T-LTIA 25-2024 魚肉中孔雀石綠殘留物的快速檢測表面增強拉曼光譜法

ICS67.120.30CCSB50LTIARapiddetectionofmalachitegreenresiduesinfishIT/LTIA25—2024前言 II III 2規(guī)范性引用文件 3術語和定義 4方法原理 5試劑與材料 6儀器和設備 7試樣的制備與保存 7.1試樣的制備 27.2試樣的保存 2 8.1提取 38.2凈化 38.3測定 38.4結果的判定 38.5復檢和確證 39方法的靈敏度和準確性驗證 9.1靈敏度 49.2準確性驗證 410檢測報告 附錄A（資料性）孔雀石綠拉曼光譜示例 A.1孔雀石綠的拉曼光譜 A.2含有不同濃度孔雀石綠的魚肉樣品的表面增強拉曼光譜 參考文獻 IIT/LTIA25—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由深圳市生命科技產(chǎn)學研資聯(lián)盟提出并歸口。本文件起草單位：華測檢測認證集團股份有限公司、江南大學、上海交通大學、深圳華大海洋科技有限公司、深圳市生命科技產(chǎn)學研資聯(lián)盟本文件主要起草人：李家欣、邱險輝、尹麗麗、謝云飛、吳蘊雯、游欣欣、孫瑩瑩、劉文秋、李陶莎、武慶超IIIT/LTIA25—2024孔雀石綠在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中被廣泛用于治療魚類的真菌和寄生蟲感染。然而，由于其潛在的致癌和誘變性，其使用引起了人們的擔憂。攝入孔雀石綠污染的魚可能會導致各種健康問題，包括肝損傷和腫瘤形成。因此，包括歐盟和美國在內的多個國家已經(jīng)禁止或限制了在水產(chǎn)養(yǎng)殖中使用孔雀石綠。盡管有這些規(guī)定，孔雀石綠在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的非法使用仍然是一個持續(xù)的問題，特別是在那些監(jiān)管執(zhí)行可能較弱的發(fā)展中國家?？兹甘G在魚和魚產(chǎn)品中的殘留對消費者健康和環(huán)境構成了重大風險。因此，開發(fā)準確、快速和可靠的檢測方法以確保魚產(chǎn)品的安全并保護公共健康是至關重要的。表面增強拉曼光譜（SERS）是一種先進的分析技術，可以以高靈敏度和選擇性檢測化學化合物的微量。這種方法依賴于通過納米結構表面或納米粒子的存在來增強拉曼散射信號，從而可以檢測到微量濃度的目標物質。在孔雀石綠檢測的背景下，SERS相比傳統(tǒng)的方法，如高效液相色譜（HPLC）和酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA提供了幾個優(yōu)勢。這些優(yōu)點包括更快的分析時間，更高的靈敏度，和更低的檢測限度。此外，SERS可以輕松集成到便攜式設備中，為水產(chǎn)養(yǎng)殖設施現(xiàn)場分析提供了多功能和用戶友好的工具。制定一個使用SERS方法檢測魚類中孔雀石綠殘留的團體標準對于各方面檢測標準的協(xié)調，確保結果的可靠性以及促進全球貿(mào)易是至關重要的。它將為實驗室、監(jiān)管機構和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)提供清晰的指導，從而改善質量控制，提高消費者信心，減少健康風險。此外，采用這個標準將鼓勵進一步的研究和開發(fā)基于SERS的檢測方法，推進監(jiān)測水產(chǎn)養(yǎng)殖及其他領域有害物質的解決方案。本文件的發(fā)布機構提請注意，聲明符合本文件時，可能涉及5.2中相應內容的相關專利的使用。本文件的發(fā)布機構對于該專利的真實性、有效性和范圍無任何立場。該專利持有人已向本文件的發(fā)布機構承諾，愿意同任何申請人在合理且無歧視的條款和條件下，就專利授權許可進行談判。該專利持有人的聲明已在本文件的發(fā)布機構備案。表1中列出的專利權人持有本文件涉及的專利。表1持有本文件涉及的專利的專利權人相關信息專利持有人地址華測檢測認證集團股份有限公司深圳市寶安區(qū)新安街道興東社區(qū)華測檢測大樓江南大學江蘇省無錫市蠡湖大道1800號請注意除上述專利外，本文件的某些內容仍可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。1T/LTIA25—2024魚肉中孔雀石綠殘留物的快速檢測表面增強拉曼光譜法本文件規(guī)定了采用表面增強拉曼光譜法快速測定魚肉中孔雀石綠殘留量的方法。本文件適用于魚肉中孔雀石綠的表面增強拉曼光譜快速篩查檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法GB/T20361-2006水產(chǎn)品中孔雀石綠和結晶紫殘留量的測定高效液相色譜熒光檢測法3術語和定義3.1表面增強劑surfaceenhancer能夠顯著增強吸附在其表面的分子的拉曼散射信號的納米結構材料。3.2空白樣品blanksamples不含目標分析物，且組成及物理化學性質與檢測樣品相同或充分相似的樣品。[來源：GB/T32467-2015，有修改]4方法原理試樣中的孔雀石綠殘留用乙腈提取，經(jīng)中性氧化鋁柱凈化后，用表面增強拉曼檢測儀測定?？兹甘G分子與表面增強劑混合后，目標分子吸附在表面增強納米粒子上從而增強其拉曼散射信號。表面增強拉曼檢測儀可通過自動識別特征峰對孔雀石綠進行定性檢測。5試劑與材料本方法所用水為GB/T6682規(guī)定的三級水。5.1.1乙腈（CH3CN分析純。5.1.2醋酸銨（CH3COONH4分析純。5.1.3無機鹽混凝劑：1mol/L氯化鈉水溶液，或其他相當?shù)臒o機鹽溶液。5.1.4醋酸銨溶液（5mmol/L稱取0.385g醋酸銨，用水溶解，定容至1000mL，現(xiàn)用現(xiàn)配。5.2標準品5.2.1孔雀石綠標準品（CAS569-64-2純度≥99.0%。2T/LTIA25—20245.3標準溶液配制5.3.1孔雀石綠標準儲備溶液（50μg/mL）稱取5.0mg（精確至0.01mg）孔雀石綠標準品于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，-18℃避光保存，有效期3個月。5.3.2孔雀石綠標準中間溶液（0.5μg/mL）吸取1.00mL孔雀石綠標準儲備溶液于100mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，-18℃避光保存，5.3.3孔雀石綠標準工作溶液（5μg/L）吸取1.00mL孔雀石綠標準中間溶液于100mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，現(xiàn)用現(xiàn)配。5.4材料5.4.1表面增強劑：納米金-三聚氰胺海綿[1]，納米金，納米銀，或其他適用。5.4.3有機0.2μm濾膜。6儀器和設備6.1表面增強拉曼光譜儀。6.3離心機：轉速=4000r/min。6.4渦旋儀。6.5勻漿機。6.6超聲波清洗儀。6.7旋轉蒸發(fā)儀。6.8KD濃縮瓶：25mL。7試樣的制備與保存7.1試樣的制備取適量新鮮或解凍的空白或供試組織的可食部分，絞碎，并使均質。a)取均質后的供試樣品，作為供試試樣；b)取均質后的空白樣品，作為空白試樣；7.2試樣的保存-18℃以下保存。3T/LTIA25—20248步驟稱取約5.0g(±0.01g)的試樣于50mL離心管中。加入11mL乙腈，超聲振蕩提取2min，渦旋30s，4000r/min離心5min，將上清液收集到25mL比色管中。殘渣再加乙腈11mL，重復提取一次，合并上清液。用乙腈定容至25mL，混勻備用。8.2凈化移取5.0mL上述提取液至活化的中性氧化鋁柱上，用KD濃縮瓶接收濾液。用4.0mL乙腈清洗中性氧化鋁柱并收集所有濾液。45℃旋轉蒸發(fā)至近干，用乙腈將殘液定容1mL，超聲震蕩5min。加8.3測定8.3.1表面增強拉曼光譜儀參考條件數(shù)據(jù)采集時間≥2s。響應范圍300cm-1~1800cm-1，或大于該響應范圍。8.3.2樣品的測定將待測溶液、表面增強劑和無機鹽混凝劑按5:1:1的比例加入樣品池中，混合后進行拉曼檢測。曝光時間為30s。8.3.3空白試樣的測定稱取5.0g空白試樣，按照8.1和8.2步驟與樣品同法操作，拉曼光譜儀檢測。8.3.4加標試樣的測定稱取5.0g空白試樣于離心管中，加入5mL孔雀石綠標準工作溶液（5.3.3按照8.1和8.2步驟與樣品同法操作，表面增強拉曼光譜儀檢測。8.4結果的判定征拉曼光譜，對樣品中孔雀石綠的含量進行判定。若同時存在上述特征峰且信噪比大于3，則檢測結果判定為陽性。陰性結果代表該樣品中不含有孔雀石綠或濃度低于5.0μg/kg。每批樣品應同時進行空白實驗和加標樣品對照質控實驗，且空白試樣測定結果應為陰性，加標試樣測定結果應為陽性。8.5復檢和確證本方法為初篩方法，若初檢結果為陽性，需要按照8.1和8.2步驟重新檢測；重復檢測結果仍為陽性，需要采用參比方法確證。參比標準為GB/T20361-2006《水產(chǎn)品中孔雀石綠和結晶紫殘留量的測定高效液相色譜熒光檢測法》。當結果判定為陽性時，以參比標準方法確證結果為最終報告值。9方法的靈敏度和準確性驗證4T/LTIA25—20249.1靈敏度該方法中孔雀石綠殘留物的檢出限為5.0μg/kg。9.2準確性驗證在相同條件下進行至少三次連續(xù)的獨立測定，結果為一致。10檢測報告檢測報告應包含以下數(shù)據(jù):——鑒定樣品所需的所有信息；——對本文件的引用；——本文件中未指定或視為可選的任何操作細節(jié)，以及可能影響測試結果的任何事件的細節(jié)；——測試日期；——測試結果。5T/LTIA25—2024孔雀