T-GZTPA 0013-2022 貴州茶葉中草甘膦的快速檢測(cè)方法膠體金法

RapidRapiddeterminationofglyphosateinGuizhouteabycolloidalgoldmethod2022-10-10發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本標(biāo)準(zhǔn)的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本標(biāo)準(zhǔn)由貴州省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心提出。本標(biāo)準(zhǔn)由貴州省綠茶品牌發(fā)展促進(jìn)會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：貴州省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心、貴州國(guó)芯生物科技有限公司、貴州省綠茶品牌發(fā)展促進(jìn)會(huì)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：蔡滔、熊勝利、李俊、王震、劉凱、徐嘉民、方舒婷、丁靜、周雪麗、王藝蓉、劉佳、蘇美丞、令狐克勇、何國(guó)書(shū)、楊梅、羅維超。1貴州茶葉中草甘膦的快速檢測(cè)方法膠體金法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了草甘膦農(nóng)藥殘留的膠體金檢測(cè)方法的原理、試劑與設(shè)備、分析步驟、結(jié)果判定。本標(biāo)準(zhǔn)適用于茶葉中草甘膦農(nóng)藥的快速檢測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T2102茶葉抽樣技術(shù)規(guī)范GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和實(shí)驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)與定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理利用免疫測(cè)定中競(jìng)爭(zhēng)法原理，在檢測(cè)區(qū)包被一定量的包被抗原，對(duì)照區(qū)包被膠體金標(biāo)記的羊抗鼠抗體，通過(guò)膠體金標(biāo)記的特異性抗體與試樣中草甘膦以及檢測(cè)區(qū)被固定的草甘膦完全抗原之間的競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，觀測(cè)在試紙條的檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)呈現(xiàn)的反應(yīng)結(jié)果（試紙條出現(xiàn)色帶），然后根據(jù)色帶有無(wú)和顏色深淺，判定檢測(cè)結(jié)果。5試劑與設(shè)備5.1草甘膦膠體金快速檢測(cè)試劑盒，試劑盒中包括試紙條、陽(yáng)性參考品（達(dá)到檢測(cè)限濃度的農(nóng)藥標(biāo)品）、陰性參考品（含0.5%吐溫的0.15M磷酸鹽緩沖液）、甲醇、草甘膦衍生試劑、樣品處理液（0.02MPBSpH7.4磷酸鹽緩沖液）和檢測(cè)液。試紙條用鋁箔袋密封包裝。5.2除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，所有實(shí)驗(yàn)用水為GB/T6682中規(guī)定的二級(jí)5.3天平百分之一電子天平。5.4微量移液器10μLL-200μL，100μL-1000μL。5.5一次性PE手套防水，防油污，防細(xì)菌，耐酸耐堿。25.6離心管2mL離心管、10mL離心管。6分析步驟6.1試樣制備按NY/T2102茶葉抽樣技術(shù)規(guī)范進(jìn)行抽樣，檢測(cè)前帶上一次性PE手套（5.5稱取2.0g±0.05g茶葉樣品，放入10mL離心管（5.6）中，加入5mL甲醇（5.1震蕩后靜置2min，即為樣品提取液。取20μL現(xiàn)配制的的草甘膦衍生化試劑溶液加入一管樣品稀釋液中混勻，再加入100μL樣品提取液混合，搖勻后靜置5min后，即為樣品待檢液。6.2試樣測(cè)定6.2.1撕開(kāi)包裝袋，取出試紙條；6.2.2將70μL待檢液（5.1）滴入試紙條取樣端，待檢液在層析作用下向試紙條的尾端側(cè)向流動(dòng)；6.2.3反應(yīng)5min后，觀察檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)的色帶條數(shù)和顏色深淺；6.2.4用試劑盒內(nèi)的陽(yáng)性參考品（5.1）、陰性參考品（5.1）和檢測(cè)液（5.1）進(jìn)行同樣操作，以協(xié)助結(jié)果判定。7結(jié)果判定對(duì)照陽(yáng)性參考品和陰性參考品的測(cè)定結(jié)果，根據(jù)試紙條檢測(cè)區(qū)（檢測(cè)線）和對(duì)照區(qū)（控制線）色帶有無(wú)和顏色深淺，按照?qǐng)D1和如下原則進(jìn)行結(jié)果判定。7.1在試紙條的質(zhì)控區(qū)未出現(xiàn)色帶，判定為無(wú)效；7.2僅在試紙條質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)一條紅線，判定為陽(yáng)性；7.3在試紙條檢測(cè)區(qū)及質(zhì)控區(qū)各出現(xiàn)一條紅線，判定為陰性；7.4在試紙條質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)一條紅線，檢測(cè)區(qū)現(xiàn)一條模糊的陰影線，判定為臨界值。出現(xiàn)臨界值時(shí)，需重復(fù)檢測(cè)兩次以上。38質(zhì)控參數(shù)檢測(cè)試紙條需滿足：茶葉中草甘膦殘留的檢測(cè)限達(dá)到1mg/kg；陽(yáng)性樣品的符合率≥95%，陰性參考品的符合率≥95%，假陰性率為0，假陽(yáng)性率≤5%；10分鐘內(nèi)完成單次檢測(cè)；在室溫條件下避光保存6個(gè)月以上。9檢測(cè)限和特異性9.1檢測(cè)限茶葉中草甘膦殘留的檢測(cè)限為1mg/kg（GB2763-