第九章疾病與人類健康

第九章疾病與人類健康腫瘤與癌癥人免疫缺陷病毒——HIV乙型肝炎病毒——HBV人禽流感的分子生物學機制嚴重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥——SARS的分子機制基因治療Contents第一節(jié)腫瘤與癌癥內容提要：反轉錄病毒致癌基因原癌基因（細胞轉化基因）產物及其分類原癌基因的表達調控基因相互作用與癌基因表達

癌：是一群不受生長調控而繁殖的細胞，也稱惡性腫瘤。良性腫瘤：是一群僅局限在自已的正常位置，且不侵染周圍其他組織和器官的細胞。細胞癌變的分子基礎：基因突變一、癌基因（oncogene)癌基因的分類病毒癌基因：(virusoncogene,v-onc)DNA病毒(乙肝病毒)、RNA病毒（反轉錄病毒）細胞轉化基因：(cellular-oncogene,c-onc)原癌基因的突變產物。(一)反轉錄病毒致癌基因（P339）Rous于1910年首先發(fā)現(xiàn)雞肉瘤病毒（后稱勞斯肉瘤病毒RSV），研究證明它是一種反轉錄病毒，接種給雞后可誘發(fā)肉瘤。1966年，85歲的勞斯獲得諾貝爾獎。1、反轉錄病毒顆粒結構（P339）

調節(jié)和啟動轉錄

LTR

gag

pol

env

src

LTR

長末端重復序列癌基因正常的病毒基因產生病毒表面糖蛋白產生逆轉錄酶和整合酶

產生病毒垮膜蛋白2、反轉錄病毒基因組結構產生p60src蛋白質，磷酸化蛋白。靶蛋白磷酸化（P341）3、反轉錄病毒的復制斷裂基因完整的沒有斷裂的可讀框

(二)細胞轉化基因

細胞轉化基因實質上就是由一類原癌基因突變而來。當原癌基因在某些外界因素（如放射線、化學致癌物等）的作用下，發(fā)生數(shù)量和結構上的微細變化，形成了致癌性的細胞轉化基因，從而使正常細胞轉化為腫瘤細胞。

原癌基因是細胞內與細胞增殖相關的正常基因，是維持機體正常生命活動所必須的，在進化上高等保守。

當原癌基因的結構或調控區(qū)發(fā)生變異，基因產物增多或活性增強時，使細胞過度增殖，從而形成腫瘤。

1、原癌基因原癌基因的特點:廣泛存在于生物界中；基因序列高度保守；作用通過其產物蛋白質來體現(xiàn)；正常情況下表達水平很低;被激活后，形成致癌性的細胞轉化基因。原癌基因的分類：根據原癌基因產物在細胞中的位置，可分為：與膜結合的蛋白，如src基因產物；可溶性蛋白，如mos基因產物；核蛋白，如myc基因產物。根據原癌基因表達產物的功能，可分為：蛋白激酶類，如Src家族（酪氨酸蛋白激酶類）生長因子類生長因子受體類GTP結合蛋白類，如Ras家族核蛋白類（DNA結合蛋白），如Myc家族未知功能類原癌基因：單拷貝、正常情況下低水平表達或根本不表達癌基因？？當原癌基因的結構或調控區(qū)發(fā)生變異，基因產物增多或活性增強時，使細胞過度增殖，從而形成腫瘤。堿基缺失或單堿基突變基因擴增染色體重排蛋白質活性大大提高蛋白質未變化，但總量大大提高增強子功能使癌基因高效表達與強啟動子基因相融合，提高癌基因表達效率

原癌基因2、原癌基因的激活機制（P346）（1）點突變（2）LTR（longterminalrepeat)插入強啟動子（3）基因重排（rearrange)（4）缺失（Deletion）oncogene(-)cancer一些原癌基因5’上游存在負調控序列，該序列的缺失或突變，則喪失抑制癌基因表達的能力。Brukitt淋巴瘤中c-myc因負調控序列缺失或LTR插入而增強表達。（5）基因擴增

蛋白質結構未變化，但總量大大提高基因擴增

原癌基因使每個細胞中基因拷貝數(shù)增加，從而直接增加可用的轉錄模板數(shù)以增加基因表達。3、基因互作與癌基因表達（1）染色體構象對原癌基因表達的影響基因表達不僅取決于基因本身及其相鄰區(qū)域的一級結構，也取決于其空間構象，即基因在染色體上的空間排列和染色質的結構。當兩個基因相距太近時，往往不易形成有利于高效轉錄的空間結構?；蝾I域：基因與基因之間的間隔距離基因領域效應：同一DNA鏈上兩個具有相同轉錄方向的基因間隔小于一定長度時，影響有效轉錄所必需的染色質結構的形成，從而使這兩個基因中的一個或兩個均不能轉錄或轉錄活性顯著降低。0.3kb-5kb，最佳間隔距離與兩個基因的總長度成正相關。（2）原癌基因終產物對基因表達的調控某種原癌基因產物對另一種原癌基因表達的調控作用；某種原癌基因產物對自身表達的反饋調控作用癌基因產物通過介質傳遞生長刺激信號的部位有3處：①癌基因產物本身模擬了生長因子，因而與相應的受體作用，以自分泌的方式刺激細胞生長；②癌基因產物模擬了已結合配體的生長因子受體，從而在無外源生長因子時提供了促進細胞分裂的信號；③癌基因產物作用于細胞內生長控制途徑，解除此途徑對外源刺激信號的需求。（3）抑癌基因產物對原癌基因的調控抑癌基因(tumorsuppressorgene)

/隱性癌基因：是一種抑制細胞生長和腫瘤形成的基因。如：Rb抑癌基因、抑癌基因p53抑癌基因與原癌基因在生物學上有以下幾點差異：①在功能上，抑癌基因起負調控作用，而原癌基因起正調控作用；②在遺傳方式上，原癌基因是顯性的，而抑癌基因在細胞水平上是隱性的，③在突變發(fā)生的細胞類型上，抑癌基因突變可以發(fā)生在體細胞中，也可能發(fā)生在生殖細胞中并通過生殖細胞得到遺傳。原癌基因突變只發(fā)生在體細胞中。（4）外源信號對原癌基因表達的影響

細胞外信號（包括生長因子、激素、神經遞質、藥物等）作用于靶細胞后，通過細胞膜受體系統(tǒng)或其他直接途徑被傳遞至細胞內，再通過多種蛋白激酶的活化，對轉錄因子進行修飾，然后引發(fā)一系列基因的轉錄激活。第六節(jié)基因治療基因治療的主要途徑基因治療中的病毒載體基因治療中的非病毒載體基因治療（Genetherapy

）

基因治療（Genetherapy

）：指應用DNA重組技術，將外源正?；驅氚屑毎?，以糾正或補償因基因缺陷和異常引起的疾病,以達到治療的目的。為達到這一目的，實施相應的策略。基因治療實例1、復合免疫缺陷綜合征的基因治療（人類Gene治療成功例子）ADA缺乏癥-——致死性疾病，患者由于腺苷酸脫氨酶（ADA）缺乏。ADA-Gene+vector（逆轉錄病毒）

重組分子患者TLyCIL-2刺激C分裂導入細胞生長分裂

10天

Gene表達

回輸患兒體內

1~2月治療一次,10個月患兒體內ADA水平達正常人的25%

2、乙型血友病XR，患者凝血因子Ⅸ缺乏，Ⅸ因子基因定位在Xq26.3~q27.2。臨床表現(xiàn)，易出血，凝血時間長，輕傷、小手術后常出血不止。發(fā)病率為1/30000。例如：我國學者薛京倫實施的FⅨ的基因治療。

逆轉錄病毒載體+FⅨcDNA

重組體

5`LTR

FⅨneoSV

PSO

LTR3`導入倉鼠細胞（CHO）→FⅨ表達；導入乙型血友病患者皮膚成纖維細胞（體外培養(yǎng)）→FⅨ表達；91年，導入乙型血友病患者皮膚成纖維細胞（體外培養(yǎng)）→回植病人皮下→FⅨ基因表達，F(xiàn)Ⅸ基表達水平達正常人的5%。是我國基因治療成功的例子。3、黑色素瘤的基因治療腫瘤Gene治療是人們十分關注的問題，進行了廣泛的探索。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤浸潤淋巴細胞——TIL，它積聚腫瘤部位，并在該處持續(xù)存在而無副作用，利用此特點協(xié)助治療腫瘤。例：細胞因子基因治療和腫瘤壞死因子基因治療

①IL-2Gene②TNF-Gene

（白介2）

（腫瘤壞死因子）

逆轉錄病毒載體

導入

TIL（體外培養(yǎng)的自體細胞）回植患者體內

TIL進入自體腫瘤部位，提高細胞因子殺傷腫瘤細胞的作用。4、自殺基因的基因治療

原理：即用（逆轉錄）病毒載體將編碼某種酶的基因（自殺基因）轉染到腫瘤細胞中，此酶可將一種無害的藥物前體轉變?yōu)榧毎緩秃衔?，進而殺傷腫瘤細胞（腫瘤細胞不能復制而死亡）。這種基因載體只能在特定的組織或腫瘤中表達，而正常細胞中不表達。如：自殺基因+病毒載體

轉染重組載體

藥物前體無毒Gene→酶→↓

藥物復合物有毒

細胞死亡例如：

單純皰疹病毒

哺乳動物細胞

HSVGene-TK

（在腫瘤細胞中表達，正常細胞中不表達）Gene—TKGCV（胸苷類似物）

TdRPp

GCV---p

抑制DNA合成脫氧胸苷酸

腫瘤細胞死亡鄰近細胞死亡/凋亡（旁觀者效應）一、基因治療的主要途徑1990年第一次利用反轉錄病毒為載體，把DAA基因導入來處患者的T-淋巴細胞，經擴增后輸回患者體內，獲得成功。標志站基因治療時代的開始?；蚬こ膛c基因治療的區(qū)別：宿主表達——直接表達可分泌蛋白——所有基因體外完成——人體細胞exvivo和invivo途徑exvivo:

將含外源基因的載體在體外導入人體自身或異體（異種）細胞，經體外擴增后輸回人體。這種方法易操作，安全性好，但不易形成規(guī)模。invivo:將外源基因裝配于穩(wěn)定的真核細胞表達載體上，直接導入人體內。這種方法非常有利于大規(guī)模工業(yè)化生產，但技術難度大，安全性必須證明。二、基因治療中的病毒載體基本條件：攜帶外源基因并能裝配成病毒顆粒介導外源基因的轉移和表達對機體沒有致病力——大多數(shù)野生型病毒對機體都有致病性，需要對其進行改造后才能用于人體。病毒載體的產生研究病毒基因組的結構和功能將外源基因插入病毒基因組的非必需區(qū)將重組病毒進行改造——復制缺陷型——刪除致癌基因——擴大容量等病毒載體的分類重組型病毒載體：不改變病毒復制和包裝所需的順式作用元件，有選擇性的刪除病毒的某些必需基因，特別是前早期或早期基因以控制其表達，所缺失的必需基因的功能由同時導入細胞中的外源基因表達單位提供。一般通過同源重組的方法將目的基因插入到病毒基因組中。無病毒基因的病毒載體：由重組載體和輔助系統(tǒng)組成。重組載體主要由外源基因表達盒、病毒復制和包裝所必需的順式作用元件及載體骨架所組成。輔助系統(tǒng)包括病毒復制和包裝所必需的反式作用因子。重組載體以特定形式被包裝到不含有任何病毒基因的病毒顆粒中。安全性好、容量大。但會產生輔助病毒污染。病毒載體在基因治療中的應用P379表9-9常用病毒載體的特性和適用范圍基因治療中的問題靶向性基因導入系統(tǒng)外源基因表達的可控性治療基因過少三、基因治療中的非病毒載體裸DNA脂質體載體陽離子多聚物型載體1、裸DNA又稱自由DNA，結構簡單。困難：如何將目的基因導入相應的細胞并得到長期有效的表達方法：主要通過物理或機械方法（如直接注射或基因槍法）將DNA導入適當部位。DNA疫苗缺點：缺乏靶向性2、脂質體/DNA復合物脂質體：具有雙層膜的封閉式粒子，能促進極性大分子穿透細胞膜。類型：陽離子脂質體（最常用？）、陰離子脂質體、PH敏感脂質體及融合脂質體等脂質的化學結構、組成對載體的活性和毒性有很在的影響細胞主要通過內吞途徑攝取脂質體，遇到溶酶體即被降解PH敏感脂質體在酸性條件下脂肪酸羧基質子化，形成六角晶相發(fā)生膜融合。三、多聚物/DNA復合物DNA帶負電，利用陽離子多聚體的氨基基團的正電荷與DNA的磷酸基團結合發(fā)生電性中和，可以使DNA縮合形成穩(wěn)定的多聚復合物，不易被核酸酶降解，并可防止沉淀，從而提高轉染效率?？膳c細胞表面的帶負電的受體結合，能被有效內吞攝入，介導基因轉移合成方便、安全無毒，但組織特異性和靶向性差、體內基因轉移效率低。四、DNA微球體白明膠和聚氨基葡萄糖等生物高聚物屬于陽離子復合物，能與DNA形成大小為200-750nm的微球體復合物。特點：——可降解——分布均一——共包裝——儲存方便——持續(xù)釋放——毒性低第二節(jié)人免疫缺損病毒——HIVHIV病毒粒子的形態(tài)結構HIV基因組及其編碼的蛋白HIV的復制P24CapsidproteinP18Matrixprotein一、HIV病毒粒子的形態(tài)結構二、HIV基因組及其編碼的蛋白編碼病毒的核心蛋白編碼反轉錄酶、整合酶和蛋白酶編碼外膜蛋白TATandREVareessentialforHIVreplication

GAGgene-p55p17:innersurfacep24:nucleocapsidp9:nucleocapsidassociatedwithRNAPolymerase(reversetranscriptase)2.Integrase3.Protease(cutspolyproteins)

POLgeneMembrane:hostderivedTwoglycoproteins:gp160gp120andgp41gp41isfusogenthatspansthemembranegp120gp41ENVGenecoding三、HIV的復制TheLifeCycleofHIV1.Virusdestroysthecellasaresultofbudding第三節(jié)乙型肝炎病毒——HBV

一、HBV基因組結構雙鏈部分環(huán)狀結構：兩鏈長短不一短鏈和長鏈的5′端通過240bp配對維持環(huán)狀結構長鏈(L)完整、恒定，3.2Kb，負鏈短鏈(S)為正鏈，長度可變，約為長鏈長度的50～80%兩條鏈互補區(qū)兩惻各有一個11個堿基的直接重復序列，稱DR1和DR2二、HBV的復制dsDNA,不是通過半保留復制方式復制第九章疾病與人類健康腫瘤與癌癥人免疫缺陷病毒——HIV乙型肝炎病毒——HBV人禽流感的分子生物學機制嚴重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥——SARS的分子機制基因治療Contents第一節(jié)腫瘤與癌癥內容提要：反轉錄病毒致癌基因原癌基因（細胞轉化基因）產物及其分類原癌基因的表達調控基因相互作用與癌基因表達

癌：是一群不受生長調控而繁殖的細胞，也稱惡性腫瘤。良性腫瘤：是一群僅局限在自已的正常位置，且不侵染周圍其他組織和器官的細胞。細胞癌變的分子基礎：基因突變一、癌基因（oncogene)癌基因的分類病毒癌基因：(virusoncogene,v-onc)DNA病毒(乙肝病毒)、RNA病毒（反轉錄病毒）細胞轉化基因：(cellular-oncogene,c-onc)原癌基因的突變產物。(一)反轉錄病毒致癌基因（P339）Rous于1910年首先發(fā)現(xiàn)雞肉瘤病毒（后稱勞斯肉瘤病毒RSV），研究證明它是一種反轉錄病毒，接種給雞后可誘發(fā)肉瘤。1966年，85歲的勞斯獲得諾貝爾獎。1、反轉錄病毒顆粒結構（P339）

調節(jié)和啟動轉錄

LTR

gag

pol

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src

LTR

長末端重復序列癌基因正常的病毒基因產生病毒表面糖蛋白產生逆轉錄酶和整合酶

產生病毒垮膜蛋白2、反轉錄病毒基因組結構產生p60src蛋白質，磷酸化蛋白。靶蛋白磷酸化（P341）3、反轉錄病毒的復制斷裂基因完整的沒有斷裂的可讀框

(二)細胞轉化基因

細胞轉化基因實質上就是由一類原癌基因突變而來。當原癌基因在某些外界因素（如放射線、化學致癌物等）的作用下，發(fā)生數(shù)量和結構上的微細變化，形成了致癌性的細胞轉化基因，從而使正常細胞轉化為腫瘤細胞。

原癌基因是細胞內與細胞增殖相關的正?；?，是維持機體正常生命活動所必須的，在進化上高等保守。

當原癌基因的結構或調控區(qū)發(fā)生變異，基因產物增多或活性增強時，使細胞過度增殖，從而形成腫瘤。

1、原癌基因原癌基因的特點:廣泛存在于生物界中；基因序列高度保守；作用通過其產物蛋白質來體現(xiàn)；正常情況下表達水平很低;被激活后，形成致癌性的細胞轉化基因。原癌基因的分類：根據原癌基因產物在細胞中的位置，可分為：與膜結合的蛋白，如src基因產物；可溶性蛋白，如mos基因產物；核蛋白，如myc基因產物。根據原癌基因表達產物的功能，可分為：蛋白激酶類，如Src家族（酪氨酸蛋白激酶類）生長因子類生長因子受體類GTP結合蛋白類，如Ras家族核蛋白類（DNA結合蛋白），如Myc家族未知功能類原癌基因：單拷貝、正常情況下低水平表達或根本不表達癌基因？？當原癌基因的結構或調控區(qū)發(fā)生變異，基因產物增多或活性增強時，使細胞過度增殖，從而形成腫瘤。堿基缺失或單堿基突變基因擴增染色體重排蛋白質活性大大提高蛋白質未變化，但總量大大提高增強子功能使癌基因高效表達與強啟動子基因相融合，提高癌基因表達效率

原癌基因2、原癌基因的激活機制（P346）（1）點突變（2）LTR（longterminalrepeat)插入強啟動子（3）基因重排（rearrange)（4）缺失（Deletion）oncogene(-)cancer一些原癌基因5’上游存在負調控序列，該序列的缺失或突變，則喪失抑制癌基因表達的能力。Brukitt淋巴瘤中c-myc因負調控序列缺失或LTR插入而增強表達。（5）基因擴增

蛋白質結構未變化，但總量大大提高基因擴增

原癌基因使每個細胞中基因拷貝數(shù)增加，從而直接增加可用的轉錄模板數(shù)以增加基因表達。3、基因互作與癌基因表達（1）染色體構象對原癌基因表達的影響基因表達不僅取決于基因本身及其相鄰區(qū)域的一級結構，也取決于其空間構象，即基因在染色體上的空間排列和染色質的結構。當兩個基因相距太近時，往往不易形成有利于高效轉錄的空間結構。基因領域：基因與基因之間的間隔距離基因領域效應：同一DNA鏈上兩個具有相同轉錄方向的基因間隔小于一定長度時，影響有效轉錄所必需的染色質結構的形成，從而使這兩個基因中的一個或兩個均不能轉錄或轉錄活性顯著降低。0.3kb-5kb，最佳間隔距離與兩個基因的總長度成正相關。（2）原癌基因終產物對基因表達的調控某種原癌基因產物對另一種原癌基因表達的調控作用；某種原癌基因產物對自身表達的反饋調控作用癌基因產物通過介質傳遞生長刺激信號的部位有3處：①癌基因產物本身模擬了生長因子，因而與相應的受體作用，以自分泌的方式刺激細胞生長；②癌基因產物模擬了已結合配體的生長因子受體，從而在無外源生長因子時提供了促進細胞分裂的信號；③癌基因產物作用于細胞內生長控制途徑，解除此途徑對外源刺激信號的需求。（3）抑癌基因產物對原癌基因的調控抑癌基因(tumorsuppressorgene)

/隱性癌基因：是一種抑制細胞生長和腫瘤形成的基因。如：Rb抑癌基因、抑癌基因p53抑癌基因與原癌基因在生物學上有以下幾點差異：①在功能上，抑癌基因起負調控作用，而原癌基因起正調控作用；②在遺傳方式上，原癌基因是顯性的，而抑癌基因在細胞水平上是隱性的，③在突變發(fā)生的細胞類型上，抑癌基因突變可以發(fā)生在體細胞中，也可能發(fā)生在生殖細胞中并通過生殖細胞得到遺傳。原癌基因突變只發(fā)生在體細胞中。（4）外源信號對原癌基因表達的影響

細胞外信號（包括生長因子、激素、神經遞質、藥物等）作用于靶細胞后，通過細胞膜受體系統(tǒng)或其他直接途徑被傳遞至細胞內，再通過多種蛋白激酶的活化，對轉錄因子進行修飾，然后引發(fā)一系列基因的轉錄激活。第六節(jié)基因治療基因治療的主要途徑基因治療中的病毒載體基因治療中的非病毒載體基因治療（Genetherapy

）

基因治療（Genetherapy

）：指應用DNA重組技術，將外源正?；驅氚屑毎?，以糾正或補償因基因缺陷和異常引起的疾病,以達到治療的目的。為達到這一目的，實施相應的策略。基因治療實例1、復合免疫缺陷綜合征的基因治療（人類Gene治療成功例子）ADA缺乏癥-——致死性疾病，患者由于腺苷酸脫氨酶（ADA）缺乏。ADA-Gene+vector（逆轉錄病毒）

重組分子患者TLyCIL-2刺激C分裂導入細胞生長分裂

10天

Gene表達

回輸患兒體內

1~2月治療一次,10個月患兒體內ADA水平達正常人的25%

2、乙型血友病XR，患者凝血因子Ⅸ缺乏，Ⅸ因子基因定位在Xq26.3~q27.2。臨床表現(xiàn)，易出血，凝血時間長，輕傷、小手術后常出血不止。發(fā)病率為1/30000。例如：我國學者薛京倫實施的FⅨ的基因治療。

逆轉錄病毒載體+FⅨcDNA

重組體

5`LTR

FⅨneoSV

PSO

LTR3`導入倉鼠細胞（CHO）→FⅨ表達；導入乙型血友病患者皮膚成纖維細胞（體外培養(yǎng)）→FⅨ表達；91年，導入乙型血友病患者皮膚成纖維細胞（體外培養(yǎng)）→回植病人皮下→FⅨ基因表達，F(xiàn)Ⅸ基表達水平達正常人的5%。是我國基因治療成功的例子。3、黑色素瘤的基因治療腫瘤Gene治療是人們十分關注的問題，進行了廣泛的探索。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤浸潤淋巴細胞——TIL，它積聚腫瘤部位，并在該處持續(xù)存在而無副作用，利用此特點協(xié)助治療腫瘤。例：細胞因子基因治療和腫瘤壞死因子基因治療

①IL-2Gene②TNF-Gene

（白介2）

（腫瘤壞死因子）

逆轉錄病毒載體

導入

TIL（體外培養(yǎng)的自體細胞）回植患者體內

TIL進入自體腫瘤部位，提高細胞因子殺傷腫瘤細胞的作用。4、自殺基因的基因治療

原理：即用（逆轉錄）病毒載體將編碼某種酶的基因（自殺基因）轉染到腫瘤細胞中，此酶可將一種無害的藥物前體轉變?yōu)榧毎緩秃衔铮M而殺傷腫瘤細胞（腫瘤細胞不能復制而死亡）。這種基因載體只能在特定的組織或腫瘤中表達，而正常細胞中不表達。如：自殺基因+病毒載體

轉染重組載體

藥物前體無毒Gene→酶→↓

藥物復合物有毒

細胞死亡例如：

單純皰疹病毒

哺乳動物細胞

HSVGene-TK

（在腫瘤細胞中表達，正常細胞中不表達）Gene—TKGCV（胸苷類似物）

TdRPp

GCV---p

抑制DNA合成脫氧胸苷酸

腫瘤細胞死亡鄰近細胞死亡/凋亡（旁觀者效應）一、基因治療的主要途徑1990年第一次利用反轉錄病毒為載體，把DAA基因導入來處患者的T-淋巴細胞，經擴增后輸回患者體內，獲得成功。標志站基因治療時代的開始。基因工程與基因治療的區(qū)別：宿主表達——直接表達可分泌蛋白——所有基因體外完成——人體細胞exvivo和invivo途徑exvivo:

將含外源基因的載體在體外導入人體自身或異體（異種）細胞，經體外擴增后輸回人體。這種方法易操作，安全性好，但不易形成規(guī)模。invivo:將外源基因裝配于穩(wěn)定的真核細胞表達載體上，直接導入人體內。這種方法非常有利于大規(guī)模工業(yè)化生產，但技術難度大，安全性必須證明。二、基因治療中的病毒載體基本條件：攜帶外源基因并能裝配成病毒顆粒介導外源基因的轉移和表達對機體沒有致病力——大多數(shù)野生型病毒對機體都有致病性，需要對其進行改造后才能用于人體。病毒載體的產生研究病毒基因組的結構和功能將外源基因插入病毒基因組的非必需區(qū)將重組病毒進行改造——復制缺陷型——刪除致癌基因——擴大容量等病毒載體的分類重組型病毒載體：不改變病毒復制和包裝所需的順式作用元件，有選擇性的刪除病毒的某些必需基因，特別是前早期或早期基因以控制其表達，所缺失的必需基因的功能由同時導入細胞中的外源基因表達單位提供。一般通過同源重組的方法將目的基因插入到病毒基因組中。無病毒基因的病毒載體：由重組載體和輔助系統(tǒng)組成。重組載體主要由外源基因表達盒、病毒復制和包裝所必需的順式作用元件及載體骨架所組成。輔助系統(tǒng)包括病毒復制和包裝所必需的反式作用因子。重組載體以特定形式被包裝到不含有任何病毒基因的病毒顆粒中。安全性好、容量大。但會產生輔助病毒污染。病毒載體在基因治療中的應用P379表9-9常用病毒載體的特性和適用范圍基因治