中藥飲片及檢驗知識培訓

中藥飲片鑒別及檢查有關

知識培訓藥檢所夏春麗《中華人民共和國藥物管理法》第二章第十條第二款規(guī)定“中藥飲片必須按照國家藥物原則炮制；國家藥物原則沒有規(guī)定的，必須按照省、自治區(qū)、直轄市人民政府藥物監(jiān)督管理部門制定的炮制規(guī)范炮制。省、自治區(qū)、直轄市人民政府藥物監(jiān)督管理部門制定的炮制規(guī)范應當報國務院藥物監(jiān)督管理部門立案?！敝兴庯嬈侵嗅t(yī)臨床方劑的基本構成部分，也是中成藥的基本原料，其質量的優(yōu)劣將直接影響到中醫(yī)藥臨床療效的體現(xiàn)，直接關系到人們用藥的安全、有效。不過，伴隨中藥飲片的市場需求量不停增長，及部分外來中藥飲片的沖擊，致使出現(xiàn)了大量的不按規(guī)定炮制措施炮制的中藥飲片流入市場，從而導致了中藥飲片的整體質量有所下降。為深入提高從藥人員業(yè)務能力，深入加大對藥物生產、經(jīng)營、使用的中藥飲片質量監(jiān)督力度，提高真?zhèn)舞b別能力，有效打擊制售假劣中藥飲片違法違規(guī)行為，保證轄區(qū)群眾用藥安全，區(qū)藥監(jiān)局組織人員在藥物生產企業(yè)舉行涉藥人員中藥飲片鑒別及檢查有關知識培訓。

近年來，中藥材抽驗不合格率居高不下，在這當中有大部分是某些不法分子故意造假（重金屬超標的蟲草、模具壓制的人參、土豆染色做成的天麻等），售假。有的則是中藥材保管發(fā)生變質。中藥材的鑒別不具有一定中藥鑒別常識是很難鑒別真?zhèn)蔚?。安排這次培訓的目的，為了以便從藥人員可以對中藥材進行簡樸的迅速鑒別，根據(jù)中藥的某些成分的特性，迅速鑒別某些中藥。一、藥用植物學知識1、藥用植物的分類現(xiàn)以黃連為例示其分類等級如下：界………………植物界門………………被子植物門綱………………雙子葉植物綱目………………毛茛目科………………毛茛科屬………………黃連屬種………………黃連2、植物組織的類型２.１分生組織：頂端分生組織、側生分生組織、居間分生組織位于植物體生長的部位，由于分生組織細胞不停分裂、分化，使植物體得以生長２.２薄壁組織：基本薄壁組織、同化薄壁組織、貯薄壁組織藏、吸取薄壁組織、通氣薄壁組織在植物體內肩負著同化、貯藏、吸取、通氣等營養(yǎng)功能，又稱營養(yǎng)組織２.３保護組織：表皮(毛茸（腺毛非腺毛）、氣孔（平軸式直軸式不等式不定式環(huán)式）)周皮（由木栓層、木栓形成層和栓內層三種不一樣的組織的復合體）保護著植物的內部組織，控制和進行氣體互換，防止水分的過度散失，病蟲的侵害以及機械損傷等。２.４機械組織：厚角組織厚壁組織：纖維、石細胞２.５輸導組織：管胞與導管；篩管、伴胞與篩胞２.６分泌組織：外部分泌組織腺毛蜜腺內部分泌組織:分泌細胞分泌腔（分泌囊）分泌道和乳汁管3、植物細胞的后含物３.１淀粉粒三種類型單粒淀粉復粒淀粉及半復粒淀粉３.２菊糖：多含在菊科和桔?？浦参锏募毎?，山茱萸果皮中亦有。能溶于水，不溶于乙醇?？蓪⒕仗遣牧辖胍掖贾兄破?，置鏡下觀測看見球狀、半球狀或扇形的菊糖結晶。３.３蛋白質以糊粉粒狀態(tài)存于細胞的任何部分，糊粉粒和淀粉粒常在同一細胞中互相混雜。３.４脂肪和脂肪油：它是由脂肪酸和甘油結合而成的脂。在常溫下呈固態(tài)或半固態(tài)稱為脂。如柯柯豆脂；呈液體的稱為油，如大豆油、芝麻油、花生油等。存在于植物種子里，可達種子干重的45%-60%；脂肪和脂肪油加蘇丹Ⅲ試劑顯橘紅色、紅色或紫紅色；加紫草試液顯紫紅色；加四氧化鋨顯黑色。４、晶體：草酸鈣結晶和碳酸鈣結晶４.１草酸鈣結晶：４.１.１單晶又稱方晶或塊晶豆科植物（甘草、苦參、葛根．紅芪、合歡花等）、蕓香科（黃柏）中常見４.１.２針晶一般存在于含粘液的細胞中如薯蕷科、天南星科半夏白附子蘭科白及石斛天麻百合科知母麥冬玉竹４.１.３簇晶蓼科（大黃、何首烏、拳參）——棱角短鈍；五加科（人參、竹節(jié)參、三七）——棱角堅；毛茛科（白芍、赤芍、牡丹皮）、桑科桑葉——簇晶排行４.１.４砂晶茄科（顛茄、地骨皮）莧科（牛膝）４.１.５柱晶鳶尾科（射干）４.２碳酸鈣結晶多存在于植物葉的表層細胞中５、維管束及其類型維管束是一種束狀構造，貫穿在植物體的多種器官內，彼此相連形成一種輸導系統(tǒng)，同步對植物器官起著支持作用。５.１外韌維管束：韌皮部位于外側，木質部位于內側，中間沒有形成層。如單子葉植物莖的維管束５.２雙韌維管束：木質部內外兩側均有韌皮部。常見于茄科、葫蘆科，夾竹桃科、蘿摩科，旋花科桃金娘科等莖中維管束５.３周韌維管束：木質部位于中間，韌皮部圍繞在木質部四面。如百合科、禾本科棕櫚科、蓼科及蕨類的某些植物５.４周木維管束：韌皮部位于中間，木質部圍繞在韌皮部四面，常見于少數(shù)單子葉植物的根狀莖，如菖蒲，鈴蘭等。５.５輻射維管束：韌皮部和木質部互相間隔成輻射狀排列，并形成一圈，總稱為輻射維管束。是單子葉植物的根和雙子葉植物的次生構造特點。二、中藥鑒定學知識1、中藥的加工及貯藏１.１常用的加工措施：揀洗切片蒸煮燙發(fā)汗熏硫（山藥、白芷、干燥前用硫磺熏制，防止霉爛）干燥１.２貯藏保管中發(fā)生的變質現(xiàn)象１.２.１蟲蛀：果實種子類，花、葉類及含糖類易蟲蛀。一般含脂肪油（苦杏仁桃仁等)淀粉（白芷山藥）或蛋白質（蘄蛇等）易蟲蛀，而含辛辣成分的藥材，一般不易蟲蛀如蓽茇、胡椒、花椒等。一般溫度在16-35℃、濕度在60%以上、藥材含水量在11%如下是蟲害生長的有力條件。１.２.２生霉：大氣中從有多量霉菌孢子，如散落在藥材表面。在合適溫度和濕度下，溶蝕藥材內部組織，促使腐敗、變質、失去藥性。１.２.３變色多種藥材均有其固有的顏色，貯藏不妥顏色變化，藥材也也許變質。含鞣質類藥材受到氧化，聚合等作用，產生大分子的有色化合物，使本來色澤加深。１.２.４走油：藥材受潮、變色、變質后，表面展現(xiàn)油樣物質的變化；一般含脂肪油、揮發(fā)油或糖類成分的藥材，如苦杏仁、桃仁、當歸、肉桂、麥冬、枸杞子等會產生“走油”現(xiàn)象。１.２.５其他。有些藥材在貯藏過程中所具有效成分會自然分解或起化學變化而減少療效，如綿馬貫眾，不能久貯。樟腦冰片易揮發(fā)；芒硝(Na2SO4·10H2O)膽礬(CuSO4·5H2O)輕易風化，應密閉保留。1.3貯藏及保管：常溫0℃－30℃陰涼庫不超過20℃冷庫2℃－10℃（相對濕度45％－75％）１.３.１保管制度及保管經(jīng)驗應有嚴格的平常保管制度，保持常常性檢查，保證庫房干燥、清潔、通風。注意外界溫濕度變化，及時采用有效措施，調整室內溫濕度。藥材入庫前應詳細檢查有無蟲蛀，生霉現(xiàn)象，要經(jīng)多名經(jīng)驗豐富的專業(yè)人員過四關：一看性狀，二聞氣味，三品嘗，四查藥材產地、藥用部位與否符合（也稱“放心”程序）。凡有問題的包件都應進行合適的處理，只有合格的包件才能入庫貯藏。貯藏的措施可根據(jù)藥材的特性分類保管。輕易吸濕霉變的中藥尤其注意通風干燥，必要時可翻曬或烘烤；含淀粉、蛋白質、糖類等營養(yǎng)成分易蟲蛀的中藥應貯藏于容器中，放置通風干燥處，并常常檢查。保管經(jīng)驗：牡丹皮與澤瀉共存，牡丹皮不易變色，澤瀉不易蟲蛀；花椒、細辛與有腥味的動物藥共存，可防止動物藥蟲蛀。１.３.２貯藏保管措施：（a）充足干燥，防止蟲卵繁殖。中藥材切制成片、段、節(jié)、絲后，變化了原藥的形狀，增大了表面積，極易受潮。飲片含水量在１１％以上，溫度在１６℃－３５℃之間，藥物中未除盡的蟲卵會在此條件下化為幼蟲。故中藥飲片必須充足干燥，以殺滅蟲卵，此為儲存的基本規(guī)定。荊芥、薄荷、川芎、木香、羌活等芳香性藥物不適宜暴曬高溫干燥，宜于３０℃－３５℃低溫干燥后入庫。花類含芳香油及花蜜成分，極易被蟲蛀，應在梅雨季節(jié)之前分包壓緊，烤至八成干，趁花熱軟時貯于石灰缸內，忌曬，以免散瓣退色。（b）控制溫、濕度，防止發(fā)霉變質?？諝庵写嬖谥罅棵咕咦樱羯⒙湓谒幬锉砻?，遇合適溫濕度就會萌發(fā)成菌絲，產生蛋白酶，侵入藥材組織內部導致藥材霉爛變質。當藥物內部水分蒸至表面，溫度在20℃-35℃時，霉菌開始繁殖。故飲片的貯藏應低溫、通風、干燥、控制含水量在8%-10%，庫房相對濕度在65%如下，溫度在25℃如下為宜。（c）選擇密閉容器，防止氧化變色。中藥材的天然色澤是質量好壞的標志之一，色澤的變異，闡明藥物內在質量已發(fā)生了變化。如具有苷類、羥基蒽醌類及鞣質等成分的藥物，由于貯藏過久或常常翻曬，其中所具有的酶在合適溫度下，會發(fā)生氧化還原反應，使藥材的色澤發(fā)生變化。具有蛋白質的藥物，氨基酸與還原糖作用后也能引起中藥變色。輕易變色的藥材如花類、全草、葉類等應貯于避光密閉容器中。如蘇合香、藏紅花等必須保持濕潤狀，否則易變色。加酒、醋炮制的飲片，如大黃、黃芩、延胡素等，宜置密閉容器內，以防酒、醋味揮散而失效。鹽制品易受潮或高溫后析出鹽分，故宜放陰涼干燥處，切忌用金屬容器寄存。（d）防止高溫，克服走油現(xiàn)象。某些中藥飲片由于受潮或在高溫下表面溢出油狀物，俗稱走油。如含脂肪的杏仁、桃仁、郁杏仁、柏子仁等，含揮發(fā)油的當歸、肉桂等，具有黏液性糖質的麥冬、天冬、太子參、枸杞子等也輕易走油。干燥時不適宜用高溫烘烤或暴曬，宜貯于陰涼干燥處。又如種子、果實類含淀粉、脂肪油較多的薏苡仁、麥芽、萊菔子、蘇子等，炮制后可待蒸氣散盡趁熱裝入容器內貯存；含油較多的藥物宜涼透干燥后，置容器內蓋緊，放于陰涼干燥處。2.中藥飲片性狀鑒定法２.１形狀指干燥藥材的形態(tài)。重要有片、絲、塊、段、粒等性狀，如觀測皺縮的全草、葉或花類，可先浸濕使軟化，展平。２.２大小指藥材的長短、粗細和厚度，測量多用毫米刻度尺。如澤瀉片比黃芪片大，當歸頭片比當歸片大；甘草的斜片比直片大。對細小的種子，可放在毫米方格線的紙上，每１０粒為一組測量平均值。２.３色澤應在日光燈下或常光下觀測。如用復色，后來一種色調為主。藥材的色澤不僅協(xié)助鑒別真?zhèn)危渖珴缮顪\，有時也反應其質量優(yōu)略，如丹參色紅；黃柏色黃；玄參色黑。紫草深紫色者，紫草素含量較高。桔梗皮部白色，木部黃色，習稱“金井玉欄”等。２.４表面特性：樣品不作處理，直接觀測或借助于放大鏡觀測。觀測表面特性時，尤其是附屬物，要注意其顏色、性狀、紋理、分布等特點。如片面上何首烏的“云錦花紋”、銀柴胡的“珍珠盤”、粉防己的“車輪紋”、黃芪的“菊花心”；段上的縱紋、縱溝；絲、塊上的毛、刺等多種附生物的形態(tài)、分布等。必要時可對光透視。２.５質地指藥材的軟硬、堅韌、疏松、致密、黏性或粉性等。軟硬堅韌多憑手感而定，疏松致密黏性粉性等全憑眼睛仔細觀測。如山藥片粉性足，郁金片堅硬，通草質松軟，蜜炙飲片黏性大等。２.６斷面包括折斷時橫斷面的紋理特性。如杜仲折斷有橡膠絲（鹽炙后橡膠絲不明顯）；甘草易折斷，斷面纖維性等。２.７氣味；一般可直接嗅聞或口嘗。氣味較弱者可采用折斷或揉搓的措施，也有的需要熱水濕潤后才能聞到。２.８水試將藥材浸泡一定量水中，觀測形態(tài)變化。菟絲子的吐絲現(xiàn)象２.８.１觀測在水中的沉浮如：丁香沉于水中為佳；進口沉香能沉于水或半浮半沉于水中，國產沉香大多不能沉于水中。２.８.２觀測顏色變化如：西紅花浸入水中，可見橙黃色成直線下降并逐漸擴散，水被染成橙黃色，柱頭呈喇叭狀；熊膽粉末投入清水，即在水面旋轉，并展現(xiàn)黃線下沉而不擴散；梔子水浸液為鮮黃色；玄參水浸液為淡黑色；秦皮水浸液日光下顯碧藍色熒光。２.８.３觀測有無粘性如：海藻水浸后藻體表面粘滑；葶藶子、車前子加水浸泡種子表面粘滑，水煮后溶液有粘性。２.８.４觀測膨脹狀況如：胖大海水浸泡迅速膨大成海綿狀，達原體積4倍，假胖大海水浸泡膨脹較慢，僅能達原體積的2倍；蛤蟆油水浸可膨脹至１０~１５倍。２.８.５觀測其他特殊變化如：菟絲子水浸加溫后便逐漸出現(xiàn)吐絲現(xiàn)象（種皮開裂可露出黃白色卷旋狀的胚，形如吐絲。）；水牛角熱水浸泡有腥臭氣；蟾酥遇水即泛出白色乳狀液等。２.９火試將藥材加熱或燃燒觀測產生的現(xiàn)象。如火上燃燒海金沙，有爆鳴聲且有閃光，而血竭于濾紙上烘烤，熔融呈血紅色。２.９.１嗅氣飲片燃燒過程中會產生多種不一樣的氣味，如：砒石粉末燃燒時有蒜臭氣；血竭燃燒時嗆鼻，有苯甲酸樣香氣。２.９.２聽聲飲片燃燒會發(fā)出不一樣的聲音，如：麝香用火燒時有輕微的爆鳴聲；海金沙燃燒時會出現(xiàn)爆鳴聲及閃光現(xiàn)象。２.９.３觀煙霧飲片燃燒過程中或燃燒后會產生不一樣顏色的煙霧，如：青黛用火燒時有紫紅色煙霧出現(xiàn)；松香燃燒時發(fā)出粽黑色濃煙；馬勃燃燒熄滅產生大量白色濃煙。２.９.４看顏色飲片在火焰上燃燒或燃燒后會顯示不一樣的顏色，如：麝香灰化后殘渣呈白色或灰白色；芒硝在火焰上燃燒火焰呈黃色；自然銅燃燒時產生藍色火焰。２.９.５注意其他變化如：沉香燃之有油滲出；雄黃燃之易熔融成紅紫色液體等。3其他鑒別措施３.１顯微鑒別指用顯微鏡來觀測飲片的組織構造和粉末中的組織形態(tài)及內含物特性等等，從微觀角度鑒別飲片的真?zhèn)蝺?yōu)劣。３.２理化鑒別指用物理、化學或儀器分析措施，對飲片中所含成分進行定性。重要是通過顯色、沉淀、升華物等飲片成分的特殊反應，從內在質量方面鑒別飲片的真?zhèn)蝺?yōu)劣。３.３含量測定指對飲片中有效成分或重要成分的含量測定，這是鑒別飲片和評價飲片質量的最可靠、最精確的措施。對藥效成分明確的飲片，規(guī)定其含量指標，并進行檢測非常必要。三、中藥飲片商品知識：中藥材品種據(jù)全國中藥資源普查記載已達12807種，其中植物藥11146種，動物藥1581種，礦物藥80種；藥典收載538種，其中植物470個；藥動物藥48個；礦物藥20種；陜西省中藥飲片第一冊收載180個藥材品種，323個飲片品種。1、中藥飲片的概念所謂中藥飲片，是指在中醫(yī)藥理論的指導下，可直接用于調配或制劑的中藥材及中藥材的加工炮制品。這個概念表明，中藥材、中藥飲片并沒有絕對的界線，中藥飲片包括了部分經(jīng)產地加工的中藥切片（包括切段、塊、瓣)，原形藥材飲片以及通過切制（在產地加工的基礎上)、炮炙的飲片。對于前兩類，管理上應視為中藥材，只是根據(jù)中醫(yī)藥理論在配方、制劑時作飲片理解。而管理意義上的飲片概念應理解為:“根據(jù)調配或制劑的需要，對經(jīng)產地加工的凈藥材深入切制、炮炙而成的成品稱為中藥飲片”。目前，中藥飲片的概念大體有三種觀點：（１）根據(jù)“飲片”一詞的出處，即清代吳儀洛在《本草從新》中“藥肆中俱切為飲片”的說法，諸多人認為“凡動過刀的即為飲片”；（２）某些中藥材專業(yè)市場和城鎮(zhèn)集貿市場藥材經(jīng)營戶認為只有通過復雜加工炮炙工序的成品才是飲片，僅經(jīng)凈制、切制措施加工而成的應稱為“切片”，而不應按“飲片”管理；三、根據(jù)《藥典》定義，“飲片是指通過加工炮制的中藥材，可直接用于調配或制劑”。中藥飲片是中藥材通過按中醫(yī)藥理論、中藥炮制措施，通過加工炮制后的，可直接用于中醫(yī)臨床的中藥。2、講究使用道地藥材：道地藥材是藥材中精髓，它是指那些歷史悠久，品種良好生產及加工技術成熟，質量優(yōu)良的著名藥材。產于河南懷慶府的“四大懷藥”懷地黃懷牛膝懷山藥懷菊花產于浙江的“浙江八味”浙貝母浙玄參杭菊花杭白芍杭麥冬山茱萸延胡索白術產于東北的“三寶”人參遼細辛北五味子產于云南的“云藥”云木香云茯苓產于貴州的“貴藥”貴天麻朱砂產于四川的“川藥”川烏川厚樸川黃柏產于廣東廣西及海南的“廣藥”廣豆根陽春砂產于陜西甘肅青海新疆及內蒙西部的“西藥”西大黃岷當歸藏蟲草產于湖北湖南江蘇安徽江西福建臺灣的“南藥”江枳殼宣木瓜建澤瀉產于河北山東山西內蒙的道地藥材“北藥”潞黨參北柴胡多倫赤勺3、合適選用細貴藥材：重要是指藥材資源少，療效明顯，價格昂貴的中藥材。如人參鹿茸麝香牛黃蟲草西紅花海龍海馬蛤蚧羚羊角三七天麻4、按規(guī)定使用毒性藥材1砒石（紅砒、白砒）2砒霜3水銀4生馬前子5生川烏6生草烏7生白附子8生附子9生半夏10生南星11生巴豆12斑蝥13青娘蟲14紅娘蟲15生甘遂16生狼毒17生藤黃18生千金子19生天仙子20鬧陽花21雪上一枝蒿22紅升丹23白降丹24蟾酥25洋金花26紅粉27輕粉28雄黃麻醉中藥有罌粟殼；使用時必須按照國家有關法規(guī)規(guī)定進行特殊管理。5、理解進口藥材品種的主產地區(qū)西洋參、鹿茸、“乳香、沒藥及血竭”是我國重要的進口藥材。經(jīng)云南瑞麗口岸進入我國的緬產藥材重要有：補骨脂、檳榔、大腹皮、酸棗仁、殼綠砂、綠凈砂、蔓荊子、黃草、郁金、木蝴蝶、姜黃、干姜、白扁豆、兒茶等30余種，我國需求量較大的品種有十幾種。

薄層鑒別有關知識一、概述薄層色譜法，系將合適的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點樣、展開后，與合適的對照物按同法所得的色譜圖作對比，用以進行藥物的鑒別、雜質檢查或含量測定的措施。1.儀器與材料(1)玻板除另有規(guī)定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的規(guī)格,規(guī)定光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。(2)固定相或載體最常用的有硅膠G、硅膠GF[254]、硅膠H、硅膠HF[254],另一方面有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F[254]等。其顆粒大小,一般規(guī)定直徑為10～40μm。薄層涂布,一般可分無粘合劑和含粘合劑兩種;前者系將固定相直接涂布于玻璃板上,后者系在固定相中加入一定量的粘合劑，一般常用10～15％煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小時)，混勻后加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉水溶液(0.5～0.7％)適量調成糊狀，均勻涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或緩沖液的薄層。(3)涂布器應能使固定相或載體在玻璃板上涂成一層符合厚度規(guī)定的均勻薄層。(4)點樣器。(5)展開室應使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸，并有嚴密的蓋子，除另有規(guī)定外，底部應平整光滑，應便于觀測。2.操作措施(1)薄層板制備除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,清除表面的氣泡后，倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進行涂布（厚度為0.2～0.3mm），取下涂好薄層的玻板，置水平臺上于室溫下晾干，后在110℃烘30分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（可通過透射光和反射光檢視）。(2)點樣除另有規(guī)定外，用點樣器點樣于薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊2.0cm，樣點直徑應不不小于或等于3mm,點間距離可視斑點擴散狀況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。(3)展開展開室如需預先用展開劑飽和，可在室中加入足夠量的展開劑，并在壁上貼二條與室同樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封室頂?shù)纳w，使系統(tǒng)平衡。將點好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5～1.0cm（切勿將樣點浸入展開劑中）,密封室蓋,待展開至規(guī)定距離(一般為10～15cm),取出薄層板，晾干，按各品種項下的規(guī)定檢測。(4)如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出，或直接在薄層上對色譜斑點作掃描定量，則可用薄層掃描法。薄層掃描的措施，除另有規(guī)定外，可根據(jù)多種薄層掃描儀的構造特點及使用闡明，結合詳細狀況，選擇吸取法或熒光法，用雙波長或單波長掃描。由于影響薄層掃描成果的原因諸多，故應在保證供試品的斑點在一定濃度范圍內呈線性的狀況下，將供試品與對照品在同一塊薄層上展開后掃描，進行比較并計算定量，以減少誤差。多種供試品，只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜，才能獲得滿意的成果。二、薄層鑒別的操作規(guī)程1.措施原理薄層色譜是一種微量分析的分離過程，它將樣品點在以玻璃板或鋁、塑料等片材為載體的多孔吸附劑薄層的固定相上,運用流動相在特定的展開室中將混合物中的組份推移到不一樣距離處，在色譜展開整個過程中，樣品的成分受到正反不一樣的力的作用。

(1)流動相運用毛細管力帶著樣品穿過固定相。

(2)樣品與固定相的互相作用是指組份在移行過程中由于偶極-（誘導）-偶極互相作用，氫鍵和范德華力的作用而產生不一樣程度的延緩、吸附、分散、離子互換和絡合等分離機理。

由于樣品組份與流動相和固定相之間的互相作用力程度不一樣，整個毛細管流動過程中分離運動都在進行?；谶@點，TLC系統(tǒng)（流動相和固定相）必須與樣品很好地匹配。

用顯色試劑處理，許多組份可在日光或紫外燈光下檢視。色譜可用肉眼或使用光密度計和攝影機記錄或影像系統(tǒng)措施來評價。2.薄層板2.1手工自制玻璃板的規(guī)定:用于制備薄層板的玻璃板規(guī)定表面光潔、平整，最佳使用厚薄1~2mm的優(yōu)質平板玻璃，一般窗玻璃一般不適宜用于制作薄層板，玻璃板需洗凈至不掛水，晾干，貯存于干燥潔凈處備用。玻璃板反復使用時，應注意常常用洗液及堿液清洗，保持玻璃板面的光潔是保證薄層板質量的最基本規(guī)定2.2制作措施:除另有規(guī)定外，將1份吸附劑加適量的水（如1份硅膠G一般加3份水），在研缽中用研缽沿一種方向小心研磨至成均勻的有合適粘稠度的膠漿,立即傾入涂布器中,均勻地向前推進涂布在玻璃板上;或按照不一樣涂布器的規(guī)定操作涂布;涂布好的薄層板于室溫下在水平臺上晾干,再在規(guī)定的溫度(一般為105℃~110℃)下烘約30分鐘活化,貯于干燥器中備用。薄層板的厚度一般為0.25~0.5mm.。2.2.1鋪板

鋪板用的勻漿不適宜過稠或過稀：過稠，板輕易出現(xiàn)拖動或停止導致的層紋；過稀，水蒸發(fā)后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1：2～3，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時間，根據(jù)經(jīng)驗來定，與空氣濕度有關，一般通過拿起研棒時勻漿下滴的狀況來判斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，深入影響上樣量。涂層薄，點樣易過載；涂層厚，顯色不則明顯。一般，板的質量對薄層鑒別的影響不是很大，影響最大的是展開劑的配制和展開系統(tǒng)的飽和。2.2.2點樣

盡量用小的點樣管。假如有足夠的耐性，最佳只用1微升的點樣管。這樣，點的斑點較小，展開的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點樣斑點擴散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點好樣的薄層板用電吹風的熱風吹干或放入干燥器里晾干。2.2.3展開劑配制

選擇合適的量器把各構成溶劑移入分液漏斗，強烈振搖使混合液充足混勻，放置，假如分層，取用體積大的一層作為展開劑。絕對不應當把各構成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配制展開劑?；旌喜痪鶆蚝蜎]有分液的展開劑，會導致層析的完全失敗。各構成溶劑的比例精確度對不一樣的分析任務有不一樣的規(guī)定，盡量到達試驗室儀器的最高精確度，例如：取1ml的溶劑，應使用1ml的單標移液管，移液管應符合計量認證規(guī)定，盡管多數(shù)時候這不是必須的。2.2.4展開系統(tǒng)的飽和

一般使用的是雙槽的展開缸，一槽用來放展開劑，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開的板放入兩槽間的平臺，斜架著，蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充斥展開缸，并使薄層板吸附蒸氣到達飽和，防止邊緣效應，飽和時間在半個小時左右。展開時難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中，不過對薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當然動作應當盡量輕、快2.2.5溫濕度的控制

溫濕度對薄層影響都很大。不凍結的前提下，一般溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。濕度的影響，估計重要是影響薄層板的吸附能力，導致選擇性（容量因子）的變化，濕度應根據(jù)實際狀況確定。溫度控制使用空調器或冰柜，濕度控制是通過在另一展開槽放置對應濃度的硫酸。2.2.6顯色

噴顯色劑顯色最重要是有好的霧化器。3.樣品點樣3．1點狀點樣和條帶狀點樣每次點樣前，TLC/HPTLC板應在正常光線下和紫外燈下用肉眼檢查薄層的損傷狀況和雜質，只有無損傷、清潔的TLC/HPTLC板方可使用。樣品可進行點狀或條帶狀點樣。要想獲得最佳的薄層辨別率，必須保證移行方向中的起點要小，常規(guī)的TLC薄層點狀點樣每次點0.5至5微升，相比之下，HPTLC薄層最大點樣量為1μl。點樣量較大的樣品可使用自動化妝置點樣，噴霧成條帶狀是一種可以點樣量大而同步又能促成最有效分離的點樣措施。在常規(guī)操作過程中，人工點樣一般使用微量毛細管（0.5/1/2/3和5μl），點樣時毛細管必須完全充斥和完全排空，要以垂直方向小心接觸TLC/HPTLC板面，不要損傷薄層，受損的薄層會導致溶劑不規(guī)律地流動而在色譜上產生失真的TLC譜帶。

3.2樣品點樣位置起點的最佳位置距側邊2.0cm。起點下緣的最小距離點樣基線距底邊2.0cm。兩個起點之間的距離必須令平行移行的主成分不會互相觸及。點狀點樣時原點的直徑應不不小于或等于3mm（高效板原點的直徑應更小）,條帶的長度由點樣樣品體積或樣品的種類和相對于板的尺寸點樣的數(shù)目來決定。到板側邊的距離必須足夠大以防止分離區(qū)失真變形。4.層析4.1展開室4.1.1直立式雙槽展開室具有節(jié)省溶劑、便于預平衡、可控制展開箱內的濕度等長處4.1.2水平展開室可以從薄層板的兩側向中間水平地展開，這樣可使一塊薄層板所承受的樣品個數(shù)比常規(guī)上行展開的薄層板增長一倍。4.1.3自動展開室(AMD)可使用五種溶劑對同一薄層進行多次展開，自動控制預飽和、展開方式、展開距離和干燥條件，分離效率比老式方式提高三倍（可在80mm之內分離40種成分），符合GLP/GMP規(guī)定。4.2.溶劑使用的溶劑必須是“分析純”或“色譜純”，溶劑構成采用體積量比（如正丁醇-冰乙酸-水=4：1：1，V/V/V），或者絕對量（如18ml甲苯+2ml甲醇）。其總量應足以使TLC/HPTLC板的浸入深度約為5mm。展開劑規(guī)定新鮮配制，不要多次反復使用,如需分層，則按規(guī)定放置分層后取需要的一相（上層或下層），備用。5.參數(shù)5.1溫度

薄層色譜分析一般在室溫中進行。在這過程，溫度在20-25oC算不上是臨界值。在這過程中無短期的溫度波動才是更為重要（防止抽風）。展開室應放置在無直射陽光和不通風處。溫度波動對層析成果不利，故將展開室放在靠近窗口或熱源處是欠妥的。5.2空氣濕度

空氣濕度極高或極低重要影響有非極性溶劑體系的無機涂層。相對空氣濕度高于70-80%會影響薄層鈍化，使Rf值增長。樣品點樣后，TLC薄層可置放在合適的硫酸和水的混合物的上面不少于30分鐘，調整至指定的相對濕度。有關這方面的更多資料可從HPTLCVario系統(tǒng)的操作手冊中獲得。

另首先，在樣品點樣前，TLC/HPTLC板可在105oC再活化30分鐘進行干燥。然后薄層必須用一塊玻璃板保護起來，只有起點區(qū)露出以便于樣品點樣。

若空氣太干燥，可在干燥器中將TLC/HPTLC薄層置于水的上方以到達所規(guī)定的狀況。

確定合適的層析條件的有效措施（用規(guī)定的濕度，溶劑蒸汽或溶劑調整使薄層到達規(guī)定的狀況）是使用HPTLCVario體系。

控制相對濕度用的硫酸溶液下表：

相對濕度所需硫酸濃度（V/V）

硫酸（ml）+水（ml）

32%47%42%58%65%72%88%68.010050.010057.010039.510034.010027.510010.81006．層析后衍生作用

若層析板分離的物質肉眼看不見又不能被紫外光活化，需加試劑方能顯色或發(fā)射熒光者，則需使用合適的試劑浸漬或均勻噴灑于薄層板面上，直接觀測或加熱顯色后觀測。加熱顯色者須注意加熱時間和溫度，尤其含羧甲基纖維素鈉的薄層板，加熱溫度過高或時間過長，輕易引起板面的焦化，如用硫酸等顯色劑更易導致板面的炭化而影響顯色效果。有的成分加試劑后，如揮發(fā)油成分經(jīng)香草醛硫酸顯色，加熱溫度和時間長短不一樣或放置時間不一樣均也許使斑點的顯色有所變化。

有的品種可熏以試劑或試液的蒸氣（如碘蒸氣、氨蒸氣）顯色。6.1噴霧試劑溶液以氣溶膠的形式均勻地噴灑在薄層上。電動的TLC噴霧器用至少的試劑溶液產生幾近理想的氣溶膠。6.2浸漬使用合適的設備如色譜浸漬設備III（ChromotogramImmersionDeviceIII）,TLC/HPTLC板浸漬具有重現(xiàn)的成果。通過設定垂直方向速度（進入，抽出）和規(guī)定停留時間，浸漬條件可被精確地原則化。7．檢測7.1定性分析（同一性試驗）在相似的狀態(tài)下（相似類型的TLC/HPTLC板、相似的溶劑體系構成、相似的組份點樣體積和其他TLC設備系統(tǒng)），樣品成分的Rf值、顏色、與專用的或特殊基因衍生化試劑的反應和參照物或原則物在同一TLC/HPTLC板同步層析所得的成果相符時，未知物就可認為是存在而被鑒別出來。分析的成果可以采用照片，照片復制品，影像記錄（如：CAMAG薄層色譜數(shù)碼成像系統(tǒng)）或TLC掃描儀措施記錄下來。

為增長測試物與參照物同一性的可信度，采用TLC掃描儀實時記錄其紫外光和可見光圖譜并進行比較。7.2定量分析

（儀器：CAMAGscanner-3；詳細操作請參照操作手冊或教學軟件）定量分析采用光密度掃描法來評價。用winCATS軟件控制薄層色譜掃描儀以及進行掃描成果的數(shù)據(jù)處理，計算出各成分的峰高和峰面積及其平均值和離散系數(shù)（CV）。通過單水平或多水平校準計算出成果。最終以匯報形式將所有掃描參數(shù)、原始資料及圖像成果保留及打印。

掃描狹縫寬度根據(jù)被測成分斑點的大小來調整（1）點狀點樣得到TLC中各成分，掃描其全寬度；（2）條帶狀點樣，一般可以掃描其色譜帶同心部分的50-70%。

物質的掃描波長可以通過光譜掃描來決定。

TLC/HPTLC板空白部位的漫射反射光用光電倍增器（PM）來搜集并定其值為10%。掃描吸光物質時，其吸取伴隨物質的量而增長。

對于具有熒光或可轉變成具旋光性衍生物的物質的測定。光源一般使用發(fā)射光譜在254-578nm之間的高壓汞蒸汽燈，在254，302，313，366，405，436，546和578nm處有尤其高強度的譜線。吸取了選擇性激發(fā)波長后TLC中各成分發(fā)射出的較長波長熒光由光倍增器記錄下來，使用銳截止濾波器或窄帶濾波器將會制止TLC/HPTLC板反射的激發(fā)波長光抵達光電倍增器。和吸附測定同樣，熒光強度作為板上定位的函數(shù)作圖得模擬曲線（熒光定位曲線）。TLC掃描儀的測定原理在有關的設備文獻中有報導。

熒光測定比吸取測定優(yōu)越在于如下幾點：（1）檢出極限低1-3個數(shù)量級；（2）在較寬的濃度范圍內校準曲線呈線性；（3）選擇性較高。8.影響薄層色譜分析的原因（１）樣品的預處理及供試液的制備制備樣品供試液所用的溶劑溶解度不適宜太大，粘度不適宜太高，沸點適中。如一捻金中人參二醇及人參三醇的鑒別，若用稀酸水解后直接用氯仿萃取，點樣層析，色譜因大黃成分干擾，斑點很難識別，經(jīng)堿性氧化鋁小住吸附凈化后，除去了大部分干擾，成果色譜清晰，人參二醇及人參三醇很輕易辯認。（２）薄層色譜的點樣技術點樣是薄層色譜分析非常關鍵的環(huán)節(jié)。它既關系到能否得到可以重新的有良好分離度的薄層色譜，也關系到定量測定成果的精確。（３）吸附劑的活性與相對濕度對薄層色譜的影響（４）溶劑蒸氣在薄層色譜中的作用應注意：預平衡、預飽和、完全飽和三者的區(qū)別只需要展開劑的蒸氣在展開箱中預平衡一定期間，稱預平衡預吸附：薄層板的干燥板面對展開箱空間氣體分子的任何程度的吸附稱預飽和吸附飽和：薄層板的干燥板面與展開箱的飽和氣體空間到達平衡狀態(tài)稱完全飽和（５）薄層色譜的優(yōu)化及溶劑系統(tǒng)（６）溫度對薄層色譜的影響（７）影響薄層色譜的其他原因操作技巧和熟煉程度以及所有的器材、溶劑、試劑等的質量。高效液相有關知識一、HPLC應遵照幾條原則1、一次性原則：當系統(tǒng)出現(xiàn)了故障，可試探地變化某些狀態(tài)，一次變化一種參數(shù)。例如限制峰拖尾問題，可依次變化流動相換保護柱換分析柱。2、二次比較原則：動手之前已經(jīng)找到處理措施。例如在進樣過程中發(fā)現(xiàn)內標物的峰度值低，可重新進樣，假如是偶爾變低，與否認量管里進了氣泡。此規(guī)則可用于考察系統(tǒng)變化后的狀況。更換了流動相后在正式進樣前可測定兩次原則品以檢查保留時間的穩(wěn)定狀況和色譜峰的穩(wěn)定性。3、取代規(guī)則：用好的部件換下可疑的部件，是查找故障的最佳措施。4、換回規(guī)則：此規(guī)則和取代規(guī)則一起運用，好部件取代可疑部件后狀況并未得到改善，應重新?lián)Q上原部件。這條規(guī)則僅適合單一的故障。換回規(guī)則不適應于如下狀況：（1）取下是新部件易損壞（如泵密封圈）；（2）部件價格低（如柱內襯過濾片）（3）重新裝上原部件要冒損壞的風險；（4）定期更換的部件。5參照條件規(guī)則：一般由兩種參照條件（1）原則參照條件（2）試驗參照條件。原則參照條件也叫原則試驗條件。是從一種系統(tǒng)到另一種系統(tǒng)易于驗證的條件。試驗參照條件合用于檢查正常系統(tǒng)每天的工作狀況。每天可以打印兩張校正用色譜圖作對照，檢查保留時間，峰寬、系統(tǒng)壓力等方面的變化。發(fā)現(xiàn)峰的斜率、色譜柱塔板數(shù)和其他參照值與本來色譜圖相比有了變換，系統(tǒng)運行中也許發(fā)生了問題。6記錄規(guī)則：在每次維護和故障排除后都做記錄。每臺儀器都應備有維護紀錄本，內容包括日期故障部位現(xiàn)象產生的原因，處理的措施和成果等。試過的或換下的部件都要貼上標志。7預測原則平時多保養(yǎng)，系統(tǒng)會減少故障，消除連鎖性地損壞。例如：因平時不注意保養(yǎng)，泵的密封圈壞了，導致流動相滲漏，會腐蝕泵和其他部件。每天開始工作或結束工作時發(fā)現(xiàn)燈壽命引起基線漂移時換燈，以免停機導致?lián)p失。8緩沖液規(guī)則：停機時一定要洗凈系統(tǒng)中的緩沖物。系統(tǒng)中緩沖液的殘留會導致腐蝕，磨損和阻塞。理想的沖洗液是不含緩沖物的相似構成的流動相。不要讓純水貯藏于系統(tǒng)中，以防生長細菌。沖洗程序：純水沖洗30－60（ml\min）再用甲醇沖洗30分鐘后關機。千萬不能一開機就用有機溶劑沖洗。否則無機鹽就會沉淀在系統(tǒng)中，導致不良后果。二、HPLC故障的防止1、可以定期更換密封墊圈（防止性的保養(yǎng)）；系統(tǒng)常由于保護柱問題而產生壓力升高，一旦發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)壓力升高，就可以換上新的保護柱（防止故障發(fā)生）。2、記錄的建立：（1）系統(tǒng)使用記錄（2）色譜柱記錄（3）個人試驗記錄或測定樣品記錄。雖然我們不也許完全防止故障的出現(xiàn)，但可以減少因此而導致的麻煩，每次試驗在系統(tǒng)記錄本上都要有儀器狀況與維護記錄。(1)系統(tǒng)使用狀況：A．系統(tǒng)中各組件的商品牌號，型號，系列號，購進日期，安裝日期，每個組件的許可證信息（自動進樣器泵色譜柱檢測器數(shù)據(jù)處理裝置等）。B.根據(jù)表1－3的原則條件測量原則參數(shù)和原則色譜圖。要注意流動相流速壓力溫度檢測器的參數(shù)樣品量等。流動相極性大于固定相的極性的色譜（反相）流動相甲醇／水(70:30)色譜柱C18流速1ml／min檢測器UV254nm樣品苯酚苯乙酮硝基苯苯甲醚甲苯極性鍵合相流動相正己烷/異丙醇（75：25）色譜柱腈基流速1ml／min檢測器UV254nm樣品硝基苯卞醇2-4二硝基甲苯對硝基卞醇流動相極性小于固定相的極性的色譜（正相）流動相正己烷/二氯甲烷/異丙醇胺（95：4：1）色譜柱硅膠流速1ml／min檢測器UV254nm樣品2-苯-2-丙醇甲卞醇肉桂醇C、使用記錄：日期工作內容開機時間樣品數(shù)儀器性能評價操作人員。D、維護紀錄：日期原因修理人員修理成果E、換色譜主：牌號種類尺寸系列號；與前一根柱子的原則參照色譜圖比較。F、換部件：日期原因型號系列號；做一次原則參照色譜圖比較。（2）色譜柱記錄A、種類牌號系列號啟用日期按照商家提供的原則參照條件測試記錄，注意樣品流動相流速壓力N值（色譜塔板數(shù)）t0(純流動相流過柱的時間，也稱死時間)TR(組分離開柱時間)Rs(分離度)As(色譜峰不對稱因子)。B、使用記錄：儀器樣品種類數(shù)量操作人員。C、貯藏記錄：保留溶劑（絕對嚴禁用緩沖液）與否加保護蓋，報廢后與否重新又使用過。D、維護紀錄：日期原因措施（例如反沖燒結板的置換）維護人員。E、對色譜柱的重新評價（假如需要）:按廠家規(guī)定的原則條件操作人員。F、使用總結：色譜柱的壽命（以月計）分析樣品數(shù)目損壞原因對于延長壽命的提議。

編寫記錄是為了查詢柱的使用經(jīng)歷，操作人員可以由此推斷杰出譜柱損壞的原因－系統(tǒng)導致的損壞試驗程序有誤流動相不合適樣品的污染，以及操作者的經(jīng)驗等。調整好系統(tǒng)，完善分析系統(tǒng)，培訓操作人員，以盡量地延長色譜柱的壽命。（3）個人試驗記錄：可以幫你理解使用溶劑的批號，對色譜分析的影響；理解純化水系統(tǒng)工作與否正常，結合色譜柱記錄，可以清晰地理解色譜柱使用狀況以及其他原因導致色譜主地失效。A、操作條件：流動相的配制（包括體積ph過濾貯存等）流速溫度檢測器多種設定的操作程序。B、樣品處理的措施。C、分析試驗程序包括樣品體積選用原則執(zhí)行程序。D、數(shù)據(jù)處理程序。E、分析成果和匯報多種數(shù)據(jù)資料色譜圖。F、試驗現(xiàn)象的觀測成果G、儀器設備的多種