生物選修1知識(shí)復(fù)習(xí)省公開課一等獎(jiǎng)全國(guó)示范課微課

1．酵母菌細(xì)胞呼吸酵母菌進(jìn)行有氧呼吸大量繁殖，表示式為：C6H12O6+6O2→6CO2+6H2O+能量酵母菌行無氧呼吸產(chǎn)生酒精和CO2，為：C6H12O6→2C2H5OH+2CO2+能量2．酵母菌發(fā)酵最正確環(huán)境酵母菌在有氧和無氧條件下都能生活：在有氧時(shí)，酵母菌大量繁殖，不過不起到發(fā)酵效果；在無氧時(shí)，繁殖速度減慢，不過此時(shí)能夠進(jìn)行發(fā)酵。在利用酵母菌發(fā)酵時(shí)最好是先通入足夠無菌空氣在有氧環(huán)境下一段時(shí)間使其繁殖，再隔絕氧氣進(jìn)行發(fā)酵。20℃左右最適合酵母菌繁殖，酒精發(fā)酵最正確溫度是在18℃～25℃，pH最好是弱酸性。3．醋酸菌好氧性細(xì)菌，當(dāng)缺乏糖源時(shí)和有氧條件下，可將乙醇（酒精）氧化成醋酸。表示式為：2C2H5OH＋4O2→CH3COOH＋6H2O；當(dāng)氧氣、糖源都充分時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中糖分解成醋酸。醋酸菌生長(zhǎng)最正確溫度是在30℃～35℃課題1果酒和果醋制作酶酶酶一、試驗(yàn)原理第1頁二、試驗(yàn)步驟

1.對(duì)發(fā)酵瓶、紗布、榨汁機(jī)、盛葡萄汁器皿等試驗(yàn)用具進(jìn)行清洗并消毒。先用溫水重復(fù)沖洗幾次,再用體積分?jǐn)?shù)為75%酒精擦拭消毒，晾干待用。2.取葡萄500g，去除枝梗和腐爛子粒。3.用清水沖洗葡萄1～2遍除去污物，注意不要重復(fù)屢次沖洗。4.用榨汁機(jī)榨取葡萄汁后，將其裝入發(fā)酵瓶中或?qū)⑵咸汛虺蓾{后，用潔凈紗布過濾至發(fā)酵瓶中，蓋好瓶蓋。假如沒有適當(dāng)發(fā)酵裝置，能夠用500mL塑料瓶替換，但注入果汁量不要超出塑料瓶總體積2/3。5.將發(fā)酵瓶置于適宜溫度下發(fā)酵。6.因?yàn)榘l(fā)酵旺盛期CO2產(chǎn)量非常大，所以需要及時(shí)排氣，預(yù)防發(fā)酵瓶爆裂。假如使用簡(jiǎn)易發(fā)酵裝置，如瓶子（最好選取塑料瓶），天天要擰松瓶蓋2～4次，進(jìn)行排氣。7.10d以后，能夠開始進(jìn)行取樣檢驗(yàn)工作。比如，能夠檢驗(yàn)酒味、酒精含量、進(jìn)行酵母菌鏡檢等工作。8.當(dāng)果酒制成以后，能夠在發(fā)酵液中加入醋酸菌或醋曲，然后將裝置轉(zhuǎn)移至30～35℃條件下發(fā)酵，適時(shí)向發(fā)酵液中充氣。假如找不到醋酸菌菌種或醋曲，可嘗試自然接種，但效果不是很好。假如沒有充氣裝置，能夠?qū)⑵可w打開，在瓶口蓋上紗布，以降低空氣中塵土等污染。第2頁請(qǐng)分析此裝置中充氣口、排氣口和出料口分別有哪些作用。為何排氣口要經(jīng)過一個(gè)長(zhǎng)而彎曲膠管與瓶身連接？結(jié)合果酒、果醋制作原理，你認(rèn)為應(yīng)該怎樣使用這個(gè)發(fā)酵裝置？答：充氣口是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵

進(jìn)行充氣用；排氣口是在酒精發(fā)酵時(shí)用來排出CO2；出料口是用來取樣。排氣口要經(jīng)過一個(gè)長(zhǎng)而彎曲膠管與瓶身連接，其目標(biāo)是預(yù)防空氣中微生物污染。使用該裝置制酒時(shí)，應(yīng)該關(guān)閉充氣口；制醋時(shí)，應(yīng)將充氣口連接氣泵，輸入氧氣。第3頁必背相關(guān)概念和內(nèi)容1、發(fā)酵：經(jīng)過微生物培養(yǎng)技術(shù)使微生物生產(chǎn)大量代謝產(chǎn)物過程。2、有氧發(fā)酵：醋酸發(fā)酵谷氨酸發(fā)酵·

無氧發(fā)酵：酒精發(fā)酵乳酸發(fā)酵3、酵母菌是兼性厭氧菌型微生物真菌·酵母菌生殖方式：出芽生殖(主要)

分裂生殖

孢子生殖4、有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖C6H12O6+6O2→6CO2+6H2O+能量5、在無氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵C6H12O6→2C2H5OH+2CO2+能量6、20℃左右最適宜酵母菌繁殖酒精發(fā)酵時(shí)普通將溫度控制在18℃-25℃7、在葡萄酒自然發(fā)酵過程中,起主要作用是附著在葡萄皮表面野生型酵母菌。在發(fā)酵過程中,伴隨酒精濃度提升,紅葡萄皮色素也進(jìn)入發(fā)酵液,使葡萄酒展現(xiàn)深紅色。在缺氧呈酸性發(fā)酵液中，酵母菌能夠生長(zhǎng)繁殖，而絕大多數(shù)其它微生物都因無法適應(yīng)這一環(huán)境而受到制約。8、醋酸菌是單細(xì)胞細(xì)菌(原核生物),代謝類型是異養(yǎng)需氧型,生殖方式為二分裂9、當(dāng)氧氣、糖源都充分時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中糖分解成醋酸；當(dāng)缺乏糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿帷?/p>

2C2H5OH＋4O2→CH3COOH＋6H2O第4頁10、控制發(fā)酵條件作用

①醋酸菌對(duì)氧氣含量尤其敏感，當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時(shí)，即使只是短時(shí)間中止通入氧氣，也會(huì)引發(fā)醋酸菌死亡。②醋酸菌最適生長(zhǎng)溫度為30～35℃，控制好發(fā)酵溫度，使發(fā)酵時(shí)間縮短，又降低雜菌污染機(jī)會(huì)。③有兩條路徑生成醋酸：直接氧化和以酒精為底物氧化。11、試驗(yàn)流程：挑選葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→果酒（→醋酸發(fā)酵→果醋）12、酒精檢驗(yàn)：

果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，能夠用重鉻酸鉀來檢驗(yàn)。在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)展現(xiàn)灰綠色。

先在試管中加入發(fā)酵液2ｍL，再滴入物質(zhì)量濃度為3mol/LH2SO43滴，振蕩混勻，最終滴加常溫下飽和重鉻酸鉀溶液3滴，振蕩試管，觀察顏色第5頁疑難解答（1）你認(rèn)為應(yīng)該先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為何？應(yīng)該先沖洗，然后再除去枝梗，以防止去去枝梗時(shí)引發(fā)葡萄破損，增加被雜菌污染機(jī)會(huì)。（2）你認(rèn)為應(yīng)該從哪些方面預(yù)防發(fā)酵液被污染？如：要先沖洗葡萄，再除去枝梗；榨汁機(jī)、發(fā)酵裝置要清洗潔凈，并進(jìn)行酒精消毒；每次排氣時(shí)只需擰松瓶蓋，不要完全揭開瓶蓋等。（3）制葡萄酒時(shí)，為何要將溫度控制在18～25℃？制葡萄醋時(shí)，為何要將溫度控制在30～35℃？溫度是酵母菌生長(zhǎng)和發(fā)酵主要條件。20℃左右最適合酵母菌繁殖。所以需要將溫度控制在其最適溫度范圍內(nèi)。而醋酸菌是嗜溫菌，最適生長(zhǎng)溫度為30～35℃，所以要將溫度控制在30～35℃。菌種項(xiàng)目酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌生物學(xué)分類真核生物原核生物真核生物原核生物代謝類型異養(yǎng)兼性厭氧異養(yǎng)需氧異養(yǎng)需氧異養(yǎng)厭氧繁殖方式適宜條件下出芽生殖二分裂生殖孢子生殖二分裂生殖生產(chǎn)應(yīng)用釀酒釀醋制作腐乳制作泡菜發(fā)酵條件前期需氧，后期不需氧一直需氧一直需氧不需氧幾個(gè)慣用發(fā)酵菌種比較第6頁制作內(nèi)容比較項(xiàng)目果酒果醋腐乳泡菜所用菌種酵母菌醋酸菌主要是為霉乳酸菌控制條件O2有沒有無氧有氧有氧無氧最適溫度18℃～25℃30℃～35℃15℃～18℃常溫時(shí)間控制10～12天7～8天腌制8天左右腌制10天左右其它條件封閉充氣口適時(shí)充氣控制鹽酒用量控制鹽水百分比相關(guān)反應(yīng)式果酒、果醋、腐乳、泡菜制作中所用菌種及控制條件比較第7頁二、相關(guān)試題1．（·北京理綜，1）在家庭中用鮮葡萄制作果酒時(shí)，正確操作是（）A．讓發(fā)酵裝置接收光照

B．給發(fā)酵裝置適時(shí)排氣C．向發(fā)酵裝置通入空氣

D．將發(fā)酵裝置放在45℃處2．以下關(guān)于腐乳制作過程說法，正確是（）A．制作腐乳時(shí)只有毛霉發(fā)揮作用B．豆腐表面長(zhǎng)出青色物質(zhì)則標(biāo)志著腐乳制作完成C．在腐乳制作過程中必須有能產(chǎn)生蛋白酶微生物參加D．制作腐乳時(shí)加鹽是為了促進(jìn)毛霉生長(zhǎng)3．以下關(guān)于病毒、醋酸菌、毛霉敘述，不正確是（）A．病毒與后二者比較，沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，遺傳物質(zhì)可能是DNA或是RNAB．醋酸菌是好氧菌，能夠?qū)⑵咸烟欠纸獬纱姿幔浼?xì)胞結(jié)構(gòu)中沒有核膜和核仁C．在腐乳制作過程中，毛霉能產(chǎn)生蛋白酶，分解豆腐中蛋白質(zhì)為肽和氨基酸D．三者在培養(yǎng)過程中，只要培養(yǎng)基中有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽，都能正常生長(zhǎng)繁殖4．（?江蘇生物，7）下列圖表示果酒和果醋制作過程中物質(zhì)改變過程，以下敘述正確是（）A．過程①和②都只能發(fā)生在缺氧條件下B．過程①和③都發(fā)生在酵母細(xì)胞線粒體中C．過程③和④都需要氧氣參加D．過程①～④所需最適溫度基本相同BCDC第8頁1.以下相關(guān)微生物培養(yǎng)或純化敘述，錯(cuò)誤是（）A．微生物在培養(yǎng)前要先對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理再接種B．培養(yǎng)液中溶氧量改變會(huì)影響酵母菌繁殖和代謝路徑C．分離自養(yǎng)型微生物方法是用纖維素作為唯一碳源培養(yǎng)基D．分離純化微生物慣用方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法C2.以下關(guān)于微生物敘述，錯(cuò)誤是()A．硝化細(xì)菌即使不能進(jìn)行光合作用，但屬于自養(yǎng)生物B．藍(lán)藻即使無葉綠體，但在生態(tài)系統(tǒng)中屬于生產(chǎn)者C．酵母菌呼吸作用終產(chǎn)物可經(jīng)過自由擴(kuò)散運(yùn)出細(xì)胞D．大腸桿菌遺傳信息在細(xì)胞核中轉(zhuǎn)錄，在細(xì)胞質(zhì)中翻譯D3.在“果醋制作過程”中，取得較多醋酸桿菌菌種最簡(jiǎn)便方法是（）A．從變酸葡萄酒表面取得菌膜，再培養(yǎng)、分離B．無須人為加入菌種在葡萄等水果表面本身就存在大量醋酸桿菌C．從泡菜壇蓋邊緣水槽中表面取得菌膜，再培養(yǎng)、分離D．從土壤中分離提取A4.對(duì)制葡萄酒和葡萄醋發(fā)酵條件控制中，錯(cuò)誤是（）A．葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時(shí)，要留有1/3空間B．用清水沖洗葡萄除去污物，應(yīng)重復(fù)屢次沖洗C．制葡萄酒過程中，除在適宜條件下，時(shí)間應(yīng)控制在10～12dD．制葡萄醋溫度要比葡萄酒溫度高些，但時(shí)間普通控制在7～8d左右B第9頁5．（·廣州一模，6）以下關(guān)于生物技術(shù)說法不正確是（）A．需借助胚胎移植技術(shù)才能取得克隆牛B．單倍體育種過程包括脫分化和再分化C．用本身干細(xì)胞培育器官，移植后普通不會(huì)產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)D．果酒與果醋制作過程需要保持缺氧狀態(tài)6．（·廣東理綜，25）小李嘗試制作果酒，他將葡萄汁放入已滅菌發(fā)酵裝置中進(jìn)行試驗(yàn)（見圖），恰當(dāng)做法是（雙選）（）A．加入適量酵母菌B．一直打開閥b通氣C．一直關(guān)緊閥a，偶然打開閥b幾秒鐘D．把發(fā)酵裝置放到4℃冰箱中進(jìn)行試驗(yàn)7．下面是相關(guān)食醋和泡菜制作試驗(yàn)。請(qǐng)回答：（1）食醋可用大米為原料經(jīng)三步發(fā)酵來制作：第一步：大米經(jīng)蒸熟、冷卻后加入淀粉酶，將原料中淀粉分解成

（填中間產(chǎn)物），然后深入分解成葡萄糖，這一過程可用

（填淀粉指示劑）來檢測(cè)，因?yàn)樵撛噭┯龅矸鄢仕{(lán)色，遇上述中間產(chǎn)物呈紅色。第二步：用

菌將葡萄糖轉(zhuǎn)化成乙醇，這一發(fā)酵過程中，玻璃發(fā)酵瓶不應(yīng)完全密閉主要原因是

。第三步：用

菌將乙醇轉(zhuǎn)化成乙酸，這一過程

氧氣。DAC糊精碘液酵母發(fā)酵過程中會(huì)產(chǎn)生大量CO2，使瓶?jī)?nèi)壓力升高而可能引發(fā)爆裂醋酸桿需要消耗第10頁

（1）排氣口膠管設(shè)計(jì)成長(zhǎng)而彎曲目標(biāo)是

。（2）試驗(yàn)最初階段，因?yàn)?/p>

、

、

，酵母菌種群數(shù)量呈“J”型增加。（3）在上圖所表示計(jì)數(shù)室中，假如一個(gè)小方格內(nèi)酵母菌過多，難以數(shù)清，應(yīng)該采取辦法是

。（4）本試驗(yàn)沒有另設(shè)置對(duì)照試驗(yàn)，原因是

。為提升試驗(yàn)準(zhǔn)確性，試驗(yàn)時(shí)應(yīng)進(jìn)行

。（5）請(qǐng)你設(shè)計(jì)表格統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)。8．（·廣東肇慶一模，29）某生物興趣小組為了“探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量改變”，按以下左圖裝置進(jìn)行了試驗(yàn)，并使用如右圖所表示血球計(jì)數(shù)板對(duì)培養(yǎng)液中酵母菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。請(qǐng)分析回答：

預(yù)防空氣中雜菌污染溫度等條件適宜

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充分

沒有敵害和競(jìng)爭(zhēng)使酵母菌分布均勻，增加稀釋倍數(shù)。該試驗(yàn)時(shí)間上形成前后本身對(duì)照重復(fù)試驗(yàn)（取樣）時(shí)間次數(shù)12345671

2

3

第11頁（1）酵母菌與醋酸桿菌在結(jié)構(gòu)上最大區(qū)分是后者

。從制酒和制醋兩階段對(duì)裝置處理方式判斷，酵母菌和醋酸桿菌異化作用類型依次是

。（2）同學(xué)甲在制酒階段，每隔12h左右就要將瓶蓋擰松一次，但又不打開，這么做目標(biāo)是

。用反應(yīng)式表示出制酒過程剛開始時(shí)發(fā)生主要化學(xué)改變

。（3）B裝置中排氣口要經(jīng)過一個(gè)長(zhǎng)而彎曲膠管與瓶身相連，這么做原因

。（4）制葡萄酒時(shí)要將溫度控制在18～25℃，而制葡萄醋時(shí)要將溫度控制在30～35℃，原因是

。葡萄汁為酵母菌、醋酸桿菌等微生物生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)成份是

。（5）制作過程中普通不需要額外添加酵母菌和醋酸桿菌即可完成。為了提升果酒品質(zhì)也可在果汁中加入人工培養(yǎng)酵母菌。利用

培養(yǎng)基可分離取得較為純凈酵母菌菌種，如在培養(yǎng)基中加入

能夠從細(xì)菌和酵母菌混合液中分離出酵母菌。（6）為提升水果出汁率，使果汁變得澄清，在果汁生產(chǎn)中慣用

。9．低度果酒、果醋含有一定保健養(yǎng)生功效。下列圖是兩位同學(xué)制果酒和果醋時(shí)使用裝置。同學(xué)甲用A（帶蓋瓶子）裝置制葡萄糖，在瓶中加入適量葡萄汁，發(fā)酵溫度控制在18～25℃，每隔12h左右將瓶蓋擰松一次（注意不是打開瓶蓋），之后再將瓶蓋擰緊。當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)生酒精后，再將瓶蓋打開，蓋上一層紗布，溫度控制在30～35℃，進(jìn)行制果醋發(fā)酵。同學(xué)乙用B裝置，溫度控制與甲相同，不一樣是制果酒階段充氣口用夾子夾緊外，排氣橡膠管也用夾子夾住，而且每隔12h左右松一松夾子放出多出氣體。制果醋階段適時(shí)向充氣口充氣。經(jīng)過20天左右，兩位同學(xué)先后完成了自己發(fā)酵制作。據(jù)此回答相關(guān)問題：沒有由核膜包圍細(xì)胞核兼性厭氧型、需氧型制酒階段后期，酵母菌無氧呼吸會(huì)產(chǎn)生大量氣體，如不及時(shí)放出會(huì)把瓶子或瓶蓋脹破，不打開瓶蓋是預(yù)防氧氣和有害雜菌進(jìn)入C6H12O6＋6H2O＋6O2酶

6CO2＋12H2O＋能量預(yù)防污染18～25℃是酵母菌生長(zhǎng)和發(fā)酵適當(dāng)溫度，30～35℃是醋酸桿菌生長(zhǎng)和發(fā)酵適當(dāng)溫度。碳源、氮源、水、無機(jī)鹽和生長(zhǎng)因子選擇青霉素（抗生素）果膠酶第12頁專題二微生物培養(yǎng)與應(yīng)用

課題一微生物試驗(yàn)室培養(yǎng)

培養(yǎng)基：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不一樣需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，是進(jìn)行微生物培養(yǎng)物質(zhì)基礎(chǔ)?！づ囵B(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂（是從紅藻中提取一個(gè)多糖，在配制培養(yǎng)基中用作凝固劑）后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)，能夠形成肉眼可見菌落。依據(jù)菌落特征能夠判斷是哪一個(gè)菌。液體培養(yǎng)基應(yīng)用于工業(yè)或生活生產(chǎn)，固體培養(yǎng)基應(yīng)用于微生物分離和判定，半固體培養(yǎng)基則慣用于觀察微生物運(yùn)動(dòng)及菌種保藏等。·按照成份培養(yǎng)基可分為人工合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基是用成份已知化學(xué)物質(zhì)配制而成，其中成份種類百分比明確，慣用于微生物分離判定。天然培養(yǎng)基是用化學(xué)成份不明天然物質(zhì)配制而成，慣用于實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)?！ぐ凑张囵B(yǎng)基用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和判定培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要微生物生長(zhǎng)。判別培養(yǎng)基是依據(jù)微生物特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成，用以判別不一樣類別微生物。第13頁·培養(yǎng)基化學(xué)成份包含水、無機(jī)鹽、碳源、氮源、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如生長(zhǎng)因子等?！ぬ荚矗耗転槲⑸锎x提供碳元素物質(zhì)。如CO2、NaHCO3等無機(jī)碳源；糖類、石油、花生粉餅等有機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機(jī)碳源。單質(zhì)碳不能作為碳源?！さ矗耗転槲⑸锎x提供氮元素物質(zhì)。如N2、NH3、NO3-、NH4+（無機(jī)氮源）蛋白質(zhì)、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有機(jī)氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2?！づ囵B(yǎng)基還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣要求。

比如，

培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素，

培養(yǎng)霉菌時(shí)須將培養(yǎng)基pH調(diào)至酸性，

培養(yǎng)細(xì)菌是需要將pH調(diào)至中性或微堿性，

培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供無氧條件第14頁培養(yǎng)基分類和應(yīng)用歸納：劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途物理性質(zhì)液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)半固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂觀察微生物運(yùn)動(dòng)、分類、判定固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂微生物分離、判定、活菌計(jì)數(shù)化學(xué)組成天然培養(yǎng)基含化學(xué)成份不明確天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成份明確（用化學(xué)成份已知化學(xué)物質(zhì)配成）分類、判定目標(biāo)用途選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要微生物生長(zhǎng)培養(yǎng)、分離出特定微生物判別培養(yǎng)基依據(jù)微生物代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品判別不一樣種類微生物第15頁·無菌技術(shù)·取得純凈培養(yǎng)物關(guān)鍵是預(yù)防外來雜菌入侵，要注意以下幾個(gè)方面：①對(duì)試驗(yàn)操作空間、操作者衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。②將用于微生物培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。③為防止周圍環(huán)境中微生物污染，試驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。④試驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)防止已經(jīng)滅菌處理材料用具與周圍物品相接觸。無菌技術(shù)除了用來預(yù)防試驗(yàn)室培養(yǎng)物被其它外來微生物污染外，還有什么目標(biāo)？答：無菌技術(shù)還能有效防止操作者本身被微生物感染?！は九c滅菌區(qū)分消毒指使用較為溫和物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害微生物（不包含芽孢和孢子）。消毒方法慣用煮沸消毒法，巴氏消毒法（對(duì)于一些不耐高溫液體）還有化學(xué)藥劑（如酒精、氯氣、石炭酸等）消毒、紫外線消毒。滅菌則是指使用強(qiáng)烈理化原因殺死物體內(nèi)外全部微生物，包含芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。第16頁滅菌方法：①接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；②玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；③培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。④表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。比較項(xiàng)目消毒滅菌條件使用較為溫和理化方法使用強(qiáng)烈理化原因結(jié)果殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害微生物（不包含芽孢和孢子）殺死物體內(nèi)外全部微生物，包含芽孢和孢子適用試驗(yàn)操作空間、操作者衣服和手微生物培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等慣用方法煮沸消毒法（如在100℃，煮沸5～6min）、巴氏消毒法（如在80℃，煮15min）；使用酒精、氯氣、石炭酸等化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌消毒與滅菌區(qū)分

滅菌方法滅菌條件滅菌時(shí)間適用材料或用具灼燒滅菌酒精燈火焰充分燃燒層直至燒紅接種環(huán)、接種針或其它金屬工具干熱滅菌干熱滅菌箱內(nèi)，160～170℃1～2h玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等高壓蒸汽滅菌100kPa，121℃15～30min培養(yǎng)基等三種慣用滅菌方法比較第17頁制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（1）方法步驟：計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。（2）倒平板操作步驟：①將滅過菌培養(yǎng)皿放在火焰旁桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基錐形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶，將瓶口快速經(jīng)過火焰。③用左手拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口縫隙，右手將錐形瓶中培養(yǎng)基（約10～20mL）倒入培養(yǎng)皿，左手馬上蓋上培養(yǎng)皿皿蓋。④等候平板冷卻凝固，大約需5～10min。然后，將平板倒過來放置，使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上。第18頁·倒平板操作討論：1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么方法來預(yù)計(jì)培養(yǎng)基溫度？提醒：能夠用手觸摸盛有培養(yǎng)基錐形瓶，感覺錐形瓶溫度下降到剛才不燙手時(shí)，就能夠進(jìn)行倒平板了。2.為何需要使錐形瓶瓶口經(jīng)過火焰？答：經(jīng)過灼燒滅菌，預(yù)防瓶口微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后，為何要將平板倒置？答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后培養(yǎng)基表面濕度也比較高，將平板倒置，既能夠使培養(yǎng)基表面水分更加好地?fù)]發(fā)，又能夠預(yù)防皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。4.在倒平板過程中，假如不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為何？答：空氣中微生物可能在皿蓋與皿底之間培養(yǎng)基上滋生，所以最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。第19頁純化大腸桿菌（1）微生物接種方法最慣用是平板劃線法和稀釋涂布平板法。（2）平板劃線法是經(jīng)過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線操作。將聚集菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，能夠分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來肉眼可見子細(xì)胞群體，這就是菌落。（3）稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，然后將不一樣稀釋度菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基表面，進(jìn)行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。（4）用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種目標(biāo)是：使聚集在一起微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落，方便于純化菌種。（5）平板劃線法操作步驟：①將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。②在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞。③將試管口經(jīng)過火焰。④將已冷卻接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。⑤將試管經(jīng)過火焰，并塞上棉塞。⑥左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種接種環(huán)快速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)皿。⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第

一區(qū)域劃線末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最

后一區(qū)劃線與第一區(qū)相連。⑧將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。第20頁·平板劃線操作討論1.為何在操作第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，依然需要灼燒接種環(huán)嗎？為何？答：操作第一步灼燒接種環(huán)是為了防止接種環(huán)上可能存在微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上菌種直接起源于上次劃線末端，從而經(jīng)過劃線次數(shù)增加，使每次劃線時(shí)菌種數(shù)目逐步降低，方便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留菌種，防止細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。2.在灼燒接種環(huán)之后，為何要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后劃線操作時(shí)，為何總是從上一次劃線末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線末端開始，能使細(xì)菌數(shù)目伴隨劃線次數(shù)增加而逐步降低，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來菌落。第21頁（6）涂布平板操作步驟：①將涂布器浸在盛有酒精燒杯中。②取少許菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。③將沾有少許酒精涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8～10s。④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布平板操作討論涂布平板全部操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)怎樣進(jìn)行無菌操作？提醒：應(yīng)從操作各個(gè)細(xì)節(jié)確保“無菌”。比如，酒精燈與培養(yǎng)皿距離要適當(dāng)、吸管頭不要接觸任何其它物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。第22頁菌種保留（1）對(duì)于頻繁使用菌種，能夠采取暫時(shí)保藏方法。①暫時(shí)保藏方法

將菌種接種到試管固體斜面培養(yǎng)基上，在適當(dāng)溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長(zhǎng)成后，將試管放入4℃冰箱中保藏。以后每3～6個(gè)月，都要重新將菌種從舊培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上。②缺點(diǎn)：這種方法保留時(shí)間不長(zhǎng)，菌種輕易被污染或產(chǎn)生變異。（2）對(duì)于需要長(zhǎng)久保留菌種，能夠采取甘油管藏方法。在3mL甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養(yǎng)菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在－20℃冷凍箱中保留。疑難解答（1）生物營(yíng)養(yǎng)

營(yíng)養(yǎng)是指生物攝取、利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)過程。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是指維持機(jī)體生命活動(dòng)，確保發(fā)育、生殖所需外源物質(zhì)。人及動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、無機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類。植物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類。微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、無機(jī)鹽、碳源、氮源及特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)五類。（2）確定培養(yǎng)基制作是否合格方法將未接種培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2天，無菌落生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基制備是成功，不然需要重新制備。第23頁課題二土壤中分解尿素細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)尿素

是一個(gè)主要農(nóng)業(yè)氮肥，尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中細(xì)菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗麄兡芎铣呻迕?/p>

尿素最初是從人尿液中發(fā)覺篩選菌株（1）試驗(yàn)室中微生物篩選應(yīng)用原理人為提供有利于目標(biāo)菌株生長(zhǎng)條件（包含營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等），同時(shí)抑制或阻止其它微生物生長(zhǎng)。（2）選擇性培養(yǎng)基在微生物學(xué)中，將允許特定種類微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其它種類微生物生長(zhǎng)培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。（3）配制選擇培養(yǎng)基依據(jù)依據(jù)選擇培養(yǎng)菌種生理代謝特點(diǎn)加入某種物質(zhì)以到達(dá)選擇目標(biāo)。比如，培養(yǎng)基中不加入有機(jī)物能夠選擇培養(yǎng)自養(yǎng)微生物；培養(yǎng)基中不加入氮元素，能夠選擇培養(yǎng)能固氮微生物；加入高濃度食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。第24頁統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目（1）測(cè)定微生物數(shù)量慣用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)。（2）稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)目標(biāo)原理當(dāng)樣品稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)一個(gè)菌落，起源于樣品稀釋液中一個(gè)活菌。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)平板上菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活細(xì)菌。為了確保結(jié)果準(zhǔn)確，普通設(shè)置3～5個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30～300平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取平均值。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)往往比活菌實(shí)際數(shù)目低，所以，統(tǒng)計(jì)結(jié)果普通用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示。采取此方法注意事項(xiàng)：1.普通選取菌落數(shù)在30~300之間平板進(jìn)行計(jì)數(shù)2.為了預(yù)防菌落蔓延，影響計(jì)數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入TTC3.本法僅限于形成菌落微生物。設(shè)置對(duì)照設(shè)置對(duì)照主要目標(biāo)是排除試驗(yàn)組中非測(cè)試原因?qū)υ囼?yàn)結(jié)果影響，提升試驗(yàn)結(jié)果可信度。對(duì)照試驗(yàn)是指除了被測(cè)試條件以外，其它條件都相同試驗(yàn)，其作用是比照試驗(yàn)組，排除任何其它可能原因干擾，證實(shí)確實(shí)是所測(cè)試條件引發(fā)對(duì)應(yīng)結(jié)果。第25頁試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)包含試驗(yàn)方案，所需儀器、材料、用具和藥品，詳細(xì)實(shí)施步驟以及時(shí)間安排等綜合考慮和安排。（1）土壤取樣：同其它生物環(huán)境相比，土壤中微生物，數(shù)量最大，種類最多。在富含有機(jī)質(zhì)土壤表層，有更多微生物生長(zhǎng)。從富含有機(jī)物、潮濕、pH≈7土壤中取樣。鏟去表層土，在距地表約3～8cm土壤層取樣。（2）樣品稀釋：樣品稀釋程度將直接影響平板上生長(zhǎng)菌落數(shù)目。在實(shí)際操作中，通常選取一定稀釋范圍樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以確保取得菌落數(shù)在30~300之間、適于計(jì)數(shù)平板。測(cè)定土壤中細(xì)菌數(shù)量，普通選取104105106測(cè)定放線菌數(shù)量，普通選取103104105

測(cè)定真菌數(shù)量，普通選取102103104（3）微生物培養(yǎng)與觀察不一樣種類微生物，往往需要不一樣培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。細(xì)菌30~37℃1~2天放線菌25~28℃5~7天霉菌25~28℃3~4天每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)統(tǒng)計(jì)作為結(jié)果，這么能夠預(yù)防因培養(yǎng)時(shí)間不足而造成一樓菌落數(shù)目。普通來說，在一定培養(yǎng)條件下（相同培養(yǎng)基、唯獨(dú)及培養(yǎng)時(shí)間），同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定菌落特征。形狀、大小、隆起程度、顏色第26頁疑難解答（1）怎樣從平板上菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中菌落數(shù)？統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)平均值每克樣品中菌落數(shù)=（C/V）*M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用稀釋液體積（ml），M代表稀釋倍數(shù)第27頁二、相關(guān)試題1．（·安徽理綜，6）以下是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”試驗(yàn)操作敘述，其中錯(cuò)誤是

（）A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B．取104、105、106倍土壤稀釋液和無菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上C．將試驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)24～48小時(shí)D．確定對(duì)照組無菌后，選擇菌落數(shù)在300以上試驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)2．以下對(duì)四種微生物相關(guān)敘述，錯(cuò)誤是（）A．CO2和NH3分別是硝化細(xì)菌碳源和氮源，該生物所需能源來自NH3氧化B．CO2和硝酸鹽分別是褐藻碳源和氮源，該生物所需能源來自太陽能C．糖類和N2是乳酸菌碳源和氮源，該生物所需能源來自乳酸氧化分解D．葡萄糖既是酵母菌碳源也是其能源，但CO2一定不是酵母菌碳源3．酵母菌培養(yǎng)最好使用以下哪種培養(yǎng)基（）A．牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基B．麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基C．蛋白胨酵母膏培養(yǎng)基D．MS培養(yǎng)基DCB第28頁4．以下關(guān)于微生物培養(yǎng)和利用敘述，錯(cuò)誤是（）A．經(jīng)過消毒不能殺死物體內(nèi)全部微生物B．利用平板劃線法能夠統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)目C．平板劃線法和稀釋涂布法慣用于微生物接種D．微生物所用培養(yǎng)基成份和植物組織培養(yǎng)用培養(yǎng)基成份不一樣5．以下相關(guān)微生物培養(yǎng)或純化敘述，錯(cuò)誤是（）A．微生物在培養(yǎng)前要先對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理再接種B．培養(yǎng)液中溶氧量改變會(huì)影響酵母菌繁殖和代謝路徑C．分離純化微生物慣用方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法D．分離自養(yǎng)型微生物方法是用纖維素作為唯一碳源培養(yǎng)基6．在做分離“分解尿素細(xì)菌”試驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對(duì)應(yīng)10-6培養(yǎng)基中篩選出大約150個(gè)菌落，而其它同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。以下相關(guān)敘述正確是（雙選）（）A．A同學(xué)出現(xiàn)這種結(jié)果原因是土樣不一樣B．能夠?qū)同學(xué)配制培養(yǎng)基在不加土樣情況下進(jìn)行培養(yǎng)作為空白對(duì)照，以證實(shí)培養(yǎng)基是否受到污染C．讓其它同學(xué)用與A同學(xué)一樣土壤進(jìn)行試驗(yàn)，假如結(jié)果與A同學(xué)一樣，則可證實(shí)A同學(xué)無誤D．B、C選項(xiàng)試驗(yàn)思緒都遵照了試驗(yàn)對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)BDBC第29頁7．（·寧夏理綜，40）（1）在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營(yíng)養(yǎng)條件外，還要考慮

、

和滲透壓等條件。因?yàn)樵摷?xì)菌含有體積小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、變異類型輕易選擇、

、

等優(yōu)點(diǎn)，所以常作為遺傳學(xué)研究試驗(yàn)材料。

（2）在微生物培養(yǎng)操作過程中，為預(yù)防雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌處理，其中對(duì)培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌慣用方法是

；操作者雙手需要進(jìn)行清洗和

；靜止空氣中細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能

。

（3）若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌個(gè)數(shù)，要想使所得預(yù)計(jì)值更靠近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、屢次重復(fù)外，還應(yīng)確保待測(cè)樣品稀釋

。

（4）通常，對(duì)取得純菌種還能夠依據(jù)菌落形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步

。

（5）培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采取檢測(cè)方法是

。

（6）若用大腸桿菌進(jìn)行試驗(yàn)，使用過培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過

處理后才能丟棄，以預(yù)防培養(yǎng)物擴(kuò)散。溫度pH易培養(yǎng)生活周期短干熱滅菌法消毒損傷DNA結(jié)構(gòu)百分比適當(dāng)判定（或分類）

將未接種培養(yǎng)基在適宜溫度下放置適宜時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生滅菌第30頁8．（·山東理綜，34）生物柴油是一個(gè)可再生清潔能源，其應(yīng)用在一定程度上能夠減緩人類對(duì)化石燃料消耗?？茖W(xué)家發(fā)覺，在微生物M產(chǎn)生脂肪酶作用下，植物油與甲醇反應(yīng)能夠合成生物柴油（以下列圖）。（1）篩選產(chǎn)脂肪酶微生物M時(shí)，選擇培養(yǎng)基中添加植物油為微生物生長(zhǎng)提供

，培養(yǎng)基滅菌采取最適方法是

法。（2）測(cè)定培養(yǎng)液中微生物數(shù)量，可選取

法直接計(jì)數(shù)；從微生物M分離提取脂肪酶通常需要檢測(cè)

，以確定其應(yīng)用價(jià)值；為降低生物柴油生產(chǎn)成本，可利用

技術(shù)使脂肪酶能夠重復(fù)使用。（3）若需克隆脂肪酶基因，可應(yīng)用耐熱DNA聚合酶催化

技術(shù)。碳源高壓蒸汽滅菌顯微鏡直接計(jì)數(shù)酶活性（或：酶活力）固定化酶（或：固定化細(xì)胞）PCR第31頁9．從自然菌樣篩選較理想生產(chǎn)菌種普通步驟是：采集菌樣→富集培養(yǎng)→純種分離→性能測(cè)定。（1）不一樣微生物生存環(huán)境不一樣，取得理想微生物第一步是從適合環(huán)境采集菌樣，然后再按一定方法分離、純化。培養(yǎng)嗜鹽菌菌樣應(yīng)從

環(huán)境采集。（2）富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分離微生物旺盛生長(zhǎng)特定環(huán)境條件，使其在群落中數(shù)量大大增加，從而分離出所需微生物培養(yǎng)方法。對(duì)產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物富集培養(yǎng)應(yīng)選擇

培養(yǎng)基，并在

條件下培養(yǎng)。（3）下面兩圖是采取純化微生物培養(yǎng)兩種接種方法接種后培養(yǎng)效果圖解，請(qǐng)分析接種詳細(xì)方法。

取得圖A效果接種方法是

，取得圖B效果接種方法是

。（4）配制培養(yǎng)基時(shí)各種成份在溶化后分裝前必須進(jìn)行

，接種前要進(jìn)行

，在整個(gè)微生物分離和培養(yǎng)中，一定要注意在

條件下進(jìn)行。海灘等高鹽以淀粉為唯一碳源高溫稀釋涂布平板法平板劃線法pH調(diào)整高壓蒸汽滅菌無菌第32頁10．（·廣東汕頭一模，26）有機(jī)磷農(nóng)藥殺蟲能力強(qiáng)，在糧食增產(chǎn)、傳染病防治等方面作用顯著，但污染環(huán)境并危害人體健康。在眾多有機(jī)磷農(nóng)藥殘留物降解技術(shù)中，生物降解有高效、徹底、無二次污染優(yōu)勢(shì)，其中，微生物因?yàn)楹休^復(fù)雜多樣代謝路徑，是有機(jī)磷農(nóng)藥降解主力軍。（1）在富含有機(jī)磷農(nóng)藥殘留成份土壤中，更輕易分離到能降解農(nóng)藥微生物。依據(jù)達(dá)爾文理論，這是因?yàn)橛袡C(jī)磷農(nóng)藥對(duì)于這類微生物含有

作用。（2）微生物含有復(fù)雜多樣代謝路徑，從根本上說，是由微生物

所決定。（3）微生物主要經(jīng)過酶促反應(yīng)，將有機(jī)磷農(nóng)藥分解為無毒或者低毒化合物。研究發(fā)覺，利用有機(jī)磷農(nóng)藥降解酶凈化農(nóng)藥比利用微生物菌體更有效。①微生物群體中，最初降解酶基因是因?yàn)?/p>

而產(chǎn)生。從微生物中提取到一個(gè)降解酶后，需要確定在何種環(huán)境中該酶活性高，檢測(cè)酶活性高低指標(biāo)能夠是

。②從天然菌株中提取降解酶含量低，成本高，難以大量應(yīng)用，科學(xué)家經(jīng)過基因工程處理了這一難題。他們?cè)谌〉媒到饷富蚝?，?jīng)過

技術(shù)對(duì)該基因進(jìn)行大量擴(kuò)增，再利用

酶、

酶和運(yùn)載體等作為基本工具，經(jīng)過一定伎倆構(gòu)建

，并將其導(dǎo)入大腸桿菌體內(nèi)，從而實(shí)現(xiàn)了高效表示。③天然降解酶對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥降解率比較低，不能到達(dá)預(yù)期效果，科學(xué)家對(duì)降解酶特定部位氨基酸序列進(jìn)行重新設(shè)計(jì)、改造，顯著提升了其降解能力，這項(xiàng)技術(shù)稱為

。選擇（或者保留）基因多樣性（或者遺傳多樣性）基因突變單位時(shí)間中反應(yīng)物降低許（或者單位時(shí)間中產(chǎn)物增加量、有機(jī)磷農(nóng)藥降解速率）PCR

限制酶）DNA連接酶目標(biāo)基因表示載體蛋白質(zhì)工程第33頁1.從幾千年前到現(xiàn)在，酶制劑就安全地在被使用在工業(yè)、美容和口腔護(hù)理產(chǎn)品、紡織品、食品（如酸奶酪）以及芝士、啤酒和白酒等發(fā)酵生產(chǎn)過程中。以下各項(xiàng)中，不屬于酶制劑是（

）A．蛋白酶

B．脂肪酶

C．淀粉酶

D．麥芽糖酶4．下表是某種生物活性洗衣粉成份及使用方法說明，以下對(duì)資料表明信息了解不正確是（

）A．這種洗衣粉較易去除衣服上蛋清污漬B．該蛋白酶在60℃以上將會(huì)失去活性C．這種洗衣粉可除去衣料上各種污漬D．這種洗衣粉不能用于洗滌真絲織物D

C

第34頁①將果膠酶與蘋果泥分裝于不一樣試管，在10％水浴中恒溫處理l0min(如圖A)。②將步驟①處理后果膠酶和蘋果泥混合，再次在10℃水浴中恒溫處理l0min(如圖B)③將步驟②處理后混合物過濾，搜集濾液，測(cè)量汁量(如圖C)。④在不一樣溫度條件下重復(fù)以上試驗(yàn)步驟，并統(tǒng)計(jì)果汁量以下：

依據(jù)上述試驗(yàn)，請(qǐng)分析回答以下問題：(1)果膠酶能破除細(xì)胞壁，是因?yàn)楣z酶能夠促進(jìn)細(xì)胞壁中

水解。(2)試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)溫度為

時(shí)果汁量最多，此時(shí)果膠酶活性

。當(dāng)溫度再升高時(shí)，果汁量降低，說明

。(3)試驗(yàn)步驟①目標(biāo)是

。溫度/℃

10

20

30

40

50

60

70

80果汁量/ml

8

13

15

25

15

12

ll

10Ⅱ．工業(yè)生產(chǎn)果汁時(shí)，經(jīng)常利用果膠酶破除果肉細(xì)胞壁以提升出果汁率。為研究溫度對(duì)果膠酶活性影響，某學(xué)生設(shè)計(jì)了以下試驗(yàn)：果膠40℃最高酶活性降低防止果汁和果膠酶混合時(shí)影響混合物溫度，從而影響果膠酶活性第35頁10．某化工廠最新產(chǎn)生了一個(gè)高效加酶洗衣粉，準(zhǔn)備投放市場(chǎng)，其包裝印有以下部分說明。成份：含最新高效堿性蛋白酶。特點(diǎn)：洗滌奶漬、血漬等效率是普通洗衣粉數(shù)倍。使用方法：洗滌前先將衣物浸于含有該洗衣粉水內(nèi)數(shù)小時(shí)，使用溫水效果更佳。注意：切勿用于絲質(zhì)及羊毛衣料。用后徹底清洗雙手。該地域質(zhì)檢部門為證實(shí)該洗衣粉是否有功效，從化工廠提取部分洗衣粉樣品做了以下試驗(yàn)：以下說法中，不正確是（

）A．此題中自變量是洗衣粉溶液是否煮沸過，A組是對(duì)照組B．最正確試驗(yàn)結(jié)果是A組膠片上蛋白膜快速消失C．膠片上蛋白膜消失原因是堿性蛋白酶催化作用緣故D．洗衣粉經(jīng)過0℃和75℃處理后，溫度再度回到45℃，二者催化作用已不能恢復(fù)D第36頁1.甲、乙、丙是三種微生物，下表Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用來培養(yǎng)微生物三種培養(yǎng)基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生長(zhǎng)繁殖；甲能在Ⅰ中正常生長(zhǎng)繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生長(zhǎng)繁殖，甲、丙都不能。以下說法正確是

（

）A．甲、乙、丙都是異養(yǎng)微生物

B．甲、乙都是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物C．甲是固氮微生物、乙是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物D．甲是異養(yǎng)微生物、乙是固氮微生物、丙是自養(yǎng)微生物C

2.以下是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”試驗(yàn)操作敘述，其中錯(cuò)誤是（）A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B．取104、105、106倍土壤稀釋液和無菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上C．將試驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)24～48小時(shí)D．確定對(duì)照組無菌后，選擇菌落數(shù)在300以上試驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)D

3.以下對(duì)果膠酶作用敘述中，錯(cuò)誤是(

)A．果膠酶是一個(gè)催化劑，能夠改變反應(yīng)速度B．在果汁中加入果膠酶后可使果汁變得澄清C．果膠酶能將乳糖醛酸分解成半乳糖醛酸D．果膠酶能瓦解植物細(xì)胞壁及胞間層C

第37頁4.高中生物學(xué)試驗(yàn)中，在接種時(shí)不進(jìn)行嚴(yán)格無菌操作對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響最大一項(xiàng)是()A．將少許干酵母加入到新鮮葡萄汁中B．將毛霉菌液接種在切成小塊鮮豆腐上C．將轉(zhuǎn)基因植物葉片接種到無菌培養(yǎng)基上D．將土壤浸出液涂布在無菌選擇培養(yǎng)基上C

5.作為萃取胡蘿卜素有機(jī)溶劑，哪一項(xiàng)不符合試驗(yàn)要求()A．能充分溶解色素B．與水混溶C．對(duì)人無毒D．易與產(chǎn)品分離B

第38頁6.選擇培養(yǎng)是微生物學(xué)中最強(qiáng)有力技術(shù)伎倆之一。主要是指利用不一樣微生物間生命活動(dòng)特點(diǎn)不一樣，制訂環(huán)境條件，使僅適應(yīng)該條件微生物旺盛生長(zhǎng)，從而使其在群落中數(shù)量大大增加，人們能夠更輕易地從自然界中分離到所需特定微生物。下列圖描述了采取富集方法從土壤中分離能降解對(duì)羥基苯甲酸微生物試驗(yàn)過程。利用選擇培養(yǎng)技術(shù)從土壤中分離能降解對(duì)羥基苯甲酸微生物(1)本試驗(yàn)所需培養(yǎng)基按功效分屬于____________，碳源為___________。(2)試驗(yàn)原理是：___________________________________________________。(3)①→③重復(fù)培養(yǎng)目標(biāo)是：__________________________________。(4)⑥和⑦屬于對(duì)照組是_____組，設(shè)置對(duì)照目標(biāo)是____________________。(5)⑤→⑥采取單菌落挑取法，接種到⑥培養(yǎng)基中，在操作過程中為預(yù)防雜菌污染應(yīng)注意事項(xiàng)是（寫出二條以上）：____________________________________。選擇培養(yǎng)基對(duì)羥基苯甲酸利用以對(duì)羥基苯甲酸為惟一碳源選擇培養(yǎng)基，經(jīng)選擇培養(yǎng)，選擇出能降解對(duì)羥基苯甲酸微生物增大分解對(duì)羥基苯甲酸微生物百分比（擴(kuò)大目標(biāo)菌數(shù)量）⑥說明經(jīng)過選擇培養(yǎng)確實(shí)得到了欲分離目標(biāo)微生物

接種環(huán)在火焰上灼燒滅菌，燒紅接種環(huán)在空氣中冷卻；打開皿蓋時(shí)只打開一部分；試管口不離開酒精燈火焰附近；挑取菌落接種到試管中后塞好棉塞。第39頁請(qǐng)分析回答以下問題：(1)無菌技術(shù)主要經(jīng)過消毒和滅菌來防止雜菌污染。慣用滅菌方法有____________滅菌、干熱滅菌和_________滅菌。(2)稀釋涂布平板法分離純化土壤中微生物正確操作步驟是()①土壤取樣

②稱取10g土壤加入盛有90mL無菌水錐形瓶中制備土壤提取液

③吸收0.1mL溶液進(jìn)行平板涂布

④依次稀釋至101、102、103、104、105、106、107稀釋度A．①②③④B．①③②④C．①②④③D．①④②③(3)利用酵母菌將葡萄汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，能夠用重鉻酸鉀來檢驗(yàn)，在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈______色。在發(fā)酵過程中，伴隨酒精度提升，發(fā)酵液逐步展現(xiàn)深紅色，原因是______________________．(4)從野生酵母菌群中分離純化酵母菌，最常使用接種方法是____________和________________兩種。酵母菌適合生活在偏酸性環(huán)境，而放線菌則適合生活在偏堿性環(huán)境中，分離二者所用培養(yǎng)基稱為____________。(5)在腐乳制作過程中，起主要作用微生物是____________。(6)腐乳制作過程中影響其風(fēng)味和品質(zhì)原因有哪些()①鹽用量

②酒種類和用量③發(fā)酵溫度

④發(fā)酵時(shí)間

⑤香辛料用量A．①②③④⑤B．①②③C．①②⑤D．③④灼燒高壓蒸汽C

灰綠紅葡萄皮色素進(jìn)入發(fā)酵液平板劃線法稀釋涂布平板法選擇培養(yǎng)基毛霉A

第40頁葡萄發(fā)酵可產(chǎn)生果酒、果醋，請(qǐng)利用相關(guān)知識(shí)回答以下問題：（1）以下列圖表示果酒和果醋制作過程中物質(zhì)改變，④過程需要__________適宜條件。（2）將葡萄榨成汁后分別裝入對(duì)應(yīng)發(fā)酵瓶中，在溫度等適宜條件下進(jìn)行發(fā)酵，以下列圖所表示。發(fā)酵過程中，每隔一段時(shí)間均需排氣一次。據(jù)圖分析，操作錯(cuò)誤是__________，發(fā)酵結(jié)束后，檢驗(yàn)甲發(fā)酵過程中產(chǎn)物方法是_____________________。（3）以下列圖是采取純化酵母菌培養(yǎng)兩種接種方法接種后培養(yǎng)效果圖。判斷圖A所用接種方法依據(jù)是______________，圖B效果接種方法是______________。（4）自己在家中制作果醋很輕易腐敗，而包裝瓶上寫著105℃高溫瞬時(shí)果醋瓶上寫著“不含任何防腐劑，最長(zhǎng)保質(zhì)期為一年”，其中奧秘是_____________。（5）在下列圖中用曲線表示正常果酒發(fā)酵階段酵母菌種群個(gè)體數(shù)量改變情況。氧氣、30～35℃甲、丙在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈灰綠色稀釋涂布平板法形成菌落分布較均勻平板劃線法高溫殺死了微生物第41頁如圖為分離并統(tǒng)計(jì)分解纖維素微生物試驗(yàn)流程，據(jù)此回答相關(guān)問題：(1)要從富含纖維素環(huán)境中分離纖維素分解菌，從高溫?zé)崛袑ふ夷蜔峋@說明__________________________________________________________。(2)接種微生物最慣用是平板劃線法和稀釋涂布平板法，本試驗(yàn)宜采取______________法。(3)用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，最好選擇菌落數(shù)在___________間平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。若統(tǒng)計(jì)出在一稀釋倍數(shù)為105平板上平均菌落數(shù)為30個(gè)，所用稀釋液體積為0.2mL，則每克樣品中菌落數(shù)為___________________。(4)在分離尿素分解菌所用培養(yǎng)基中可加入___________________指示劑，依據(jù)指示劑顏色可判定某種細(xì)菌能否分解尿素，若有分解尿素細(xì)菌，培養(yǎng)基將會(huì)展現(xiàn)____________。依據(jù)目標(biāo)菌株對(duì)生存環(huán)境要求，到對(duì)應(yīng)環(huán)境中去尋找釋稀涂布平板30～3001.5×107個(gè)酚紅紅色第42頁KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2gFeCl30.1gX1g維生素微量瓊脂15g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到100mL苯胺是致癌物質(zhì)，土壤中有分解苯胺異養(yǎng)型細(xì)菌，下表是篩選分解苯胺異養(yǎng)型細(xì)菌培養(yǎng)基配方。（1）此培養(yǎng)基中成份X除了為目標(biāo)菌提供能源外，還能提

和

，該培養(yǎng)基從作用看屬于

。（2）下列圖是采取純化微生物培養(yǎng)兩種接種方法接種后培養(yǎng)效果