DB45T 2577-2022 草地牧草種質(zhì)資源收集與保存技術(shù)規(guī)范

ICS65020.20CCSB0545TechnicalspecificationsforforagegermplasmresourcescollectionandpresIDB45/T2577—2022 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 2前期準(zhǔn)備 2收集對象 2種質(zhì)資源樣本收集 3采樣植株營養(yǎng)成分測定 3樣本圖片資料采集與管理 3樣本標(biāo)本的采集、制作與管理 35保存 4有性繁殖種質(zhì)資源的入庫保存 4無性繁殖資源的入圃保存 56建立信息數(shù)據(jù)庫 5附錄A（資料性）牧草種質(zhì)資源收集與暫存 6附錄B（規(guī)范性）營養(yǎng)成分分析測定 B.1采樣 B.2營養(yǎng)成分分析樣品的制備 B.3檢測項目和測定方法 B.4記錄 附錄C（規(guī)范性）圖片信息采集與管理 C.1圖片采集 C.2圖片管理 附錄D（規(guī)范性）標(biāo)本的采集與制作 D.1標(biāo)本的采集 D.2標(biāo)本制作 DB45/T2577—2022本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并宣貫。本文件由廣西畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本文件起草單位：廣西壯族自治區(qū)畜牧研究所。本文件主要起草人：易顯鳳、陳冬冬、曹樹威、易顯菊、楊啟晟、龐天德、文裕、姚娜、史靜、胡湘云、李創(chuàng)舉。1DB45/T2577—2022草地牧草種質(zhì)資源收集與保存技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了草地牧草種質(zhì)資源收集與保存的過程，包括收集、保存和信息數(shù)據(jù)庫建立三大流程。本文件適用于廣西壯族自治區(qū)行政區(qū)域內(nèi)的草地牧草種質(zhì)資源收集與保存。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T2260中華人民共和國行政區(qū)劃代碼GB/T2930.2牧草種子檢驗規(guī)程凈度GB/T2930.4牧草種子檢驗規(guī)程發(fā)芽率GB/T2930.6草種子檢驗規(guī)程健康測定健康檢驗GB/T2930.8牧草種子檢驗規(guī)程水分測定水分測定GB/T6432飼料中粗蛋白測定方法凱氏定氮法GB/T6433飼料中粗脂肪的測定GB/T6434飼料中粗纖維的含量測定過濾法GB/T6435飼料中水分的測定GB/T6438飼料中粗灰分的測定3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。牧草forage供飼養(yǎng)的牲畜食用的草或其他草本植物。牧草種質(zhì)資源foragegermplasmresources具有特定種質(zhì)或基因，可供牧草育種及相關(guān)研究利用的各種生物類型及品種。草地grassland由草本植物和飼用灌木為主的生物群落及其著生的土地構(gòu)成的生物土地資源，包括天然草原和人工草地。收集collection通過現(xiàn)場采集或引進(jìn)等方法獲取所需的資源。234.3.1采樣原則4.3.2采樣方法野外采集牧草種質(zhì)資源應(yīng)以居群為單位，隨機采樣，每個4.3.3采樣量應(yīng)盡量達(dá)到中期庫和長期庫的保存要求，詳情見表1,如無法達(dá)到，可先采集，后期擴繁再進(jìn)行保存；無性繁殖牧草資源材料一個居群應(yīng)采集30份~50份。4.3.4采樣編號——同一時間、同一地點、同一草種的多份樣本應(yīng)編同——編號格式宜采用“采集日期(8位，年月日)+行政區(qū)劃代碼后兩位(按照GB/T2260的規(guī)定4.3.5填寫原始記錄表——樣本是根莖、根蘗、幼苗的，采樣時要連根帶土，根部放在4DB45/T2577—20225保存有性繁殖種質(zhì)資源的入庫保存5.1.1入庫前處理入庫前應(yīng)對種子進(jìn)行清選、干燥。5.1.2入庫前檢測入庫前應(yīng)對種子進(jìn)行檢測，規(guī)則如下：——凈度檢驗按GB/T2930.2的規(guī)定執(zhí)行；——發(fā)芽率檢驗按GB/T2930.4的規(guī)定執(zhí)行,規(guī)程中沒有提及的草種，按照該屬的發(fā)芽方法進(jìn)行檢驗；——健康檢驗按GB/T2930.6的規(guī)定執(zhí)行；——水分測定按照GB/T2930.8的規(guī)定執(zhí)行。5.1.3入庫保存流程5.1.3.1入庫對象名稱入庫的種質(zhì)資源學(xué)名以《中國植物志》為準(zhǔn)，并標(biāo)注其拉丁名。5.1.3.2入庫登記入庫前檢查種子基本信息資料、種子袋上的編號、對種質(zhì)信息進(jìn)行核對，并按照入庫的數(shù)量和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，登記種質(zhì)的基本信息資料，并填寫入庫登記信息表（見附錄A表A.3）。5.1.3.3查重及去重檢查新獲得種質(zhì)資源與已保存種質(zhì)資源之間是否有重復(fù)。5.1.3.4保存種子數(shù)量要求不同草種類型的保存數(shù)量要求詳見表1。表1種子保存數(shù)量最低要求101～10005DB45/T2577—20225.1.3.5入庫定位對符合入庫條件的種子按照牧草類別進(jìn)行編號，每份材料一個固定的庫位號，包裝后定位保存，填寫種質(zhì)資源庫存信息表（見附錄A的表A.4）。5.1.4庫存種子生活力監(jiān)測5.1.4.1原則定期取出少量種子進(jìn)行測定發(fā)芽率，同時對貯藏種子數(shù)量進(jìn)行檢查，確定是否需要進(jìn)行繁殖更新。5.1.4.2監(jiān)測周期每份種子，中期庫5年取出適量種子進(jìn)行發(fā)芽率測定，長期庫10年取出適量種子進(jìn)行發(fā)芽率測定。5.1.5繁殖更新當(dāng)自花授粉草種和自交系的每份活種子數(shù)量低于600粒，異花授粉草種每份活種子數(shù)量低于800粒時，應(yīng)進(jìn)行繁殖更新。無性繁殖資源的入圃保存5.2.1隔離處理采集的根莖、根蘗、幼苗等無性繁殖資源，應(yīng)消毒、隔離，合格后方可進(jìn)入資源圃種植。5.2.2入圃管理對于無性繁殖材料入圃應(yīng)按如下規(guī)則進(jìn)行：——對種植的牧草種質(zhì)進(jìn)行觀察，包括其適應(yīng)性和生長情況等，并填寫入圃登記信息表（見附錄A的表A.5）?！谫Y源圃平面信息圖上標(biāo)注種質(zhì)的種植位置，標(biāo)明每份種質(zhì)的圃位號、種植時間、保存株數(shù)，并建立采集編號和圃位號對應(yīng)表?！N質(zhì)資源圃每次增減資源都要在圃位圖上進(jìn)行標(biāo)注，同時注明制圖人和審核人的姓名和制圖日期?！糠莘N質(zhì)在資源圃保存數(shù)量不低于3株，珍稀種質(zhì)資源可適當(dāng)增加保存數(shù)量?！N植時對每份種質(zhì)掛牌，牌上標(biāo)注種質(zhì)名稱，編號。5.2.3監(jiān)測與更新保存過程中定期對種質(zhì)存活株數(shù)、植株狀態(tài)、病蟲害及土壤狀況進(jìn)行觀察監(jiān)測，當(dāng)植株數(shù)量減少到原保存量的50％、植株出現(xiàn)顯著地衰老癥狀或遭受嚴(yán)重病蟲危害時應(yīng)進(jìn)行更新復(fù)壯。6建立信息數(shù)據(jù)庫將牧草種質(zhì)資源收集、保存工作中獲取的相關(guān)數(shù)據(jù)資料進(jìn)行整理建檔，包括搜集的資料、工作方案、工作記錄、影像圖片資料、收集信息、保存信息等，同時備份紙質(zhì)檔案和電子檔案，保證檔案資料的連續(xù)性和完整性，便于全過程追溯。6DB45/T2577—2022（資料性）牧草種質(zhì)資源收集與暫存表A.1草地牧草種質(zhì)資源收集物資表12111122227DB45/T2577—2022表A.1草地牧草種質(zhì)資源收集物資表（續(xù)）11111表A.2草地牧草種質(zhì)資源采集原始記錄表采集號：采集生境：1.平地2.谷地3.山坡收獲時期：1.播種期2.出苗期(返青期)3.6.結(jié)實期(綠果期)7.成熟期(果熟豐富程度：1.偶見種2.稀有種3.伴生種4.常見種5.優(yōu)8DB45/T2577—2022表A.3種質(zhì)資源入庫登記信息表表A.4種質(zhì)資源庫存信息表間量9DB45/T2577—2022表A.5入圃登記信息表DB45/T2577—2022（規(guī)范性）營養(yǎng)成分分析測定B.1采樣B.1.1取樣時期根據(jù)取樣時的牧草生長時期進(jìn)行取樣，并在標(biāo)簽上標(biāo)明所處營養(yǎng)生長期、開花期、成熟期或枯黃期等信息。B.1.2取樣部位選取外形、長勢、生育期基本一致的植株，全株取樣時植株處于營養(yǎng)生長期的宜采集主莖或主枝頂部的部分，開花期和成熟期、枯黃期則采取莖稈、籽粒、果實、塊莖、塊根等樣品；現(xiàn)場稱重，記為樣品鮮重。B.1.3取樣量同一樣點，不少于3個位點的植株，鮮樣重不少于500g。B.1.4樣品編號與種質(zhì)資源樣品編號一致（見4.3.4）。B.2營養(yǎng)成分分析樣品的制備營養(yǎng)成分測定時，應(yīng)預(yù)先對分析樣品進(jìn)行處理，處理規(guī)則如下：——用濕布擦凈表面的玷污物，去除泥土、施肥噴藥等污染；——鮮樣應(yīng)105℃殺青15min～30min，然后降至60～70℃烘干12～24h，除盡水分直至恒重時稱重，計算干物質(zhì)含量；——干燥的樣品用磨樣機粉碎，過φ1mm篩，如樣品量少過φ0.1～0.5mm篩，混勻，置廣口瓶中，密封，內(nèi)外均貼簽，保存。B.3檢測項目和測定方法檢測項目和測定方法見表B.1。表B.1營養(yǎng)成分測定方法GB/T6432飼料中粗蛋白測定方法干物質(zhì)粗蛋白粗脂肪粗纖維粗灰分%)DB45/T2577—2022B.4記錄填寫廣西草地牧草種質(zhì)資源營養(yǎng)成分測定表，見表B.2。表B.2草地牧草種質(zhì)資源營養(yǎng)成分測定表干物質(zhì)含量%粗蛋白%粗脂肪%粗纖維%粗灰分%無氮浸出物%DB45/T2577—2022（規(guī)范性）圖片信息采集與管理C.1圖片采集C.1.1生境拍攝使用大景深拍攝方法，使整體環(huán)境清晰覆蓋整個圖片，具體操作應(yīng)遵守以下規(guī)則：——同等焦距下，可通過縮小光圈，增大景深；——使用廣角鏡頭，相同光圈下，焦距越廣，景深越大；——選擇合適的對焦點，達(dá)到最大景深。C.1.2植物主體拍攝拍攝應(yīng)突出植物主體,按以下規(guī)則執(zhí)行：——確定所要拍攝的植物，選擇合適角度進(jìn)行拍攝，使周圍環(huán)境和被攝主體分處不同平面，保持一定的位置差，以達(dá)到突顯主體的目的；——優(yōu)化拍攝的植物環(huán)境，拍攝低矮植物時應(yīng)去除周圍雜物，降低雜物入鏡率；——環(huán)境光控制，對周圍環(huán)境較暗的區(qū)域，通過內(nèi)置曝光補光、提高感光度、增大光圈等手段完成拍攝。C.1.3植物局部拍攝取下所需拍攝的部位，再從周圍環(huán)境中選擇色彩較一致的作為背景，通過點測光、大光圈、長焦端拍攝。C.1.4拍攝要求圖片應(yīng)保證數(shù)量和質(zhì)量，按以下規(guī)則執(zhí)行：——圖片大小應(yīng)大于2M，數(shù)據(jù)格式為jpg；——要客觀反映被攝主體的植物學(xué)特征，從不同的角度對植株分類特性進(jìn)行描述，比如居群、植株、花、果實、種子、葉片、莖干、根系等；——重點拍攝植物分類鑒定的關(guān)鍵部位，比如禾本科的葉舌、葉鞘等，豆科的托葉等；——每個編號下的被攝物種應(yīng)包含體現(xiàn)植株及局部形態(tài)特征的圖片5張以上；珍稀瀕?；蛱赜蟹N要盡可能收集細(xì)部特征照片，增加微距照片或解剖鏡拍攝照片；——每個被調(diào)查草地應(yīng)有3張以上廣角照，每個被調(diào)查草地應(yīng)有3張以上調(diào)查隊集體工作照。C.2圖片管理C.2.1命名與種質(zhì)資源樣品編號一致（見4.3.4）。C.2.2整理保存圖片保存以“當(dāng)次調(diào)查時間+地區(qū)名稱+草地名稱”為名稱建立一級文件夾，如2019年5月4日至7日在廣西龍勝縣南山草地牧草資源的一級文件夾記為“20190504-07廣西龍勝南山草地”，體現(xiàn)DB45/T2577—2022被調(diào)查草地樣貌的廣角照或航拍照和調(diào)查隊集體工作照合并存于一級文件夾中；被調(diào)查草種的圖片以“編號+種名”形式建立二級文件夾保存于一級文件夾之下。DB45/T2577—2022（規(guī)范性）標(biāo)本的采集與制作D.1標(biāo)本的采集D.1.1采集原則每個調(diào)查點，采集草種的標(biāo)本至少采集2～3份，標(biāo)本采集后，如條件允許，應(yīng)立即在野外進(jìn)行干燥，或?qū)?biāo)本放在吸水紙中。D.1.2標(biāo)本材料選取標(biāo)本材料選取的部分應(yīng)遵循以下原則：——標(biāo)本須具有根、莖、葉、花、果等營養(yǎng)器官和生殖器官，雌雄異株的植物，要分別采取雄花枝和雌花枝；——小型一年生草種或具有走莖、球莖、根莖、鱗莖等多年生草種應(yīng)連根部或地下部一起采集；——大型禾草可分段采集，由花序、完整的莖節(jié)、完整的葉片等分段組成，各段統(tǒng)一編相同的號；——受光葉或庇陰葉、老葉、幼葉、二型葉或萌枝等各種發(fā)育階段形態(tài)不同者，均須采集；——木本或灌木類植物標(biāo)本采集大小應(yīng)控制于35～40cm內(nèi)，要求所采標(biāo)本應(yīng)含花序、果實（果莢）及具完整頂端的枝條。D.1.3采集編號與種質(zhì)資源樣品編號一致（見4.3.4）。D.2標(biāo)本制作D.2.1標(biāo)本整理標(biāo)本整理應(yīng)遵循以下原則：——壓制之前先將標(biāo)本的塵土、病斑葉等作潔凈處理；——將莖、葉、花、果展平放置，盡可能避免葉片重疊，如果干燥需很長時間，為避免葉片重疊粘連，可在中間夾一條干燥紙；——至少應(yīng)有一片葉反轉(zhuǎn)過來以便觀察其背面，最好幼葉和老葉各有一片；花的正、反面也都應(yīng)朝上顯示；——若有額外的果實，可把一些縱向切開，另一些橫向切開；若個體過大，則可切成片分開干燥；——大型標(biāo)本可折成“N”字型或“V”字型，使其合于臺紙長度即可；——標(biāo)本葉子太多，可剪除一部分，但應(yīng)保留葉柄，以示其著生的方式；若葉子太大，可對稱的剪除一半，但不可將先端剪除；——標(biāo)本有厚而凹凸不平的地方，可加干燥紙或報紙予以支撐，避免柔嫩的葉子、花瓣可能因受不到擠壓而在干燥過程中起皺褶。DB45/T2577—2022D.2.2標(biāo)本干燥標(biāo)本壓制前3天，宜每天更換干燥的吸水紙1～2次，含水量過高或者大而厚的標(biāo)本增加換紙頻率；標(biāo)本換紙到8～10次，標(biāo)本已基本干燥，可改為隔天換紙，直至標(biāo)本完全干燥為止；換紙時，注意對標(biāo)本繼續(xù)修整，鋪枝展葉，收藏脫落的花果和及時清除霉?fàn)€部位等。D.2.3標(biāo)本裝訂標(biāo)本裝訂應(yīng)遵循以下原則：——標(biāo)本在臺紙上的擺放要最大限度地展示盡可能多的特征，并考慮其的藝術(shù)性，最重要的是將臺紙的左上角和右下角留下空白區(qū)，便于采集簽和鑒定簽的貼放；——大標(biāo)本應(yīng)對角線放置，過長標(biāo)本可進(jìn)行折疊；——修剪過大標(biāo)本時，盡量僅剪去莖干，在不損壞標(biāo)本的前提下，盡可能將叢生植株分開以完整展示個體植株形態(tài)；——展示葉的兩面，只有一片葉的標(biāo)本，切下部分反過來貼在臺紙上或放在紙袋中；——摘除遮蔽花或果的葉片，摘下的葉片放入紙袋中保存；——有