親和層析法純化蛋白質(zhì)虛擬仿真軟件操作手冊(cè)

親和層析法純化蛋白質(zhì)虛擬仿真軟

件操作手冊(cè)

(VI.0)

目錄

1.背景概述1

2.系統(tǒng)登錄1

3.實(shí)驗(yàn)介紹模塊2

4.實(shí)驗(yàn)操作模塊5

5.實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)模塊錯(cuò)誤!未定義書(shū)簽。

6.實(shí)驗(yàn)報(bào)告模塊19

1.背景概述

“親和層析法純化蛋白質(zhì)虛擬仿真實(shí)驗(yàn)”，是基于嘉興學(xué)院核心課程進(jìn)行設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)虛擬

仿真軟件。在專(zhuān)業(yè)建設(shè)方面，由于進(jìn)口層析設(shè)備費(fèi)用昂貴，維護(hù)困難等原因。本著“以虛補(bǔ)

實(shí)”的教學(xué)宗旨，故針對(duì)親和層析法純化蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行仿真開(kāi)發(fā)。仿真軟件不僅彌補(bǔ)了教

學(xué)方面的缺失，也同M滿(mǎn)足了學(xué)生隨時(shí)隨地的進(jìn)行操作實(shí)習(xí)的需求，而不再受困于場(chǎng)地和設(shè)

備的局限。也豐富了老師的教學(xué)手段，為人才目標(biāo)的實(shí)現(xiàn)起到了保駕護(hù)航的作用！

2.系統(tǒng)登錄

>在文件夾或者桌面雙擊軟件程序圖標(biāo)e打開(kāi)進(jìn)入系統(tǒng)界面；

>在系統(tǒng)登錄界面輸入對(duì)應(yīng)賬號(hào)（admin）和密碼（123456）.點(diǎn)擊登錄系統(tǒng).

>系統(tǒng)登錄成功后將直接跳轉(zhuǎn)到軟件模塊登錄接口界面（若無(wú)法進(jìn)入該界面或無(wú)法登陸等

情況請(qǐng)于技術(shù)人員聯(lián)系）；登陸成功界面如圖所示:

3.實(shí)驗(yàn)介紹模塊

實(shí)驗(yàn)介紹模塊包括：實(shí)驗(yàn)原理、親和層析的特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案、實(shí)驗(yàn)設(shè)備介紹

等內(nèi)容。

>點(diǎn)擊進(jìn)入實(shí)驗(yàn)介紹模塊后，如圖所示:

?余蒯層新法紈化券白質(zhì)虛擬傷日實(shí)強(qiáng)

?>實(shí)弱原理

親和層析是利用生物大分子所具有的專(zhuān)一親和力而設(shè)計(jì)的純化技術(shù)。6個(gè)組氨

酸殘基組合的融合標(biāo)簽（His-tag）在原核蛋白表達(dá)中的應(yīng)用最為顯著。His-tag可

結(jié)合在目的蛋白的C末端或N末端，形成特殊的結(jié)構(gòu)，使之與金屬離子發(fā)生相互作

用，從而對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行親和純化。

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>點(diǎn)擊》后進(jìn)行下一頁(yè)查看，如圖所示:

?裁JQM恁純化屆8*&?(仿真實(shí)紿

?親加層IK法純化貨白質(zhì)虛擬侑真實(shí)相

?)避和居所的特點(diǎn)

親合層析具有配體簡(jiǎn)單、吸附量大、分離條件溫和、通用性強(qiáng)等特點(diǎn)，所以可

選擇范圍廣，高鹽，存在變性劑以及去垢劑的上樣條件下進(jìn)行純化，His-Tag正漸

成為分離純化蛋白質(zhì)最有效的技術(shù)之一。His-tag作為蛋白純化時(shí)的首選標(biāo)簽，其

優(yōu)勢(shì)在于：

1.N-端的His-Tag與細(xì)菌的轉(zhuǎn)錄翻譯機(jī)制兼容，有利于蛋白表達(dá)；?

2.His-tag對(duì)目的蛋白本身特性幾乎沒(méi)有影響，不會(huì)改變目的蛋白本身的可溶性和

生物學(xué)功能；

3.His?tag非常小，在融合蛋白結(jié)晶后對(duì)蛋白的結(jié)構(gòu)沒(méi)有影響；His-tag的免疫原性

相對(duì)較低，可將純化的蛋白直接注射入動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行免疫并制備抗體；

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a他%化明日質(zhì)總擬仿x實(shí)蛉

?親和層新法純化尖門(mén)皈成收仿門(mén)賽推(§)

?＞益和居所的特點(diǎn).

4.與其它親和標(biāo)簽構(gòu)建成雙親和標(biāo)簽，并可應(yīng)用于多種表達(dá)系統(tǒng)；

His-tag融合蛋白的適用范圍也較廣，既可以在非離子型表面活性劑存在的條件下

/純化,也可以在變性條件下進(jìn)行純化。前者通常用來(lái)純化疏水性強(qiáng)的目的蛋白，＞

X而后者則通常純化包涵體蛋白。'

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?裁JQM恁純化屆8*&?（仿真實(shí)紿

Q親陽(yáng)層新法純化罷白質(zhì)虛取俏真煲陽(yáng)

?>］實(shí)典常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

蛋白不吸附:是本實(shí)驗(yàn)最常見(jiàn)的問(wèn)題，通常的原因有

①是標(biāo)簽不暴露，被折疊在蛋白的結(jié)構(gòu)內(nèi)，可以在變性的條件下去純化，

②可以選擇作用力更強(qiáng)，配基密度更高的填料

③樣品的pH過(guò)低或者沉淀導(dǎo)致不能吸附，所以樣品和緩沖液的pH要盡量一致，避免沉淀。

④加吐溫可以可以降低表面張力，同時(shí)也可以降低疏水相互作用力了，使蛋白不會(huì)因?yàn)閯e

的作用力而被吸附到柱子上，同時(shí)增強(qiáng)了洗脫能力。

⑤緩沖液條件不正確，檢查漂洗緩沖液的pH值和組成，逸保體系中不含鰲合劑及還原劑。

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PDF文檔

A查看至實(shí)驗(yàn)設(shè)名介紹，點(diǎn)擊1―，依次單擊查看相關(guān)PDF文檔。

G）京融展值恁純化屆8*1??仿真實(shí)紿

>視頻操作內(nèi)容點(diǎn)擊"，進(jìn)行視須觀看及暫停:

?裁JQM恁純化屆8*&?（仿真實(shí)紿

4.實(shí)驗(yàn)操作模塊

實(shí)驗(yàn)操作內(nèi)容主要由層析實(shí)驗(yàn)、電泳實(shí)驗(yàn)兩部分組成。

>在軟件主界面單擊實(shí)驗(yàn)操作按鈕，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)操作模塊:

<法娓化值白質(zhì)感犯仿亶實(shí)驗(yàn)-X

>實(shí)現(xiàn)操作引導(dǎo)如下圖所示示:

X

I操作幫助向前移動(dòng)

按下井拖拽

點(diǎn)擊物品控制方向

Esc退出場(chǎng)景進(jìn)行操作

W

Tab切換人稱(chēng)視角

ASD

向左移動(dòng)

向后移動(dòng)向右移動(dòng)

Ctrl第一人稱(chēng)視角蹲下

1.通過(guò)鍵盤(pán)w、A、S、D鍵進(jìn)行對(duì)應(yīng)的前、左、后、右方向的移動(dòng)操作；Tab鍵可進(jìn)行

第一人稱(chēng)與第三人稱(chēng)切換；Ctrl鍵在第一《孚華軍可以蹲下，降低視角。

2.按住鼠標(biāo)右鍵，上下左右拖動(dòng)，可進(jìn)行視角的修正；按住鼠標(biāo)左鍵可進(jìn)行觸發(fā)操作。

3.工具欄：實(shí)騏步驟中涉及清洗工具、物料桶、其他輔助設(shè)備均在工具欄獲取

4.全屏模式：界面右下角箭頭按鈕或快捷鍵P可切換至全屏，獲得最好體驗(yàn)

根據(jù)左下角步驟提示和實(shí)時(shí)箭頭引導(dǎo)，進(jìn)行交互操作，鼠標(biāo)右鍵為功能觸發(fā)健，左鍵為

功能執(zhí)行鍵:

根據(jù)引導(dǎo)完成樣品的準(zhǔn)備工作。

司裁依的恁純化酉8**1?仿真實(shí)紿

>上樣前進(jìn)行開(kāi)機(jī)、裝柱、裝緩沖液。

01》c?m?化*6J8dtKi仿xg

親MM折去純化H

>根據(jù)理論教學(xué)內(nèi)容填寫(xiě)正確的洗脫液組分:

>按照引導(dǎo)文字進(jìn)行上樣處理。

0SfttsmwitsaesjMiffijistt-x

>學(xué)習(xí)查看相關(guān)知識(shí)點(diǎn)。

>學(xué)習(xí)親和層析原理:

>查看親和層析圖譜:

?例CU?f法埼化HI白質(zhì)組QSH宓總-X

>正確填寫(xiě)電泳樣品的成分比例;

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>電泳樣品的配置:

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■

>電泳上樣:

<3

>安裝電泳儀:

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>調(diào)節(jié)電壓開(kāi)始電泳:

>拆洗電泳板:

>剝離電泳膠:

>染色處理:

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>搖床染色2小時(shí):

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>染色液回收:

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>脫色40min處理:

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4

>杳看條帶:

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5.實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)模塊

實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)模塊主要由實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)試題組成。

>在軟件主界面單擊實(shí)驗(yàn)操作按鈕，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)模塊:

>試題由單選、多選題組成，在選擇答案后進(jìn)行提交:

6.實(shí)驗(yàn)報(bào)告模塊:

實(shí)驗(yàn)報(bào)告模塊主要統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)中