《三種消毒劑對大腸桿菌抑菌效果的影響研究》10000字（論文）

三種消毒劑對大腸桿菌抑菌效果的影響研究目錄TOC\o"1-3"\h\u29538摘要 第3章結(jié)果與討論3.1病原菌最小殺菌濃度結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果表明，84消毒劑在350mg/L的濃度下，菌數(shù)多不可計(jì)，在450mg/L、550mg/L濃度下，菌數(shù)為0cfu；新潔爾滅在400mg/L的濃度下，菌數(shù)多不可計(jì)，在500mg/L、600mg/L濃度下，菌數(shù)為0cfu；乙醇在65%的濃度下，菌數(shù)多不可計(jì)，在70%、75%濃度下，菌數(shù)為0cfu。如表所示。表2第1組實(shí)驗(yàn)菌懸液+消毒劑品類稀釋濃度各組平均回收菌屬（cfu/ml）第1次第2次第3次84消毒劑550mg/Laaa450mg/L000350mg/L000新潔爾滅400mg/Laaa500mg/L000600mg/L000乙醇65%aaa70%00075%000注:a表示多不可記，表3第2組實(shí)驗(yàn)菌懸液+LB肉湯品類各組平均回收菌數(shù)（cfu/mL）第1次第2次第3次菌懸液+LB肉湯aaa注:a表示多不可記表4第3組實(shí)驗(yàn)LB肉湯品類各組平均回收菌數(shù)（cfu/mL）第1次第2次第3次LB肉湯0003.2中和劑鑒定試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明，第1組平均生長菌落數(shù)為0cfiu/mL，第2組平均生長菌落為2.56x102cfu/mL、2.34x102cfu/mL和1.98x102cfu/mL,第3、4、5組3組間誤差率分別為3.86%、2.67%和3.87%，如表5所示。表5中和劑鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果編號各組平均回收菌屬（cfu/ml）123456新潔爾滅02564.5×1074.03×1074.23×10708402343.8×1073.62×1073.54×1070乙醇01983.32×1073.19×1072.98×1070注：①84消毒劑：450

mg/L84消毒劑（1:98倍稀釋）；②新潔爾滅：500

mg/L新潔爾滅消毒劑（1:54倍稀釋）；③乙醇：70%乙醇3.3懸液定量殺菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，新潔爾滅和70%乙醇對大腸桿菌殺滅效果較好，在1.5min時(shí)即可對大腸桿菌殺滅率達(dá)到100%。；84消毒劑對大腸桿菌殺滅效果最差，0.5min、1min、1.5min、2min均不能完全殺滅大腸桿菌，直至3min時(shí)才完全殺滅，總體殺菌效果比其他2種消毒劑差。如表6所示。表6菌懸液定量殺菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果消毒劑品種作用不同時(shí)間菌落總數(shù)（每100μL）0.5min1min1.5min2min3min84aaa1380新潔爾滅a130000乙醇a231000注：①84消毒劑：450

mg/L84消毒劑（1:98倍稀釋）；②新潔爾滅：500

mg/L新潔爾滅消毒劑（1:54倍稀釋）；③乙醇：70%乙醇；a表示多不可記。3.4分析與討論表2分析：在菌懸液為1×106cfu/mL加入84消毒劑，其最小殺菌濃度為450mg/L；加入新潔爾滅其最小的殺菌濃度為500mg/L；加入乙醇其最小的殺菌濃度為70%。由此可選取出最適宜的消毒劑濃度84消毒劑450mg/L、新潔爾滅500mg/L和70%乙醇，如表2所示。表3分析：菌懸液+LB肉湯，三組實(shí)驗(yàn)都長出大量的菌株。證明大腸桿菌懸液在LB培養(yǎng)基中能夠良好的生長，如表3所示。表4分析：LB肉湯中不含有微生物，不會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如表4所示。表5分析，第1組平均生長菌落數(shù)為0cfiu/mL，第2組平均生長菌落為2.56x102cfu/mL、2.34x102cfu/mL和1.98x102cfu/mL,第3、4、5組3組間誤差率分別為3.86%、2.67%和3.87%，因此，含3g/L卵磷脂，30g/L吐溫-80的磷酸緩沖溶液(PBS)能有效的中止500mg/L新潔爾滅、70%乙醇?xì)埩舳拘?。?g/L硫代硫酸鈉，10g/L吐溫-80的磷酸緩沖溶液(PBS)能有效的中止450mg/L含氯消毒劑（84消毒劑）的殘留毒性，中和劑及中和產(chǎn)物對試驗(yàn)菌和培養(yǎng)基均無不良影響，可作為本研究用于細(xì)菌定量殺菌試驗(yàn)的中和劑。如表5所示。表6分析，新潔爾滅和70%乙醇對大腸桿菌殺滅效果較好，在1.5min時(shí)即可對大腸桿菌殺滅率達(dá)到100%。；84消毒劑對大腸桿菌殺滅效果最差，0.5min、1min、1.5min、2min均不能完全殺滅大腸桿菌，直至3min時(shí)才完全殺滅，總體殺菌效果比其他2種消毒劑差。如表6所示。大腸桿菌是日常生活中隨處可見的一種微生物，與我們的生活密切相關(guān)，它同時(shí)也對我們的生活有很大的影響，在我們的日常生活中，大腸桿菌的作用也越來越重要。但怎樣消滅大腸桿菌也是非常重要的，我們在加大對它進(jìn)行科學(xué)的研究，采取十分必要的防護(hù)措施，從而使它對人類及其他生物的危害減小。它與人類的活動(dòng)密切相關(guān)，在人類的生產(chǎn)生活中充當(dāng)著重要的角色，但其中不乏對人類有危害的種類。豬源腸外致病性大腸桿菌能夠引起豬的腎炎、肺炎、敗血癥以及腦膜炎等癥狀[28];同時(shí)也造成對年紀(jì)非常小的孩子影響很大；從另一個(gè)角度來看，食品安全中很大一部分的負(fù)面效應(yīng)是大腸桿菌這種病菌所引起的。在人們的日常飲食中，隨處可以看到豬肉的影子，人們在日常飲食中幾乎離不開它，但是大腸桿菌一旦侵入到豬身上會發(fā)生發(fā)一系列的疾病，如果沒有經(jīng)過嚴(yán)格處理的話，那么這些病豬就很有可能會流入市場，豬身上的疾病就會成為食品安全隱患。本次實(shí)驗(yàn)是在理想的環(huán)境中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的，如果在現(xiàn)實(shí)的操作過程中可能會受到來自光照、濕度、溫度、氣候不可抗拒等因素的影響，建議在完全清理過污染物后進(jìn)行徹底的消毒。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)所用的微生物選擇不同種類消毒劑和使用濃度、作用時(shí)間，酸堿度要稀釋到適宜的濃度。在生產(chǎn)生活中，消毒劑的濫用會導(dǎo)致細(xì)菌會對相關(guān)的消毒劑和非相關(guān)性消毒劑產(chǎn)生抗性[29]。并且，在同一個(gè)環(huán)境或者同一個(gè)地方長期使用同一種消毒劑，細(xì)菌會產(chǎn)生耐藥性導(dǎo)致消毒效果下降[30]。在進(jìn)行操作時(shí)，最好消毒劑可以交替使用，避免單一的消毒劑使用過多，使菌體產(chǎn)生耐藥性，也同時(shí)減少集中消毒劑的混合使用，成分的不一，混合之后如果發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，可能會對殺菌效果產(chǎn)生影響，更有甚者可能會對人體產(chǎn)生危害。3.4.1三種消毒劑的作用機(jī)理三種消毒劑中，84消毒劑和乙醇是我們?nèi)粘Ｉ钪薪佑|比較多的消毒劑，其中84消毒劑的主要成分是次氯酸鈉，它的消毒對象多見于封閉環(huán)境和一些實(shí)實(shí)在在的物體。它的主要成分具有極強(qiáng)的強(qiáng)氧化性，這種強(qiáng)氧化性能夠讓微生物喪失繁殖和感染的功能。它可以抑制和殺滅各種疾病中的微生物,其中代謝產(chǎn)品不會給人類和自然環(huán)境造成任何影響其消毒劑主要應(yīng)用于家庭、禽舍、飲水、畜禽等地方的消毒。其對大腸桿菌的作用不是那么明顯。葡萄球菌和營養(yǎng)芽孢桿菌對季銨化合物類的敏感性提供了合理的解釋[31]。新潔爾滅菌劑屬于一種季銨硝酸鹽類的化學(xué)消毒劑它主要的作用是一種陰酸陽離子和人體表面的化學(xué)活性劑,在生物消毒學(xué)的產(chǎn)品分類上它主要還是屬于較為低效的化學(xué)消毒劑,穿透力強(qiáng),作用力和速度快無任何化學(xué)物理刺激性,其中的化學(xué)殺菌作用大大地直接改變了細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性,使得這些細(xì)菌完全喪失了攝取各種營養(yǎng)素的主要能力并且有效地直接抑制了進(jìn)入人體細(xì)胞中的各種菌體新陳代謝和許多消化酶系統(tǒng)的正常生長和恢復(fù)活力。其對大腸桿菌具有明顯的殺滅作用。乙醇的殺菌和滅毒功能能力的好壞及其濃度的好壞有很大程度上影響了它們的作用過高或者太低都是不行的。其70%乙醇對大腸桿菌具有很強(qiáng)的殺菌力。3.4.2注意事項(xiàng)（1）進(jìn)行操作的時(shí)候要求要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作相關(guān)的規(guī)則，用到的所有儀器耗材（槍頭、培養(yǎng)皿、移液槍、西林瓶等），所有的樣液都需要經(jīng)過高壓滅菌方可使用，防止被污染，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗。（2）在進(jìn)行滴加液體的過程中，每次吸加樣液移液槍都要換取一個(gè)新的無菌槍頭，必避免發(fā)生感染。這次過程中操作步驟多，使用的儀器數(shù)量多，要認(rèn)真仔細(xì)執(zhí)行，保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。（3）在吸取液體時(shí)，使用移液槍的量程規(guī)格要與吸取液體的容量所匹配切記不能用大量程吸取少量的液體。（4）中和產(chǎn)物應(yīng)充分的混勻在一起，這一步必須認(rèn)真操作；最大限度地減少微生物與中和劑或中和產(chǎn)物的作用時(shí)間。（5）該方法的適用性取決于消毒劑、實(shí)驗(yàn)微生物和消毒試驗(yàn)是屬于哪種類型、化合物中含有的成分等。條件的微小變化可能會影響中和劑的去除效率，任何消毒試驗(yàn)，包括更換消毒劑或微生物，必須在規(guī)定的方法內(nèi)進(jìn)行，可用于正式的實(shí)驗(yàn)。不應(yīng)省略這些步驟，因?yàn)樗鼈兛赡軐?dǎo)致不正確的結(jié)果。3.4.3中和方法的改進(jìn)依據(jù)2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》中的中和劑鑒定試驗(yàn)，第1組無菌或有少量菌生長;第2組有菌生長，但較第1組多，遠(yuǎn)少于第3、4、5組;第3、4、5組有相似量試驗(yàn)菌生長，且組間菌落數(shù)誤差率不超過15%，第6組無菌生長[32]。在這之前的計(jì)劃中，規(guī)定將第6組分成3部分進(jìn)行，應(yīng)含有中和劑、無菌水、同一部分將作為陰性對照將化繁為簡，能夠保持實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。遵循規(guī)定，消毒劑濃度在中和劑鑒定試驗(yàn)中應(yīng)遵循產(chǎn)品書中所規(guī)定的最高濃度為標(biāo)準(zhǔn)，但這帶來了一些問題，使1、2組無菌生長，剩余的三組（3、4、5組）均符合菌體生長要求，這并不能表明中和劑能否使用。剩余的3組（3、4、5組）菌體生長數(shù)量相差不足15%數(shù)量基本一致，表明中和產(chǎn)物不會影響菌體的正常生長及繁殖，也能夠證明消毒劑能夠被中和劑中和，不能證明消毒劑能否抑制細(xì)菌生長。在此基礎(chǔ)上要進(jìn)一步證明消毒劑能夠殺死菌體并和有效的中和劑，就需要證明出第二組有菌體能夠生長。石映祥[33]發(fā)現(xiàn)在原來的基礎(chǔ)上，通過對消毒劑的稀釋或進(jìn)行中和劑的同倍稀釋，可以得出菌體數(shù)量均符合規(guī)范要求。此方法具有可行性。章迎春[34]主要是對第4組的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行調(diào)整，降低中和劑濃度同時(shí)中和產(chǎn)物作用時(shí)間縮短，做出的6組結(jié)果均符合要求。第4章結(jié)論最小殺菌濃度的確定，確定84消毒劑、新潔爾滅、乙醇的合適稀釋濃度。含0.3%卵磷脂和3%吐溫-80的磷酸緩沖溶液（PBS）能有效的中止500mg/L苯扎溴銨消毒劑（新潔爾滅）和70%乙醇的殘留毒性；而含0.5%硫代硫酸鈉和1%吐溫-80的磷酸緩沖溶液（PBS）能有效中止450mg/L的含氯消毒劑（84消毒劑）的殘留毒性。懸液定量殺菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果500mg/L苯扎溴銨消毒劑（新潔爾滅）和70%乙醇?xì)缧Ч^好，在1.5min時(shí)即可對大腸桿菌殺滅率達(dá)到100%。；而450mg/L的含氯消毒劑（84消毒劑）殺滅效果最差，0.5min、1min、1.5min、2min均不能完全殺滅大腸桿菌，直至3min時(shí)才完全殺滅，總體殺菌效果比其他2種消毒劑差。該實(shí)驗(yàn)為闡明常用的3種消毒劑對大腸桿菌的抑菌效果，為家庭和養(yǎng)殖場衛(wèi)生環(huán)境提供應(yīng)用參考。參考文獻(xiàn)[1]賈良梁,羅靜如,AndreaLuppi.豬腸型大腸桿菌病的發(fā)病機(jī)制[J].國外畜牧學(xué)(豬與禽),2018,38(10):1~5.[2]宣長和,馬春全,陳志寶.豬病學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2010:348~356.[3]侯朝利.豬大腸桿菌病的防治[J].畜牧獸醫(yī)科技信息,2019,(05):1.[4]王紅寧,代敏,吳祥輝,張之文,李春,柳萍.仔豬腹瀉的病因及綜合防治進(jìn)展[J].養(yǎng)豬,2002,(3):32~34.[5]孫廣力,孫剛,李書華,魏萍,郭昭林,楊本.黑龍江省規(guī)?；B(yǎng)豬場大腸桿菌病血清型流行病學(xué)調(diào)查[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2004,32(7):90~92.[6]王孝友,曾秀,孔路軍,范守城.仔豬黃白痢大腸桿菌的分離鑒定[J].湖北畜牧獸醫(yī)，2004,23(6):27~29.[7]王紅寧,劉世貴,劉書亮,黃勇,謝晶,吳琦,柳萍.規(guī)模化豬場仔豬黃、白痢的防治研究[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),1999,21(4):264~267.[8]韓春.豬源致病性大腸桿菌的流行調(diào)查及藥敏實(shí)驗(yàn)[J].中國畜禽種業(yè),2014,10(01):113~115.[9]周磊,李澤偉,孫起榮,邢剛,魏建忠,孫裴,劉雪蘭,李郁.54株豬源腸外致病性大腸桿菌血清型、系統(tǒng)進(jìn)化群和基因型[J].微生物學(xué)通報(bào),2021,48(04):1182~1194.[10]張紹斌.農(nóng)村中小型豬場防疫措施[J].獸醫(yī)導(dǎo)刊,2021,(03):57.[11]白永勤.規(guī)?；i場疫病控制與凈化[J].吉林畜牧獸醫(yī),2021,42(01):94.[12]陳秀琴,張世忠,江斌,林琳,鄭敏,林甦,黃梅清.福建省禽源大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].福建畜牧獸醫(yī),2020,42(06):11~13.[13]彭海燕.家禽大腸桿菌病的診斷和治療[J].畜牧獸醫(yī)科技信息,2020,(07):150~151.[14]史曉杰.豬大腸桿菌病的流行特點(diǎn)、臨床癥狀、治療和預(yù)防[J].現(xiàn)代畜牧科技,2020,(03):66~67.[15]呂玉菊.夏季豬大腸桿菌病特點(diǎn)及防治[J].畜牧獸醫(yī)科技信息.2020,(07):104~105.[16]王劍松.飲用水中大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法及儀器化進(jìn)展[J].計(jì)量與測試技術(shù),2019,46(10):57~59.[17]張弟強(qiáng),張娟勝,王國慶.細(xì)菌對消毒劑抗性機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中國消毒學(xué)雜志.2017,34(07):675~679.[18]劉麗娟,馬光強(qiáng),張勝沾,王偉,王開功,周碧君,茍萬里.仔豬腹瀉致病性大腸桿菌分型鑒定及耐藥性分析[J].中國畜牧獸醫(yī),2018,45(10):2876~2884.[19]CHAHS,SHINDH.AntibacterialcapacityofcavitydisinfectantsagainstStreptococcusmutansandtheireffectsonshearbondstrengthofaselfetchadhesive[J].DentMaterJ,2016,35(1):147~152.[20]馮秀,王愛玲,張振倉,張為民,周宏超,張彥明,郭抗抗.過硫酸氫鉀復(fù)合物最佳殺菌條件的研究[J].\動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2017,38(8):39~42.[21]馬賢坤,車娟娟.消毒滅源健康養(yǎng)殖[J].山東畜牧獸醫(yī),2007,(5):70~72.[22]程麗麗.豬場大腸桿菌耐藥性的流行病學(xué)調(diào)查[J].浙江畜牧醫(yī),2020,45(06):27~29.[23]劉曉慶.豬細(xì)菌性腹瀉的防治[J].新農(nóng)業(yè),2019,(11):74~75.[24]張強(qiáng).仔豬大腸桿菌病的綜合防治措施[J].畜牧獸醫(yī)科技信息,2020,(12):1.[25]李燕,趙瑋,石海春,張孝蘭.五種消毒劑殺菌效果實(shí)驗(yàn)[J].家禽學(xué),2020,(09):51~53.[26]曾春暉,楊柯,林啟云,趙一.廣西藤茶提取物APS體外抗菌作用研究[J].中國藥物應(yīng)用與監(jiān)測,2006,(6):36~39.[27]韋艷,李傳慰,祭仲石.4種消毒劑對氣單胞菌的抑菌殺菌效果研