酶免疫技術(shù)原理

酶免疫檢測(cè)原理組員：龔希韓翌羅勛李婧李慧常用酶標(biāo)儀及洗板機(jī)Bio-Rad680

全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀MultiskanSpectrum

BIO-RAD1575伯樂洗板機(jī)

美國(guó)貝克曼庫爾特有限公司MW96

酶免疫技術(shù)的原理及特點(diǎn)原理：酶免疫技術(shù)是利用酶催化底物反應(yīng)的生物放大作用，提高特異性抗原－抗體免疫學(xué)反應(yīng)檢測(cè)敏感性的一種標(biāo)記免疫技術(shù)。結(jié)合了抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶高效催化反應(yīng)的專一性。特點(diǎn)：靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好酶標(biāo)記試劑能夠較長(zhǎng)時(shí)間保持穩(wěn)定操作簡(jiǎn)便、對(duì)環(huán)境沒有污染。易與其它技術(shù)偶聯(lián)衍生出適用范圍更廣的新方法。底物顯色定性或定量的分析原理包被，封閉反應(yīng)加入待測(cè)抗體或抗原和酶標(biāo)抗原或抗體洗滌使結(jié)合在固相上的抗原抗體復(fù)合物與未結(jié)合的分離1234一、基本原理1.ELISA檢測(cè)抗原的方法1、已知抗體包3、加酶標(biāo)抗體4、加酶作用的底物2、加待檢物4、加酶作用的底物洗滌洗滌洗滌洗滌①雙抗體夾心法測(cè)抗原1、已知抗體包2、加待檢物無抗3、加酶標(biāo)抗體+-YYYEYEYEYYEYEYEYYYYEYEYEYYYYYYYYYYYYYYYYYY洗滌洗滌②競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原+-YYYYYYEYYEYYYYEYYEYEYEYE2、加待檢物抗原與酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與抗體結(jié)合3、加酶作用的底物不顯色或顯色弱3、加酶作用的底物顯色1、已知抗體包被于載體表面1、已知抗體包被于載體表面2、加待測(cè)物和酶標(biāo)抗原，酶標(biāo)抗原與抗體結(jié)合YE2.ELISA檢測(cè)抗體的方法1、已知抗原吸2、加待檢物3、加酶標(biāo)抗Ig4、加酶作用的底物1、已知抗體吸2、加待檢物3、加酶標(biāo)的抗Ig4、加酶作用的底物洗滌洗滌洗滌洗滌①間接法測(cè)抗體-YEYYYEYEYYYEYYEYYEYYEYYEYEY+②雙抗原夾心法

類似雙抗體夾心法③競(jìng)爭(zhēng)法

類似檢測(cè)抗原的競(jìng)爭(zhēng)法④捕獲法

原理：抗人IgM抗體包被捕獲待測(cè)標(biāo)本中IgM類抗體加入特異性抗原和酶標(biāo)記特異性抗原的抗體底物顯色

酶免疫檢測(cè)儀基本原理酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀的基本工作原理：分光光度計(jì)法其主要結(jié)構(gòu)和光電比色儀相似酶免疫檢測(cè)儀基本原理光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光,進(jìn)入塑料微孔極中的待測(cè)標(biāo)本.該單色光一部分被標(biāo)本吸收,另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測(cè)器上,光電檢測(cè)器將這一待測(cè)標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號(hào).電信號(hào)經(jīng)前置放大,對(duì)數(shù)放大,模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號(hào)處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算,最后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果.ELISA測(cè)定一般要求測(cè)試液的最終體積在250ul以下，用一般的光電比色計(jì)無法完成測(cè)試。酶免疫檢測(cè)儀基本原理酶標(biāo)儀和普通的光電比色計(jì)有以下幾點(diǎn)差異:1.盛裝待測(cè)比色液的容器不再使用比色皿,而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的聚乙烯材料制成,對(duì)抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用,故用它作為固相載體.2.由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過,因此酶標(biāo)儀的光束都是垂直通過待測(cè)溶液和微孔板