DB51T 1544-2012 水稻二化螟抗藥性測(cè)定技術(shù)規(guī)程

DB51/T1544—2012水稻二化螟抗藥性測(cè)定技術(shù)規(guī)程2012-1四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布前言 1 3術(shù)語(yǔ)和定義 1 25試劑和材料 2 2 3 410抗藥性水平評(píng)估 附錄A(資料性附錄)水稻二化螟抗藥性測(cè)定數(shù)據(jù)原始報(bào)表 6IDB51/XXXXX-2012本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則進(jìn)行編寫(xiě)。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省農(nóng)業(yè)廳提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省農(nóng)業(yè)廳植物保護(hù)站負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：彭麗年、廖華明、羅林明、張偉、曾偉、余文海、伍亞瓊、王黎明、文剛。1DB51/XXXXX-2012本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了毛細(xì)管微量點(diǎn)滴法測(cè)定水稻二化螟對(duì)殺蟲(chóng)劑的抗藥性的基本方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于水稻二化螟對(duì)以觸殺作用為主要作用方式的常用殺蟲(chóng)劑的抗藥性測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T15792-2009水稻二化螟測(cè)報(bào)調(diào)查規(guī)范GB/T農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)規(guī)范3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1指昆蟲(chóng)能忍受殺死正常種群大部分個(gè)體的殺蟲(chóng)劑藥量的能力，并在種群中逐漸發(fā)展。點(diǎn)滴法(Topicalapplication)又稱(chēng)局部施藥法，是一種用微量點(diǎn)滴器將藥液滴于昆蟲(chóng)特定部位的定量處理方法。3.3指溶質(zhì)質(zhì)量與溶液質(zhì)量之比(百分比)。指藥劑損害生物體的能力，即藥劑對(duì)靶標(biāo)生物的毒性。是在嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)控制條件下，藥劑對(duì)生物毒性的量度指標(biāo)，一般用反應(yīng)中值如LD?等表示。3.5指在觀察時(shí)間內(nèi)，藥劑殺死種群(供試目標(biāo)昆蟲(chóng))50%時(shí)所需要的藥劑劑量(μg/頭或μg/g)。2DB51/XXXXX-2012在未接觸過(guò)某種藥劑的地區(qū)采集或在室內(nèi)經(jīng)多代隔離飼養(yǎng)獲得的群體。4儀器設(shè)備養(yǎng)蟲(chóng)室，光照培養(yǎng)箱或人工氣候箱，毛細(xì)管微量點(diǎn)滴器(容積0.03μL～0.05μL),增濕器，電子天平(感量0.1mg),玻璃儀器：容量瓶(10mL、25mL、50mL),稱(chēng)量瓶，移液管或加液器，燒杯，培養(yǎng)皿(直徑5cm、高1.2cm),廣口瓶(直徑8～10cm、高10～15cm)和溫濕度計(jì)等。待測(cè)試的農(nóng)藥原藥，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥90%。溶劑為丙酮：A·R。5.2試蟲(chóng)6試蟲(chóng)準(zhǔn)備6.1.1田間直接采集卵塊。在水稻二化螟田間成蛾高發(fā)期后3~5天，選擇當(dāng)?shù)赜写硇缘奈词┧幍咎?塊，每塊田隨機(jī)采集二化螟卵塊20～40塊，共采集100～200卵塊。6.1.2誘集成蟲(chóng)產(chǎn)卵。白天在稻田用捕蟲(chóng)網(wǎng)等工具捕捉成蟲(chóng)或夜晚在燈下誘集成蟲(chóng)300～400頭，供室6.2幼蟲(chóng)飼養(yǎng)6.2.1水稻苗準(zhǔn)備。取一定量水稻種子在適宜的溫度下(28±1℃)浸種2天、催芽1天，待發(fā)芽狀態(tài)基本一致時(shí)播入直徑8~10cm、高度10～15cm的玻璃或塑料廣口瓶中，每瓶播5～10g種子，瓶口封上一層保鮮膜并扎少量透氣孔，置于適宜的溫度下(28±1℃)培養(yǎng)，待稻苗長(zhǎng)至5～6cm時(shí)備用。6.2.2幼蟲(chóng)飼養(yǎng)。將田間采集的卵塊放置于準(zhǔn)備好的栽有稻苗的玻璃廣口瓶中，每瓶放1~2個(gè)卵塊，置于28±1℃、相對(duì)濕度(RH)75%～85%的養(yǎng)蟲(chóng)室或光照培養(yǎng)箱，每毛筆將幼蟲(chóng)轉(zhuǎn)移到另外的長(zhǎng)好稻苗的廣口瓶中。當(dāng)幼蟲(chóng)長(zhǎng)到4齡時(shí)，選取體重范圍在6～9mg的健康幼7.1母液配制稱(chēng)取一定的原藥(精確至0.0001g),置于容量瓶中，用丙酮溶解稀釋至刻度定容，搖勻備用。3在16%～84%的試蟲(chóng)死亡的藥量范圍內(nèi)，按照等比或等差級(jí)數(shù)設(shè)置5～7個(gè)系列質(zhì)量濃度，使藥量跨越中值的兩側(cè)。藥量間的死亡百分率應(yīng)比較均勻，如果差異太大，可不按等比或等差數(shù)列，抽去或插入適7.3計(jì)算方法7.3.1原藥取用量X?(g)按式(1)計(jì)算。X——原藥取用量，單位g;P—原藥質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位%。7.3.2供試藥液質(zhì)量濃度X?(μg/mL)按式(2)計(jì)算。X?——供試藥液質(zhì)量濃度，單位μg/mL;A—稀釋倍數(shù)。7.3.3每頭蟲(chóng)受藥量X?(μg/頭)按式(3)計(jì)算：………(3)V——點(diǎn)滴量，單位μLX——供試藥液質(zhì)量濃度，單位μg/mL8藥劑處理方法8.1處理方法采用毛細(xì)管微量點(diǎn)滴法。毛細(xì)管體積為0.03μL～0.05μL。選擇健康4齡二化螟幼蟲(chóng)，用毛筆挑起放在濾紙上，每張放5頭，用干凈的毛細(xì)管微量點(diǎn)滴器將藥液定量點(diǎn)滴在供試幼蟲(chóng)胸背上，點(diǎn)滴時(shí)毛細(xì)管應(yīng)盡量貼近蟲(chóng)體再擠出液滴，以丙酮液作為對(duì)照。先點(diǎn)滴對(duì)照丙酮液，再由低濃度向高濃度逐一點(diǎn)滴藥劑處理。將處理后的幼蟲(chóng)用毛筆輕輕掃入裝有水稻葉的培養(yǎng)阻內(nèi)，每皿放5頭，每個(gè)濃度設(shè)6次重復(fù)，共處理30頭幼蟲(chóng)。培養(yǎng)皿底部放置濕潤(rùn)濾紙保濕，加蓋放好，置于溫度(T)28±1℃,相對(duì)濕度(RH)75%～85%,光周期為L(zhǎng):D=16:8h的條件下飼養(yǎng)并觀察。8.2結(jié)果檢查根據(jù)不同藥劑設(shè)置檢查時(shí)間。死亡判斷標(biāo)準(zhǔn)是以毛筆輕觸蟲(chóng)體，蟲(chóng)體完全不動(dòng)即為死亡。檢查試蟲(chóng)死亡情況，記錄總蟲(chóng)數(shù)和死蟲(chóng)數(shù)。48.2.1處理后48h。檢查有機(jī)磷酸酯、氨基甲酸酯、擬除蟲(chóng)菊酯、有機(jī)氯等類(lèi)殺蟲(chóng)劑的結(jié)果。8.2.2處理后72h。檢查大環(huán)內(nèi)酷類(lèi)和苯基吡唑類(lèi)殺蟲(chóng)劑的結(jié)果。8.2.3處理后96h。檢查沙蠶毒素類(lèi)殺蟲(chóng)劑的結(jié)果。8.2.4處理后120h。檢查昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑類(lèi)殺蟲(chóng)劑的結(jié)果。9數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法9.1計(jì)算校正死亡率處理組死亡率X(%)用式(4)計(jì)算：P——死亡率，單位為百分率(%);N—表示處理總蟲(chóng)數(shù)，單位為頭。校正死亡率X?(%)用式(5)計(jì)算：P——處理組校正死亡率，單位為百分?jǐn)?shù)(%);P——處理組死亡率，單位為百分?jǐn)?shù)(%);Po對(duì)照組死亡率，單位為百分?jǐn)?shù)(%)。若對(duì)照死亡率<5%,無(wú)需校正；對(duì)照死亡率在5%～20%之間，應(yīng)按公式(5)進(jìn)行校正；對(duì)照死亡率>20%,試驗(yàn)需重做。9.2數(shù)據(jù)處理和分析 (Y=a+bx)、LDs值(ug/頭)、95%置信限、b值及其標(biāo)準(zhǔn)誤。用t測(cè)驗(yàn)確定兩種藥劑的有效中量差異是否顯著.當(dāng)t>1.96,則表明兩種藥劑的有效中量差異顯著;相反，當(dāng)t<1.96,差異不顯著。10抗藥性水平評(píng)估10.1抗性倍數(shù)計(jì)算抗藥性的確定采用比較群體對(duì)藥劑的敏感度(反應(yīng)中值即致死中量LDso值)的方法，求出抗性倍數(shù)，按式(6)計(jì)算。小數(shù)點(diǎn)后保留一位數(shù)。10.2抗性水平分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)抗性水平分級(jí)抗性倍數(shù)敏感≤3倍敏感性下降3.1~5倍低水平抗性5.1~10倍中等水平抗性10.1~40倍高水平抗性40.1~160倍極高水平抗性>160倍10.3抗性水平評(píng)估按照抗性水平的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)測(cè)試種群的抗性水平作出評(píng)估。11數(shù)據(jù)保存將測(cè)定的所有原始數(shù)據(jù)及計(jì)算結(jié)果按時(shí)間、地點(diǎn)建立檔案，長(zhǎng)期保存。水稻二化螟抗藥性測(cè)定數(shù)據(jù)原始報(bào)表見(jiàn)附錄A(資料性附錄)。56(資料性附錄)水稻二化螟抗藥性測(cè)定數(shù)據(jù)原始報(bào)表試蟲(chóng)學(xué)名：采蟲(chóng)地點(diǎn)：采蟲(chóng)時(shí)間：飼養(yǎng)代數(shù)：試蟲(chóng)齡期：寄主作物：測(cè)定藥劑：藥劑含