《反季節(jié)秀珍菇菌種制備技術(shù)規(guī)程》

ICS65.020.99

CCSB39

45

廣西壯族自治區(qū)地方標準

DB45/TXXXX—XXXX

反季節(jié)秀珍菇菌種制備技術(shù)規(guī)程

Technicalcodeofpracticeforprocessofoff-seasonPleeurotus

pulmonariusculture

（征求意見稿）

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實施

廣西壯族自治區(qū)市場監(jiān)督管理局??發(fā)布

DB45/TXXXX—XXXX

反季節(jié)秀珍菇菌種制備技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了反季節(jié)秀珍菇菌種繁育的術(shù)語和定義、菌種制備環(huán)境、設施設備要求、技術(shù)要求、技

術(shù)方法、質(zhì)量要求、雜菌及害蟲的檢驗和判定。

本文件適用于廣西境內(nèi)反季節(jié)秀珍菇菌種的制備。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB5749生活飲用水衛(wèi)生標準

GB/T12728食用菌術(shù)語

NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

NY5099無公害食品食用菌栽培基質(zhì)安全技術(shù)要求

3術(shù)語和定義

GB/T12728界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

秀珍菇Pleurotuspulmonarius

在分類學上屬于真菌門、擔子菌綱、傘菌目、側(cè)耳科、側(cè)耳屬；中文名：肺形側(cè)耳種，商品名或俗

稱鳳尾菇、秀珍菇。子實體單生或散生，菌蓋灰白至灰褐（黑）色。

3.2

反季節(jié)秀珍菇off-seasonPleurotuspulmonarius

自然條件下冬季出菇的秀珍菇品種，通過人工調(diào)節(jié)栽培條件，并能在夏季正常生產(chǎn)或栽培的秀珍菇

品種。

4菌種制備環(huán)境

應符合NY/T528的規(guī)定，水質(zhì)應符合GB5749規(guī)定。

5設施設備要求

5.1基本設施

應具備控溫、控濕、控通風、潔凈、無菌條件的冷卻室、接種室、培養(yǎng)室和貯存室。

1

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5.2基本設備

應具備磅秤、電子天平、高壓滅菌鍋、超凈工作臺或接種箱、空調(diào)、除濕機、培養(yǎng)架、恒溫培養(yǎng)箱、

冰箱、顯微鏡、放大鏡、紫外燈、臭氧發(fā)生器等。生產(chǎn)量大的菌種廠配備攪拌機、裝瓶或裝袋機。

6菌種制作技術(shù)要求

菌種制作應滿足以下技術(shù)要求：

a)接種所需工具及環(huán)境要提前滅菌或消毒；

b)采用適宜的培養(yǎng)基；

c)接種操作全程要求無菌操作；

d)繁殖的每批菌種必須做好生產(chǎn)記錄，詳細記錄生產(chǎn)的各個環(huán)節(jié)；

e)菌絲培養(yǎng)期間溫度要穩(wěn)定，溫差應≤6℃；

f)每批菌種必須貼有標簽。

7菌種制作技術(shù)方法

7.1種源組織分離方法

7.1.1種菇采集要求

采集時間為5～6月，選擇出菇快、均勻整齊、產(chǎn)量高的菇棚，采集第1潮或第2潮菇。

7.1.2種菇要求

菇形完整、無病斑、無蟲口、品種特征明顯、顏色灰褐色（灰色），菌肉肥厚，五六分成熟，結(jié)實

并有彈性，不含雜質(zhì)。

7.1.3分離培養(yǎng)基

用加富培養(yǎng)基（參見附錄A）平板進行分離。母種培養(yǎng)基pH為6.5～7.5，于0.11MPa（121℃）

下滅菌30min。

7.1.4切塊接種

用75％酒精對種菇進行表面消毒后，將種菇沿菌柄中心縱向掰成兩半，用無菌解剖刀在菌蓋與菌柄

交界處中心部位切取約4mm×4mm大小菌肉組織接到平板上，于25℃～29℃恒溫培養(yǎng)。

7.1.5菌種純化

組織塊培養(yǎng)2?d～3d，長出白色絲毛狀菌絲體，檢查淘汰有細菌的菌落。4d～5?d后，淘汰有雜菌、

長勢纖弱的菌落。選取菌絲潔白、生長均勻、整齊、健壯的菌落，用接種鏟取菌絲前端，移接到PSA綜

合培養(yǎng)基斜面，27℃培養(yǎng)7d～8d，選取菌絲潔白、長勢好，均勻整齊、健壯斜面試管做為母種種源保

存。

7.1.6出菇試驗觀測

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分離所得種源進行培養(yǎng)和出菇試驗（≥2次），通過菌絲培養(yǎng)和出菇測試，各項性狀優(yōu)良穩(wěn)定、活

力優(yōu)于或等于原始菌株的種源可進入生產(chǎn)使用。

7.2母種復壯與擴繁技術(shù)

7.2.1菌種復壯

從冰箱取出保存的母種于25℃放置0.5?d～1?d后，用接種鏟取4?mm×4?mm大小菌絲塊接到PSA加富培

養(yǎng)基或淀粉加富培養(yǎng)基（參見附錄A）平板上，25℃～29℃培養(yǎng)5d～6d，觀察接種點菌絲情況，挑出

無雜菌、菌絲潔白、長速正常、整齊、健壯的菌落作為母種擴繁的種源。

7.2.2母種擴繁

用接種鏟切取7.2.1中健康菌落前端菌絲塊移接到PSA綜合培養(yǎng)基試管斜面，27℃培養(yǎng)6?d～8?d，菌

絲長滿斜面，即可用于生產(chǎn)。菌種擴繁移植傳代次數(shù)不宜超過3次。

7.2.3母種檢查

母種擴繁培養(yǎng)期間，正面和反面逐個全面要檢查2次，剔除污染、長勢差、色澤異常的菌株。

7.3原種、栽培種生產(chǎn)技術(shù)

7.3.1生產(chǎn)時間

原種生產(chǎn)時間應安排為10月下旬～11月，栽培種生產(chǎn)時間應安排為11月～12月。

7.3.2培養(yǎng)料容器要求

培養(yǎng)料容器應滿足以下要求：

a)盛裝容器應耐高壓（0.15MPa）、耐高溫（126℃～130℃）；

b)瓶子體積應＜750mL，塑料袋為聚丙烯塑料袋，規(guī)格(13cm～15cm)×(26cm～28cm)×0.06cm；

c)原種用玻璃瓶盛裝、栽培種用聚丙烯朔料袋盛裝；

d)塑料頸圈、棉塞或無棉塑料蓋，能滿足濾菌和透氣要求；

e)棉塞應符合NY/T528規(guī)定。

7.3.3培養(yǎng)基制作

培養(yǎng)基配方（參見附錄A）。木屑、棉籽殼、桑枝屑應于前一天預濕，麥麩、輕質(zhì)碳酸鈣、石灰

等裝袋前加入拌均勻。原料含水量為58％～62％，pH值為7～8。

7.3.4殺菌

培養(yǎng)基配制好后，在4h內(nèi)進行裝袋并高壓滅菌，滅菌保持壓力0.14MPa～0.15MPa（溫度為126℃～

128℃），2h～2.5h。

7.3.5冷卻和接種

待瓶（袋）料溫冷卻至30℃以下即可接種。用無菌接種勺（鑷子）先去掉母種前端或原種表面老

菌種，再進行接種。接種量為1支母種接5～6瓶原種，750mL原種接45～55袋栽培種。菌種塊要緊

貼培養(yǎng)料。

7.3.6培養(yǎng)

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接種后，原種、栽培種放置無菌培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)室應光線黑暗，溫度穩(wěn)定在25℃～27℃，空氣

相對濕度70％以下。

7.3.7檢查

菌種培養(yǎng)期間至少要進行3次逐瓶（袋）檢查，即接種后3d～4d未封面前、菌絲長至瓶（袋）

1/3～1/2處、菌絲長2/3至滿袋前各檢查1次，清除菌絲生長異?；蛭廴揪N。

7.3.8菌種使用與存放

菌種按照第8章進行檢驗。合格的菌種可投入生產(chǎn)或出售。菌種長滿后10?d內(nèi)使用最好。未使用的，

要放在4℃～6℃的低溫條件避光保存，菌種保存期限1個月。

8質(zhì)量要求

8.1感官要求

8.1.1容器要求

瓶（袋）應完整，無損，棉塞、塑料蓋應干燥、潔凈、松緊適度，應符合透氣和濾菌要求，無霉點

霉斑。

8.1.2容積要求

母種培養(yǎng)基灌入量為試管總?cè)莘e的1/5～1/4，頂端距棉塞40?mm～50?mm。原種、栽培種培養(yǎng)基上表

面距瓶(袋)口的距離45?mm～55mm。

8.1.3菌種菌絲體外觀

母種菌絲應長滿斜面，原種、栽培種菌絲應長滿瓶或袋，菌絲體潔白、色澤一致、均勻健壯、舒展、

濃密、菌落邊緣整齊，無角變，無抑制拮抗線，無雜菌菌落，無菌絲分泌物，原種、栽培種培養(yǎng)物表面

分泌物允許有少量無色或透明淺黃色水珠，不能有黃色或黃褐色水珠。

8.1.4培養(yǎng)基外觀

培養(yǎng)基不干縮，無積水、顏色均勻、無暗斑、無色素，原種、栽培種，允許有少量原基，原基總量

不超過5％。

8.1.5氣味

有秀珍菇菌種特有的清香味，無酸、臭、霉等異味。

8.2菌絲生長速度

25℃～29℃下培養(yǎng)，母種需要6d～8d長滿斜面，原種、栽培種需要25d～32d長滿瓶或袋。

9雜菌及害蟲的檢驗及判定

9.1雜菌檢驗及判定

9.1.1感官檢測

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若出現(xiàn)以下三種情況之一，則判定為有雜菌污染：

a)各級菌種培養(yǎng)物表面有光滑、濕潤的粘稠物；

b)在棉花塞、膠塞、瓶頸接口處或培養(yǎng)基面上有與正常菌絲顏色不同的雜菌斑點；

c)打開菌種瓶、袋或試管塞，鼻嗅有酸、腥臭等異味。

9.1.2鏡檢

在培養(yǎng)物異樣部位取少量菌絲體制片，于顯微鏡下觀察，若有不同粗細菌絲或孢子存在的，判定為

雜菌污染。

9.1.3培養(yǎng)檢測

9.1.3.1細菌培養(yǎng)檢測：取菌種上、中、下三個部位黃豆粒大小的菌塊，接入15mL～20mL三角瓶肉

湯培養(yǎng)基中，在28℃～30℃條件下振蕩培養(yǎng)1d～2d，觀察培養(yǎng)液是否混濁，若培養(yǎng)液混濁則判定有

細菌污染。

9.1.3.2霉菌培養(yǎng)檢測：取菌種上、中、下三個部位黃豆粒大小的菌塊接到PDA平板上，在28℃～

30℃條件下培養(yǎng)3d～5d，觀察菌絲顏色、菌絲長勢、菌落特征、有無雜菌孢子產(chǎn)生等。

9.2害蟲檢驗及判定

從待檢菌種的不同部位取出少量培養(yǎng)物，放于白色搪瓷盤上，均勻鋪開，用放大鏡或解剖鏡觀察害

蟲的卵、幼蟲、蛹或成蟲，判定有無害蟲。

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A

A

附錄A

（規(guī)范性）

常用培養(yǎng)基及配方

A.1基質(zhì)要求

應符合NY5099的規(guī)定。

A.2母種培養(yǎng)基

A.2.1PSA綜合培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200g，蔗糖20g，瓊脂20g，磷酸二氫鉀1.0g，硫酸鎂0.5g，蒸

餾水1000mL，pH=6.5～7.5。