HJ784-2016土壤和沉積物多環(huán)芳烴的測(cè)定高效液相色譜法方法驗(yàn)證報(bào)告

檢測(cè)分析方法驗(yàn)證報(bào)告（驗(yàn)）字〔2022〕第 號(hào)方法名稱：土壤和沉積物多環(huán)芳烴的測(cè)定液相色譜法 HJ784-2016 項(xiàng)目主編單位： 驗(yàn)證單位： 項(xiàng)目負(fù)責(zé)人及職稱： （檢測(cè)員） 通訊地址： 聯(lián)系方式： 報(bào)告日期： 2022年03月17日

土壤和沉積物多環(huán)芳烴的測(cè)定高效液相色譜法一、適用范圍標(biāo)準(zhǔn)HJ784-2016測(cè)定土壤和沉積物中十六種多環(huán)芳烴的液液萃取高效液相色譜法。適用于土壤和沉積物中十六種多環(huán)芳烴的測(cè)定。十六種多環(huán)芳烴（PAHs）包括：萘、苊、二氫苊、芴、菲、蒽、熒蒽、芘、苯并[a]蒽、屈、苯并[b]熒蒽、苯并[k]熒蒽、苯并[a]芘、茚并[1,2,3-cd]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[ghi]苝。當(dāng)取樣量為10.0g，定容體積為1.0ml時(shí)，用紫外檢測(cè)器測(cè)定16種多環(huán)芳烴的方法檢出限為3μg/kg～5μg/kg，測(cè)定下限為12μg/kg～20μg/kg。二、方法原理土壤和沉積物樣品中的多環(huán)芳烴用合適的萃取方法（索氏提取、加壓流體萃取等）提取，根據(jù)樣品基體干擾情況采取合適的凈化方法（硅膠層析柱、硅膠或硅酸鎂固相萃取柱等）對(duì)萃取液進(jìn)行凈化、濃縮、定容，用配備紫外/熒光檢測(cè)器的高效液相色譜儀分離檢測(cè)，以保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。三、試劑和材料3.1乙腈（CH3CN）：HPLC級(jí)。3.2正己烷（C6H14）：HPLC級(jí)。3.3二氯甲烷（CH2Cl2）：HPLC級(jí)。3.4丙酮（CH3COCH3）：HPLC級(jí)。3.5丙酮-正己烷混合溶液：1+1。用丙酮和正己烷按1:1的體積比混合。3.6二氯甲烷-正己烷混合溶液：2+3。用二氯甲烷和正己烷按2:3的體積比混合。3.7二氯甲烷-正己烷混合溶液：1+1。用二氯甲烷和正己烷按1:1的體積比混合。3.8干燥劑：無(wú)水硫酸鈉（Na2SO4）或粒狀硅藻土置于馬弗爐中400℃烘4h，冷卻后置于磨口玻璃瓶中密封保存。3.9硅膠：粒徑75μm～150μm（200目～100目）。使用前，應(yīng)置于平底托盤中，以鋁箔松覆，130℃活化至少16h。3.10玻璃層析柱：內(nèi)徑約20mm，長(zhǎng)10cm～20cm，帶聚四氟乙烯活塞。3.11硅膠固相萃取柱：1000mg/6ml。3.12硅酸鎂固相萃取柱：1000mg/6ml。3.13石英砂：粒徑150μm～830μm（100目～20目），使用檢驗(yàn)，確認(rèn)無(wú)干擾。3.14玻璃棉或玻璃纖維濾膜：在馬弗爐中400℃烘1h，冷卻后置于磨口玻璃瓶中密封保存。3.15氮?dú)猓杭兌取?9.999%。3.16試劑信息一覽表序號(hào)試劑內(nèi)部編號(hào)生產(chǎn)廠家純度1乙腈（CH3CN）歐普森色譜純2甲醇（CH3OH）歐普森色譜純3二氯甲烷（CH2Cl2）科密歐色譜純4正己烷（C6H14）科密歐色譜純5硫代硫酸鈉（Na2S2O3·5H2O）分析純6無(wú)水硫酸鈉（Na2SO4）分析純7氯化鈉（NaCl）分析純8丙酮科密歐色譜純3.17標(biāo)準(zhǔn)溶液信息一覽表名稱內(nèi)部編號(hào)濃度多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)貯備液200mg/L十氟聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液1000ug/mL多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)使用液/20.0mg/L十氟聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)使用溶液/40μg/ml四、儀器設(shè)備、人員、環(huán)境4.1儀器與設(shè)備儀器設(shè)備名稱型號(hào)編號(hào)檢定日期檢定有效期液相色譜儀（HPLC）1260infinityⅡ色譜柱5μm×25cm×4.6mm/索氏提取器K-D濃縮器//干燥柱長(zhǎng)250mm，內(nèi)徑10mm/硅膠柱1000mg/6.0ml/C18固相萃取柱1000mg/6.0ml/弗羅里硅土柱1000mg/6.0ml/4.2人員信息姓名學(xué)歷專業(yè)從事相關(guān)工作年限持證上崗情況人員能力確認(rèn)4.3環(huán)境信息檢測(cè)日期實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)環(huán)境溫度（℃）相對(duì)濕度（%RH）2022.3.17色譜二室25542022.3.17色譜二室24602022.3.17色譜二室2562四、分析步驟4.1除去樣品中的枝棒、葉片、石子等異物，稱取樣品10g（精確到0.01g），加入適量無(wú)水硫酸鈉，研磨均化成流沙狀。如果使用加壓流體提取，則用粒狀硅藻土脫水。4.2提取：將制備好的試樣放入玻璃套管或紙質(zhì)套管內(nèi)，加入50.0μl十氟聯(lián)苯使用液，將套管放入索氏提取器中。加入100ml丙酮-正己烷混合溶液，以每小時(shí)不小于4次的回流速度提取16h~18h。4.3過濾和脫水：在玻璃漏斗上墊一層玻璃棉或玻璃纖維濾膜，加入約5g無(wú)水硫酸鈉，將提取液過濾到濃縮器皿中。用適量丙酮-正己烷混合溶液洗滌提取容器3次，再用適量丙酮-正己烷混合溶液沖洗漏斗，洗液并入濃縮器皿。4.4濃縮：用濃縮裝置濃縮至1mL。如不需凈化，加入約3mL乙腈，再濃縮至約1mL，將溶劑完全轉(zhuǎn)化為乙腈。如需凈化，加入約5mL正己烷并濃縮至約1mL，重復(fù)此濃縮過程3次，將溶劑完全轉(zhuǎn)化為正己烷，再濃縮至約1ml，待凈化。4.5凈化用40ml正己烷預(yù)淋洗層析柱，淋洗速度控制在2ml/min，在頂端無(wú)水硫酸鈉暴露于空氣之前，關(guān)閉層析柱底端聚四氟乙烯活塞，棄去流出液。將濃縮后的約1ml提取液移入層析柱，用2ml正己烷分3次洗滌濃縮器皿，洗液全部移入層析柱，在頂端無(wú)水硫酸鈉曝露于空氣之前，加入25ml正己烷繼續(xù)淋洗，棄去流出液。用25ml二氯甲烷-正己烷混合溶液洗脫，洗脫液收集于濃縮器皿中，用氮吹濃縮法（或其他濃縮方式）將洗脫液濃縮至約1ml，加入約3ml乙腈，再濃縮至1ml以下，將溶劑完全轉(zhuǎn)換為乙腈，并準(zhǔn)確定容至1.0ml待測(cè)。凈化后的待測(cè)試樣如不能及時(shí)分析，應(yīng)于4℃下冷藏、避光、密封保存，30d內(nèi)完成分析。五、分析步驟5.1儀器條件紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)：254nm、220nm；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min;梯度洗脫程序：時(shí)間（min）乙腈%水%060408604018100028100028.560403560405.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取一定量多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)使用液于乙腈中，制備6個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列，多環(huán)芳烴質(zhì)量濃度分別為0.05、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0μg/ml。按照色譜參考條件，由低濃度到高濃度依次對(duì)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)樣，以多環(huán)芳烴類化合物的質(zhì)量濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，建立校準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)見附件。5.3樣品的測(cè)定取10μl待測(cè)樣品注入高效液相色譜儀中。記錄色譜峰的保留時(shí)間和峰面積。5.4空白試驗(yàn)在分析樣品的同時(shí)，應(yīng)做空白試驗(yàn)，即用蒸餾水代替水樣，按與樣品測(cè)定相同步驟分析，檢查分析過程中是否有污染。六、結(jié)果計(jì)算與表示6.1土壤樣品中多環(huán)芳烴的含量（μg/kg），按照以下公式進(jìn)行計(jì)算。P式中： Pi ——樣品中組分i的質(zhì)量濃度，μg/kgPxi ——從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得組分i的質(zhì)量濃度，mg/LV ——萃取液濃縮后的體積，ml；m ——樣品量（濕重），g；Wdm——6.2沉積物樣品中多環(huán)芳烴的含量（μg/kg），按照以下公式進(jìn)行計(jì)算。P式中： Pi ——樣品中組分i的質(zhì)量濃度，μg/kgPxi ——從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得組分i的質(zhì)量濃度，mg/LV ——萃取液濃縮后的體積，ml；m ——樣品量（濕重），g；W ——沉積物樣品含水率，%。七、方法檢出限的計(jì)算向空白土壤（硅藻土）中加入100μL多環(huán)芳烴類化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液（1μg/mL），配置成含各目標(biāo)化合物濃度為0.1ug/L標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照液液萃取方法萃取樣品，萃取液經(jīng)脫水、濃縮、凈化、和定容后按照分析步驟全過程平行測(cè)定7次，將各測(cè)定結(jié)果換算為樣品中的濃度，計(jì)算7次平行測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)偏差，按下式計(jì)算方法檢出限。MDL=t(n-1,0.99)×S式中：MDL——方法檢出限；n——樣品的平行測(cè)定次數(shù)；t——自由度為n-1，置信度為99%時(shí)的t分布（單側(cè)）；S——n次平行測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)偏差。其中，當(dāng)自由度為n-1=6時(shí)，置信度為99%時(shí)的t值為3.143。檢出限數(shù)據(jù)見附件。八、精密度測(cè)定結(jié)果精密度是指在規(guī)定的條件下，用同一方法對(duì)一均勻試樣進(jìn)行重復(fù)分析時(shí)，所得分析結(jié)果之間的一致性程度，精密度用標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(又叫變異系數(shù))表示，通常與被測(cè)物的含量水平有關(guān)。取編號(hào)為的土樣6份，向每份中加入30μL多環(huán)芳烴類化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液（1μg/mL），配置成含目標(biāo)化合物濃度為0.03μg/L的樣品。按照液液萃取方法萃取樣品，萃取液經(jīng)脫水、濃縮、凈化、和定容后按照分析步驟全過程平行測(cè)定6次，將各測(cè)定結(jié)果換算為樣品中的濃度，計(jì)算6次平行測(cè)定的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。按照上述過程，分別取編號(hào)為002的土樣6份，配置成含目標(biāo)化合物濃度為0.45μg/L、5.00μg/L的樣品。按照液液萃取方法萃取樣品，萃取液經(jīng)脫水、濃縮、凈化、和定容后按照分析步驟全過程平行測(cè)定6次，將各測(cè)定結(jié)果換算為樣品中的濃度，計(jì)算6次平行測(cè)定的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。測(cè)定數(shù)據(jù)見附件。取編號(hào)為111的沉積物樣品6份，向每份中加入30μL多環(huán)芳烴類化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液（1μg/mL），配置成含目標(biāo)化合物濃度為0.03μg/L的樣品。按照液液萃取方法萃取樣品，萃取液經(jīng)脫水、濃縮、凈化、和定容后按照分析步驟全過程平行測(cè)定6次，將各測(cè)定結(jié)果換算為樣品中的濃度，計(jì)算6次平行測(cè)定的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，測(cè)定數(shù)據(jù)見附件。按照上述過程，分別取編號(hào)為002的沉積物樣品6份，配置成含目標(biāo)化合物濃度為0.45μg/L、5.00μg/L的樣品。按照液液萃取方法萃取樣品，萃取液經(jīng)脫水、濃縮、凈化、和定容后按照分析步驟全過程平行測(cè)定6次，將各測(cè)定結(jié)果換算為樣品中的濃度，計(jì)算6次平行測(cè)定的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。測(cè)定數(shù)據(jù)見附件。九、準(zhǔn)確度測(cè)定結(jié)果向土樣中加入250μL多環(huán)芳烴類化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0μg/mL），按照液液萃取方法萃取樣品，萃取液經(jīng)脫水、濃縮、凈化、和定容后按照分析步驟全過程平行測(cè)定7次，計(jì)算加標(biāo)回收率，測(cè)定結(jié)果見附件。向沉積物中加入250μL多環(huán)芳烴類化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液（10.0μg/mL），按照液液萃取方法萃取樣品，萃取液經(jīng)脫水、濃縮、凈化、和定容后按照分析步驟全過程平行測(cè)定7次，計(jì)算加標(biāo)回收率，測(cè)定結(jié)果見附件。十、實(shí)樣測(cè)試選擇編號(hào)為004的實(shí)際土壤樣品，按照樣品處理過程后按照分析步驟全過程進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果如下：名稱實(shí)樣測(cè)試數(shù)據(jù)測(cè)定濃度（μg/mL）樣品濃度（ug/L）萘0.00000.0000苊0.00000.0000芴0.03130.0157二氫苊0.00720.0036菲0.00000.0000蒽0.00000.0000熒蒽0.03350.0168芘0.03070.0154?0.00000.0000苯并[a]蒽0.00000.0000苯并[b]熒蒽0.00000.0000苯并[k]熒蒽0.02810.0141苯并[a]芘0.00000.0000二苯并[a,h]蒽0.03300.0165苯并[g,h,i]苝0.04050.0203茚并[1,2,3-cd]芘0.03680.0184選擇編號(hào)為004的實(shí)際沉積物樣品，按照樣品處理過程后按照分析步驟全過程進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果如下：名稱實(shí)樣測(cè)試數(shù)據(jù)測(cè)定濃度（μg/mL）樣品濃度（ug/L）萘0.00000.0000苊0.00000.0000芴0.03130.0157二氫苊0.00720.0036菲0.00000.0000蒽0.00000.0000熒蒽0.03350.0168芘0.03070.0154?0.00000.0000苯并[a]蒽0.00000.0000苯并[b]熒蒽0.00000.0000苯并[k]熒蒽0.02810.0141苯并[a]芘0.00000.0000二苯并[a,h]蒽0.03300.0165苯并[g,h,i]苝0.04050.0203茚并[1,2,3-cd]芘0.03680.0184十一、評(píng)價(jià)與驗(yàn)證結(jié)論11.1方法檢出限評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)方法中萃取樣品為1L時(shí)，方法檢出限為0.002-0.016ug/L，檢測(cè)下限為：0.008-0.064ug/L；本次實(shí)驗(yàn)中16種多環(huán)芳烴的方法檢出限為0.0003-0.0052ug/L，檢測(cè)下限：0.0037-0.0206ug/L均小于標(biāo)準(zhǔn)方法檢出限及檢測(cè)下限。11.2精密度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)方法中相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為±15.0%；本次實(shí)驗(yàn)中低中高三種不同濃度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.21%-2.51%、0.09-0.42%和0.06-