實驗二 細(xì)菌人工培養(yǎng)

實驗二細(xì)菌的人工培養(yǎng)2021/6/271實驗?zāi)康牧私馊斯づ囵B(yǎng)基的制作。了解細(xì)菌的接種方法分離培養(yǎng)方法——平板劃線法（混合菌液）了解細(xì)菌的生長現(xiàn)象液體、固體、半固體培養(yǎng)基2021/6/272

一、人工培養(yǎng)基的制備和種類1.制備原則2.制備程序3.常用培養(yǎng)基的分類

2021/6/2731.制備原則（1）適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)成分；（2）合適的酸堿度；（3）配制后經(jīng)滅菌使之無菌，方可應(yīng)用。2021/6/2742.制備程序配料→熔化→測定及矯正PH→分裝→滅菌→備用配制方法（1）稱量分別稱取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于燒杯中。（2）溶化加入所需水量2/3的蒸餾水于燒杯中，用玻棒攪拌，使藥品全部溶化。（3）調(diào)pH用1mol/LNaOH溶液調(diào)pH至7.2。（4）定容將溶液倒入量筒中，加水至所需體積。（5）加瓊脂加入所需量瓊脂，加熱融化，補足失水。（6）分裝、加塞、包扎。（7）高壓蒸汽滅菌100Pa滅菌20min。LB培養(yǎng)基的配制：成分：胰蛋白胨(tryptone)10g、酵母提取物(yeastextract)5g氯化鈉(NaCl)10g、固體培養(yǎng)基另加瓊脂粉15-20g，加雙蒸水至1000mL,用5mol/LNaOH（約0.2ml）調(diào)pH至7.2，121℃滅菌30min。2021/6/275按物理狀態(tài)不同劃分固體培養(yǎng)基

液體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑，使其成為固體狀態(tài)，瓊脂含量一般為1.5%-2.0%瓊脂含量一般為0.3%-0.5%不加任何凝固劑半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基常用來進(jìn)行微生物的分離、鑒定、活菌計數(shù)及菌種保藏

觀察微生物的運動特征、分類鑒定及噬菌體效價滴定

用于增菌，大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)及在實驗室進(jìn)行微生物的研究3.常用培養(yǎng)基的分類2021/6/276按用途不同劃分基礎(chǔ)培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基含有一般微生物生長繁殖所需的基本營養(yǎng)物。比如肉湯培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基利用細(xì)菌代謝產(chǎn)物不同而使指示劑顯色反應(yīng)不同的原理，鑒別和鑒定細(xì)菌。如麥糠凱瓊脂培養(yǎng)基。營養(yǎng)培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長，有利于所需微生物的生長。用來將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來。如SS瓊脂培養(yǎng)基。在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特殊營養(yǎng)物質(zhì)制成的一類營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基。如血瓊脂培養(yǎng)基。特殊培養(yǎng)基如厭氧培養(yǎng)基。用于厭氧菌的培養(yǎng)。3.常用培養(yǎng)基的分類2021/6/277二、細(xì)菌的接種技術(shù)分離培養(yǎng)接種法——平板劃線法、平行劃線法純種細(xì)菌接種法——固體斜面培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法半固體培養(yǎng)基接種法2021/6/278無菌操作：在無菌箱或操作室內(nèi)無菌的環(huán)境下進(jìn)行2021/6/2792021/6/2710常用的有接種針、接種環(huán)、接種鉤、接種圈、接種鏟或接種鋤、玻璃涂棒等。圖－6接種工具2021/6/2711細(xì)菌分離培養(yǎng)接種法的原理

根據(jù)機械分離作用，在無菌培養(yǎng)基中從混雜的標(biāo)本中分離出所需的單個細(xì)菌生長繁殖所形成的菌落。2021/6/27121、以無菌操作用接種環(huán)取待分離純化的菌液，將菌液點種在平板邊緣一處，取出接種環(huán)，燒去多余的菌種。2、將接種環(huán)再次通過稍打開皿蓋的縫隙（約45度角）伸入平板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環(huán)冷卻,然后從接種有菌的部位在平板上自左向右輕輕劃線。3、劃線時平板面與接種環(huán)面成30-40度角，以手腕力量在平板表面輕巧滑動劃線,線條要平行密集，充分利用平板表面積，注意勿使前后兩條線重疊，劃線完畢，關(guān)上皿蓋.灼燒接種環(huán)。4.用接種環(huán)先將培養(yǎng)物涂布于平板1區(qū)并作數(shù)次劃線,再在2、3……區(qū)依次劃線。5.每劃完一個區(qū)域，均將接種環(huán)滅菌一次，待冷后再劃下一區(qū)域6.每一區(qū)域的劃線均接觸上一區(qū)域的接種線1~2次，使接種量逐漸減少，以獲得單個菌落。其他操作與上述曲線劃線分離法相同。

斜線(分區(qū))劃線分離法2021/6/2713劃線接種注意要點劃線時接種環(huán)與平皿約成30-40度角,輕輕接觸,以腕力在瓊脂表面輕快滑動,不能劃破瓊脂.第一次劃線應(yīng)占平皿面積的1/10,以后每次劃線約占面積的1/4—1/5.劃線為連續(xù)劃線,不能間斷.應(yīng)占滿平皿.劃線不能交叉重復(fù).每次劃完后接種環(huán)應(yīng)滅菌.2021/6/27141、瓊脂斜面接種法菌種：葡萄球菌、大腸埃希菌等普通瓊脂培養(yǎng)物；培養(yǎng)基：斜面固體培養(yǎng)基；用途：擴(kuò)增細(xì)菌、保存菌種；或用于觀察其某些生化特性。純種細(xì)菌接種法2021/6/27152、液體接種法菌種：葡萄球菌或大腸埃希菌、枯草桿菌等普通瓊脂培養(yǎng)物；培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基；接種方法：液體接種法。

從斜面菌種接入液體培養(yǎng)液；從液體培養(yǎng)液接入液體培養(yǎng)液；用途：擴(kuò)增細(xì)菌，用于觀察細(xì)菌的生長特性或測定其生化特性。純種細(xì)菌接種法2021/6/27163、半固體穿種接種法菌種：葡萄球菌、大腸埃希菌等普通瓊脂培養(yǎng)物；培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基接種方法：穿刺接種法。用接種針垂直地穿入培養(yǎng)基中心至底部；然后沿著原接種線將針拔出。用途：檢驗細(xì)菌的運動性或觀察細(xì)菌的生化反應(yīng)。純種細(xì)菌接種法2021/6/2717（1）固體培養(yǎng)基形成菌落和菌苔。觀察菌落的大小、形態(tài)、透明度、顏色、表面和邊緣情況及菌落周圍有無溶血環(huán)等。三.細(xì)菌生長現(xiàn)象觀察（示教）2021/6/2718不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長形成的菌落或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征（形狀、顏色等），可以成為對該微生物進(jìn)行分類、鑒定的重要依據(jù)。2021/6/2719（2）液體培養(yǎng)基均勻混濁生長菌膜形成（專性需氧菌）沉淀生長（多見于鏈狀排列的細(xì)菌）2021/6/2720（3）半固體培養(yǎng)基可用于觀察細(xì)菌有無動力。痢疾志賀菌沿穿刺