DB41∕T 1516-2017 犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒二重∕TaqMan MGB實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法

DB41DB41/T1516—2017犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒二重TaqManMGB實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法2017-12-06發(fā)布2018-03-06實(shí)施河南省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I疫病預(yù)防控制中心，鶴壁市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)中心，信陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,平頂山市動(dòng)物疫1犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒二重TaqManMGB實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了犬瘟熱病毒（CDV）、犬細(xì)小病毒（CPV）二重TaqManMGB實(shí)時(shí)熒光PCR（FQ），），），），）（），2.1.4消化液Ⅰ,TE緩沖液（見(jiàn)附錄A以上試劑常溫保存；消化液Ⅱ（見(jiàn)附錄A陽(yáng)性對(duì)照、），），實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，高速冷凍離心機(jī)（12000×g以上生物安全柜，恒溫水浴鍋，2℃~8℃2采集的樣品密封后，采用保溫壺或保溫桶加冰密封，盡快運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室。樣品在2℃~8℃條件下）；）；4.1.44℃條件下12000r/min3上清液，將無(wú)菌離心管倒置于吸水紙上，吸干液體，不同無(wú)菌離心管應(yīng)在吸4.3.1反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)混合液組成：M-MLV5×Reactionbuffer(含Mg2+)，4μL；），），4在質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)成立的前提下，樣品Ct值≤29.0，且出現(xiàn)兩條特定的擴(kuò)增曲線，判定為CDV、CPV5試劑的配制在0.01mol/LPBS液中添加青霉素(2000IU/mL)，鏈霉素(2mA.60.01mol/L（pH7.2）的磷酸鹽緩沖液（PB）：A.6.2B液（0.2mol/L磷酸氫二鈉水溶液）：Na2HPO4?12H2O71.6g，用適量蒸餾A.6.30.01mol/LPBS的配制：A液14mL，B液36mL，加NaCl8.5g，用蒸餾水定容至1000mL；1267犬溫?zé)岵《?、犬?xì)小病毒二重TaqManMGB實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)5'-CCGACTCCAGACAAT5'-ATGCCATTTACTCCA5'-FAM-CTCTGAGCAACA5'-VIC-AGATCTGAGACATTG8(資料性附錄)犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒TaqManMGB二重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增曲線犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒TaqManMGB二重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增曲線見(jiàn)圖C.1。102注：1.CDV擴(kuò)增曲線；2