DB51T3216-2024人牙來源間充質(zhì)干細(xì)胞質(zhì)量規(guī)范

ICS07.080CCSICS07.080CCSC04四 川 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB51/T3216—2024人牙來源間充質(zhì)干細(xì)胞質(zhì)量規(guī)范20242024120320241229四川省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布目 次前言 II112范引文件 13語定義 14略語 15量范 26測(cè)法 47驗(yàn)則 68棄處理 6參考獻(xiàn) 7前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。人牙來源間充質(zhì)干細(xì)胞質(zhì)量規(guī)范范圍本文件適用于人牙來源間充質(zhì)干細(xì)胞的制備、檢測(cè)和質(zhì)量控制。（GB/T40365-2021細(xì)胞無菌檢測(cè)通則下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1人牙來源間充質(zhì)干細(xì)胞humandental-derivedmesenchymalstemcells從人不同發(fā)育階段牙齒組織或其附屬組織中分離的間充質(zhì)干細(xì)胞，包括牙髓干細(xì)胞、牙周膜干細(xì)胞、牙囊干細(xì)胞、脫落乳牙干細(xì)胞、根尖牙乳頭干細(xì)胞等，貼壁生長(zhǎng)后呈成纖維細(xì)胞樣形態(tài)，可自我更新，并具有成骨分化、成脂分化及成神經(jīng)分化能力的干細(xì)胞。3.2原材料rawandprocessedmaterial3.3輔助材料accessorymaterial縮略語下列縮略語適用于本文件。EBV（Epstein-BarrVirus）HBV（HepatitisBVirus）HCMV（HumanCytomegalovirus）HCV（HepatitisCVirus）HIV：人類免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus）HTLV：人類嗜T細(xì)胞病毒（HumanT-lymphotropicVirus）STR：短串聯(lián)重復(fù)序列（ShortTandemRepeat）TP：梅毒螺旋體（TreponemaPallidum）SOP：標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（StandardOperatingProcedure）（供者應(yīng)篩查HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP，并記錄保存結(jié)果。CD105CD73HLA-DR2未經(jīng)凍存的細(xì)胞存活率≥90%，凍存后復(fù)蘇的細(xì)胞存活率≥80%。IFNγTNα3-（I與TTIFN-γ、TNF-α人牙來源間充質(zhì)干細(xì)胞具有成骨、成脂、成神經(jīng)分化能力。成瘤性人牙來源間充質(zhì)干細(xì)胞在免疫缺陷小鼠體內(nèi)成瘤試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)為陰性。46XX或46單一供者來源的細(xì)胞各代次及批次細(xì)胞短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）檢測(cè)結(jié)果應(yīng)保持一致。人牙來源間充質(zhì)干細(xì)胞與人總淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)，不會(huì)導(dǎo)致淋巴細(xì)胞異常增殖和細(xì)胞因子的異常釋放。微生物HBVHCVHTLVEBVHCMVTPEU/mL2℃～10℃202℃～1012202℃～1012202020-150196℃2℃～10℃條件下運(yùn)輸。6檢測(cè)方法采用倒置顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)檢測(cè)。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)人牙來源間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白。采用臺(tái)盼藍(lán)拒染法或活/死細(xì)胞染色(CalceinAM,PI法)進(jìn)行細(xì)胞存活率測(cè)定。（IFN-γ2,3（IDO）6.4.2TTIFN-γTNF-α體外利用成骨分化定向誘導(dǎo)培養(yǎng)條件培養(yǎng)14至28天后，采用茜素紅S染色法鑒定細(xì)胞成骨分化能力。體外利用成脂分化定向誘導(dǎo)培養(yǎng)條件培養(yǎng)14至28天后，采用油紅O染色法鑒定細(xì)胞成脂分化能力。體外利用成神經(jīng)分化定向誘導(dǎo)培養(yǎng)條件培養(yǎng)5至10天后，采用免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)元標(biāo)志蛋白的表達(dá)，鑒定細(xì)胞成神經(jīng)分化能力。SCID鼠12染色體核型采用G帶分析法進(jìn)行測(cè)定。采用基于PCR的STR指紋圖譜檢測(cè)法進(jìn)行短串聯(lián)重復(fù)序列檢測(cè)。采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)于活化的人總淋巴細(xì)胞的增殖和對(duì)不同淋巴細(xì)胞亞群增殖能力的影響；采用ELISA技術(shù)對(duì)淋巴細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子（TNF-α）分泌的影響。（通則1101）通則1101））中HIV、HBVHCV、HTLV、EBV、HCMV）對(duì)TP每批次細(xì)胞進(jìn)行出庫(kù)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)項(xiàng)目包括5.2中規(guī)定的所有項(xiàng)目，并附簽字蓋章的檢驗(yàn)報(bào)告。7.3復(fù)核檢驗(yàn)7.3復(fù)核檢驗(yàn)8廢棄物處理理制度