃度點(diǎn)，在保證分離度的條件下適當(dāng)減少或

加大進(jìn)樣體積。

7.6空白試驗(yàn)

除不加試樣外，均按上述步驟進(jìn)行操作?？瞻自囼?yàn)中被測(cè)指標(biāo)不得檢出。

8試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

試樣中大麥黃苷和皂草黃苷含量按公式（1）計(jì)算：

式中：

X——試樣中大麥黃苷和皂草黃苷的含量，單位為克每百克（g/100g）；

C——標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣液中大麥黃苷和皂草黃苷的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；

V——樣品溶液定容體積，單位為毫升（mL）；

m——所取試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；

N——樣品溶液稀釋倍數(shù)；

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10-4——換算系數(shù)（由μg/g換算成g/100g的換算因子）。

每個(gè)試樣取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測(cè)定，以其算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果。對(duì)于固體樣品，當(dāng)含量大于或等于

0.01%時(shí)，結(jié)果保留3位有效數(shù)字；當(dāng)含量小于0.01%時(shí)，結(jié)果保留2位有效數(shù)字。對(duì)于液體樣品，當(dāng)含

量大于或等于0.001%時(shí)，結(jié)果保留3位有效數(shù)字；當(dāng)含量小于0.001%時(shí)，結(jié)果保留2位有效數(shù)字。

9精密度和測(cè)量不確定度

9.1精密度

在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。

9.2測(cè)量不確定度

測(cè)量結(jié)果不確定度主要來(lái)源于系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制引入的不確定度、校準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定

度、樣品前處理引入的不確定度、以及測(cè)量重復(fù)性引入的不確定度。

10質(zhì)量保證和控制

樣品測(cè)定過(guò)程中應(yīng)隨機(jī)插入空白以及標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行檢查。

在可能的條件下，應(yīng)根據(jù)樣品供試品溶液濃度來(lái)設(shè)計(jì)校準(zhǔn)工作曲線，應(yīng)使樣品供試品溶液濃度盡量

接近校準(zhǔn)工作曲線的中心點(diǎn)。

若樣品重復(fù)性精密度不符合要求則要求查明原因并重新對(duì)該樣品進(jìn)行檢測(cè)。

11試驗(yàn)報(bào)告

試驗(yàn)報(bào)告至少應(yīng)給出以下幾個(gè)方面的內(nèi)容：

a)識(shí)別樣品、實(shí)驗(yàn)室和試驗(yàn)日期所需的全部資料；

b)引用標(biāo)準(zhǔn)；

c)結(jié)果及其表示；

d)測(cè)定中發(fā)現(xiàn)的異?，F(xiàn)象；

e)對(duì)結(jié)果可能已產(chǎn)生影響的本文件中未做規(guī)定的各種操作或任選的操作。

12其他

固體樣品稱樣量0.5g，定容體積25mL，稀釋倍數(shù)為2，進(jìn)樣體積10μL時(shí)，本標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限

大麥黃苷為15mg/kg、皂草黃苷為20mg/kg，定量限大麥黃苷為45mg/kg、皂草黃苷為60mg/kg；液

體樣品稱樣量10g，定容體積50mL，稀釋倍數(shù)為2，進(jìn)樣體積10μL時(shí)，本標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限大麥黃

苷為1.5mg/kg、皂草黃苷為2.0mg/kg，定量限大麥黃苷為4.5mg/kg、皂草黃苷為6.0mg/kg。

在不改變樣品的提取液料比情況下，大麥黃苷和皂草黃苷定量測(cè)定上限為10g/100g；對(duì)于含量超

過(guò)測(cè)定上限的樣品，可以適當(dāng)增大提取溶劑體積或在保證樣品均一性前提下，減少樣品稱樣量。

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附錄A

（資料性）

大麥黃苷和皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖

大麥黃苷和皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖見圖A.1。

圖A.1大麥黃苷和皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖

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