DB4505T 0009-2023 島礁石斑魚資源養(yǎng)護技術(shù)規(guī)范

4505TechnicalspecificationforrI 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 4 5A.1抽樣 5 5 5 5A.5魚類物種鑒定 5 8本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定廣西精工海洋科技有限公司、湛江市東海島東方實業(yè)有1島礁石斑魚資源養(yǎng)護技術(shù)規(guī)范GB/T12763.9海洋調(diào)查規(guī)范第9部分：海洋生態(tài)調(diào)GB/T18654.2養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢驗第2部分：SC/T9401.4水生生物增殖放流技術(shù)規(guī)程第SC/T9401.6水生生物增殖放流技術(shù)規(guī)程第6部SC/T9401.7水生生物增殖放SC/T9401.11水生生物增殖放流技術(shù)規(guī)程第11部分：投放SC/T9403.5海洋漁業(yè)資源調(diào)查規(guī)范第5部分：SC/T9405.5島礁水域生物資源調(diào)查評估技術(shù)規(guī)范第5部分：礁棲SC/T9405.7島礁水域生物資源調(diào)查評估技術(shù)規(guī)范第7部分SC/T9417.4人工魚礁資源養(yǎng)護效果評價技術(shù)規(guī)范SC/T9417.5人工魚礁資源養(yǎng)護效果評價技術(shù)規(guī)范礁棲石斑魚reef-inhabitingg生物資源養(yǎng)護biologicalresourceconserv24海域選擇4.1養(yǎng)護礁棲石斑魚資源的島礁海域應(yīng)符合國家和地方的國土空間規(guī)劃、旅游規(guī)劃、漁業(yè)發(fā)展規(guī)劃和4.2根據(jù)島礁環(huán)境特點，結(jié)合歷史資料、捕撈生產(chǎn)信息以及資源生態(tài)環(huán)境的本底調(diào)查結(jié)果，針對不同4.3養(yǎng)護海域應(yīng)符合SC/T9401.4的規(guī)定，且滿足下述條件：島礁為巖礁，水流較緩且附近底質(zhì)起伏而又多石礫；溶解氧≥5mg/L,鹽度22～35。5調(diào)查與評估5.1按照SC/T9405.5規(guī)定的方法5.2按照SC/T9417.5規(guī)定的方法和內(nèi)容對擬進行資源養(yǎng)護海域的底質(zhì)和水文狀況等環(huán)境要素進行調(diào)5.3按照GB/T12763.9規(guī)定的方法對擬進行資源養(yǎng)護海域的海洋生物群落結(jié)構(gòu)、海洋生態(tài)系統(tǒng)功能6養(yǎng)護方法6.1魚種選擇根據(jù)目標海域的功能定位和海域環(huán)境，選擇目標海區(qū)及其周邊海區(qū)現(xiàn)有或歷史上存在的石斑魚種鰓棘鱸(Plectropomusleopardus)為目標種類。b)性腺發(fā)育良好、雌性親魚腹部膨大且柔軟，輕壓雄性親魚腹部能流出乳白色精液；c)反應(yīng)靈敏、活力好。36.3苗種投放培育苗種的親魚應(yīng)捕自天然海區(qū)或是原種場保種的原生種繁殖的F1代，不得使用近親繁殖親魚的8效果評估8.1環(huán)境要素按照本文件5.2中環(huán)境要素的調(diào)查和評估方法對石斑魚資源養(yǎng)護海域的底8.2生物要素8.3生態(tài)壓力按照本文件5.3中的評估方法對石斑魚資源養(yǎng)護海域的海洋生物群落結(jié)構(gòu)8.4漁業(yè)生產(chǎn)要素按照SC/T9405.7規(guī)定的方法對各類作業(yè)的努力量、漁4應(yīng)定期巡查石斑魚資源養(yǎng)護海域，防止非法捕撈養(yǎng)護區(qū)的石5積物處取1L海水，重復(fù)取樣3次，1L去離子水作為對照。A.3保藏A.5魚類物種鑒定A.5.1用于魚類鑒定的條形碼用于魚類屬、種鑒定的條形碼為12SrRNA基因，片段長度為163bp～18MiFish-U-F：5’-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTNNNNNNGTCGGTAAAACTCGTGCCAGC-3’MiFish-U-R：5’-GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTNNNNNNCATAGTGGGGTATCTAATCCCAGTTTG-3’在上述兩條引物中，前面的33個和34個核苷酸（nt）部分為高通量測序引物的結(jié)合位點，隨后的6個隨機引物（NNNNNN，如AAGGTT）用于促進測序平臺流動池（flowcell）DNA簇的分離，最后的21個和5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAXXXXXXXXACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATXXXXXXXXGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT-3’在上述兩條引物中，8個連續(xù)X堿基代表Illumila測序技術(shù)通用的Index序列，可以用于區(qū)分不同樣連續(xù)X堿基后面的3’端序列是Illumila測6延伸15s，共30個循環(huán)；72℃再延伸5min。將第一輪PCR產(chǎn)物稀釋10倍作為第二輪PCR模板，PCR體系的A.5.5測序A.5.6石斑魚屬、種鑒定A.5.6.1序列聚類采用生物信息學(xué)軟件FastQC、Cutadapt和USEARCH，對原始測序數(shù)據(jù)質(zhì)量進行分析并去除低質(zhì)量數(shù)據(jù)。采用QIIME2分析軟件，在97％的序列相似水平下，對高質(zhì)量的eDNA測序序列數(shù)據(jù)進行聚類，去A.5.6.2物種注釋通過序列比對方法，將所有的分類單元數(shù)據(jù)與已知物種的核糖體RNA序列數(shù)據(jù)庫進行序列比對，從A.5.6.3分類鑒定A.5.7特定石斑魚屬、種的相對豐度計算A.5.7.1特定石斑魚屬的相對豐度為特定石斑魚屬序列條數(shù)占全部魚類序列條數(shù)的百分比，計算見公=(?)×100%······································Rg——特定石斑魚屬相對豐度，用％表示；7A.5.7.2特定石斑魚種的相對豐度為特定石斑魚種序列條數(shù)占全部魚類序列條數(shù)的百分比，計算見公=(?)×100%·····························································(A.2)Rs——特定石斑魚種相