地標(biāo)-標(biāo)準(zhǔn)文本-混合型飼料添加劑中解熱鎮(zhèn)痛類藥物測定技術(shù)規(guī)范

ICS65.120CCSB46DBDeterminationofFourAntipyreticandAnalgesicDrugsinmixedfeedadditives:paracetamol,dipyrone,aminopyrineandantipyrine20××-××-××發(fā)布20××-××-××實施上海市市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB/T××××—20XX本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。本文件由上海市農(nóng)業(yè)農(nóng)村委員會提出，上海市畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口。本文件起草單位：上海市動物疫病預(yù)防控制中心。本文件主要起草人：1DB/T××××—20XX混合型飼料添加劑中解熱鎮(zhèn)痛類藥物測定技術(shù)規(guī)范本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了混合型飼料添加劑中對乙酰氨基酚、安乃近、氨基比林、安替比林四種解熱鎮(zhèn)痛類藥物的檢測試驗的基本要求（包括樣品前處理要求、儀器要求、結(jié)果判定等）。本標(biāo)準(zhǔn)適用于指導(dǎo)混合型飼料添加劑中對乙酰氨基酚、安乃近、氨基比林、安替比林四種解熱鎮(zhèn)痛類藥物的高效液相色譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析試驗。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T20001.5標(biāo)準(zhǔn)編寫規(guī)則第5部分：規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)GB/T23182飼料中獸藥及其他化學(xué)物檢測試驗規(guī)程GB/T27417合格評定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗證指南GB/T20195動物飼料試樣的制備3術(shù)語和定義GB/T27417-2017、GB/T32467-2015中界定的術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。4采樣和樣品制備按GB/T14699規(guī)定的方法和程序進行采樣。采樣對象只限于混合型飼料添加劑。按GB/T20195制備樣品，至少200g，粉碎使其全部通過0.425mm孔徑的試驗篩，充分混勻，裝入密閉容器中，備用。5樣品前處理要求5.1對照品溶液的制備精密稱取目標(biāo)對照品適量，用甲醇或者其他適宜溶劑配制成濃度合適的溶液，作為液相色譜法及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的對照品溶液。5.2供試品溶液的制備一般包含提取、凈化、富集/稀釋等操作。首先稱取樣品細(xì)粉適量，用甲醇或者其他適宜溶劑（超聲）定量溶解，凈化，濾過，精密量取續(xù)濾液定量稀釋（稀釋倍數(shù)要確保不造成儀器污染或光譜圖失真即得；液體制劑量直接精密量取或稱取適量，稀釋，即得。對于含有高濃度的有機鹽和乳化劑等存在強烈的基質(zhì)效應(yīng)輔料的產(chǎn)品，應(yīng)適當(dāng)增加前處理步驟。提取效率可用以下方法進行試驗：a)用陽性的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或水平測試的陽性樣品進行試驗；b)陽性樣品用同一溶劑反復(fù)提取，觀察被分析物的濃度變化；c)用不同提取技術(shù)或不同提取溶劑進行比較。6儀器要求2DB/T××××—20XX6.1液相色譜—二極管陣列法高效液相色譜法本標(biāo)準(zhǔn)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗根據(jù)可疑添加物性質(zhì)，參照藥品國家標(biāo)準(zhǔn)、獸藥國家標(biāo)準(zhǔn)或者獸藥殘留檢測方法標(biāo)準(zhǔn)的條件自建。6.2液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法液質(zhì)聯(lián)用條件根據(jù)可疑添加物性質(zhì)自建，采用離子掃描（SRM）或多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。定性離子對選用獸藥殘留檢測方法標(biāo)準(zhǔn)中的定性離子對或者符合至少4個識別點數(shù)的要求。6.3液相色譜—高分辨質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)中所使用的高分辨質(zhì)譜儀在執(zhí)行目標(biāo)物篩查確認(rèn)程序時應(yīng)符合實際分辨率不小于20000[質(zhì)荷比(m/z)等于200,按半峰寬(FWHM)計］，質(zhì)量準(zhǔn)確性相對偏差不大于5ppm(m/z等于200)的基本要求；在同時執(zhí)行非目標(biāo)物分析程序時應(yīng)符合實際分辨率不小于70000(m/z等于200,按FWHM計質(zhì)量準(zhǔn)確性相對偏差不大于3ppm(m/z等于200)的基本要求。儀器應(yīng)定期進行校準(zhǔn)調(diào)諧，確保篩查過程中處于正常工作狀態(tài)，達(dá)到以上要求。參考條件見附錄A。7結(jié)果判定7.1定性7.1.1液相色譜法：分別記錄對照品和供試品溶液的色譜圖與光譜圖；通過與對照品液相色譜圖保留時間、光譜圖的比對，確定供試品溶液中是否含有疑似目標(biāo)添加物。在供試品和對照品濃度接近的情況下，供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對照品峰保留時間一致的色譜峰（差異不大于±2.5%）；在一定的波長范圍內(nèi)，兩者光譜圖無明顯差異；最大吸收波長一致（差異不大于±2nm），判為檢出。7.1.2液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法：分別記錄對照品和供試品溶液中的特征離子質(zhì)量色譜圖；通過與對照品溶液色譜圖保留時間、離子豐度比的對比，確定供試品溶液中是否含有可疑添加物。供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對照品峰保留時間一致的色譜峰（差異不大于±2.5%）；供試品離子豐度比應(yīng)與對照品的一致，判為檢出。7.1.3液相色譜高分辨質(zhì)譜法：分別記錄對照品和供試品溶液中的液相色譜圖及一級質(zhì)譜圖與二級質(zhì)譜圖；通過與對照品溶液色譜圖保留時間、質(zhì)譜圖的對比，確定供試品溶液中是否含有可疑添加物。結(jié)果判定：供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對照品峰保留時間一致的色譜峰（保留時間相對偏差不大于2.5%供試品質(zhì)譜圖與對照品的應(yīng)一致（包括分子離子和至少一個碎片離子，質(zhì)量數(shù)差異小于等于5ppm），判為檢出非法添加物。供試品與對照品分子離子峰的質(zhì)量數(shù)偏差不大于5ppm，且二級質(zhì)譜圖與對照品的二級質(zhì)譜圖一致，判為檢出。具體要求應(yīng)符合表1判定條件。表1目標(biāo)物確認(rèn)判定條件判別項判定條件保留時間化合物的保留時間應(yīng)至少大于死時間的2倍。目標(biāo)物與參考標(biāo)準(zhǔn)品以相同條件測定所獲保留時間的絕對偏差應(yīng)不大于0.2min。質(zhì)量準(zhǔn)確性一級母離子的mlz相對偏差亥5ppm;二級子離子的mlz相對偏差10ppm;當(dāng)mlz<200時，其絕對偏差應(yīng)<1mDa。DB/T××××—20XX同位素峰應(yīng)將確認(rèn)樣品調(diào)整至適當(dāng)?shù)倪M樣濃度確保主要同位素峰可測，同位素峰的mlz應(yīng)符合目標(biāo)物確認(rèn)的質(zhì)量準(zhǔn)確性要求。碎片相對離子豐度比比較二級碎片質(zhì)譜圖，其主要碎片離子有2個或2個以上符合表中質(zhì)扯準(zhǔn)確性要求，且其相對離子豐度比符合表3的最大允許偏差要求。7.2定量通過定性判別確認(rèn)為目標(biāo)物后，用標(biāo)準(zhǔn)曲線或者單點校準(zhǔn)方式計算目標(biāo)物含量。按照試劑空白、樣品空白、標(biāo)準(zhǔn)曲線、試樣的順序進樣測定。標(biāo)準(zhǔn)曲線至少6個點（包括零點）均勻分布于線性范圍內(nèi)，其最低點應(yīng)低于或等于方法定量限對應(yīng)的濃度；定量方法的線性回歸方程相關(guān)系數(shù)不低于0.99。(資料性)參考條件4DB/T××××—20XX1.1前處理參考條件平行做兩份試驗。稱取試樣2g（精確至0.01g于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入25mL甲醇，渦旋1min，振蕩提取20min，9000r/min離心5min，準(zhǔn)確移取上清液5mL于10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，混勻，微孔濾膜過濾，待測。1.2液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：a)色譜柱：C18柱，柱長250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5.0μm，或性能相當(dāng)者；b)柱溫：40℃;c)檢測波長：245nm；d)流速：1.0mL/min；e)進樣量：20μL。f)流動相：A相為磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉3.0g，加水1000mL，用磷酸調(diào)pH值至7.0B相為乙腈，梯度洗脫程序見表1.1。表1.1梯度洗脫程序%%2.1前處理參考條件提?。浩叫凶鰞煞菰囼灐７Q取試樣2g（精確至0.01g），于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入20mL甲醇，渦旋1min，振蕩提取20min，于9000r/min離心5min，準(zhǔn)確移取0.5mL上清液于10mL離心管中，加入2.5mL0.1%甲酸溶液，渦旋混勻。備用。凈化：依次用3mL甲醇（5.2.2）和3mL水活化固相萃取小柱（5.2.10），取備用液（5.5.1）全部過柱，用3mL水淋洗，抽干小柱，用3mL5%氨水甲醇溶液（5.2.5）洗脫，收集洗脫液于50℃下用氮氣吹干，準(zhǔn)確加入2.5mL甲醇（5.2.2），渦旋溶解，過膜（5.2.11），待測。凈化過程需全程避光操作。2.2液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：a）色譜柱：C18柱，柱長100mm，內(nèi)徑2.1mm，粒徑1.7μm，或性能相當(dāng)者；b）流動相：A相為0.1%甲酸溶液（5.2.6）,B相為乙腈（5.2.3）,梯度洗脫程序見表2；c）柱溫：35℃;d）流速：0.3mL/min；e）進樣量：2μL。DB/T××××—20XX表1.2梯度洗脫程序%%2.3質(zhì)譜參考條件注意：安乃近在提取凈化過程中全部轉(zhuǎn)化為4-甲氨基安替比林，故使用4-甲氨基安替比林作為安乃近的標(biāo)記物定量。質(zhì)譜參考條件如下：a)