免疫學(xué)檢原理及臨床應(yīng)用課件

免疫學(xué)檢測原理

及臨床應(yīng)用一、基于抗原抗體反應(yīng)的檢測方法

㈠抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特點(diǎn)

1.高度特異性

2.抗原抗體結(jié)合的帶現(xiàn)象與可見性

3.可逆性

㈡影響抗原抗體反應(yīng)的因素

1.電解質(zhì)

2.酸堿度

3.溫度

4.抗原和抗體的性質(zhì)前帶現(xiàn)象后帶現(xiàn)象㈢抗原抗體反應(yīng)的基本檢測方法

1凝集反應(yīng)

顆粒性抗原（如細(xì)菌、細(xì)胞）與相應(yīng)抗體，在適當(dāng)電解質(zhì)存在的條件下，經(jīng)過一定時(shí)間后出現(xiàn)肉眼可見凝集塊，稱為凝集反應(yīng)

凝集反應(yīng)種類

⑴直接凝集反應(yīng)

⑵間接凝集反應(yīng)

是將可溶性抗原或抗體吸附于與免疫無關(guān)的

載體上，使之成為致敏載體顆粒，然后與相

應(yīng)抗體或抗原作用，在電解質(zhì)參與下出現(xiàn)的

凝集反應(yīng)

⑶間接凝集抑制反應(yīng)

將可溶性抗原與相應(yīng)抗體預(yù)先作用，然后再

加入致敏載體懸液，由于抗體已被可溶性抗原

結(jié)合，因而致敏顆粒不發(fā)生凝集現(xiàn)象，稱為

間接凝集抑制試驗(yàn)2沉淀反應(yīng)

可溶性抗原（如細(xì)菌浸出液，組織浸出

液和動(dòng)物血清等）與相應(yīng)抗體結(jié)合后，

在電解質(zhì)存在條件下，經(jīng)過一定時(shí)間作

用后，可出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物，稱為

沉淀反應(yīng)

⑴單向擴(kuò)散試驗(yàn)

是一種定量試驗(yàn)，使抗原在含有抗體的瓊脂

介質(zhì)中擴(kuò)散，經(jīng)一定時(shí)間后即可見抗原孔周

圍出現(xiàn)由抗原抗體復(fù)合物形成的沉淀環(huán)。沉

淀環(huán)的直徑與抗原濃度成正比。故試驗(yàn)前應(yīng)

用已知不同濃度標(biāo)準(zhǔn)抗原制成標(biāo)準(zhǔn)曲線（縱

座標(biāo)為沉淀環(huán)直徑，橫座標(biāo)為抗原濃度），

可根據(jù)沉淀環(huán)直徑的大小從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出

待檢樣品中抗原的含量。臨床上常用于測定

IgG、IgM、IgA的含量⑵雙向擴(kuò)散試驗(yàn)

抗原與抗體在瓊脂介質(zhì)中相互擴(kuò)散，如抗原

抗體相應(yīng)且濃度比例適當(dāng)，則在抗原抗體之

間可出現(xiàn)白色沉淀線。一對(duì)相應(yīng)的抗原抗體

只能形成一條沉淀線；多種抗原抗體系統(tǒng)，

測可形成多條沉淀線

⑶免疫電泳

⑷免疫比濁

3補(bǔ)體參與的反應(yīng)

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、溶血空斑試驗(yàn)

4免疫標(biāo)記技術(shù)

免疫標(biāo)記技術(shù)是指用熒光素、酶、同位素或電

子致密物質(zhì)等標(biāo)記抗體或抗原所進(jìn)行的抗原抗

體反應(yīng)

優(yōu)點(diǎn)：特異、敏感、快速、能定性、定量甚

至定位，且易于觀察⑴免疫熒光法

⑵酶免疫測定

酶免疫技術(shù)是通過適當(dāng)?shù)拿复倩瘜W(xué)反應(yīng)和免

疫反應(yīng)，使抗體（或抗原）與酶蛋白分子結(jié)

合，形成酶標(biāo)抗體（或抗原），該結(jié)合物保

留免疫學(xué)活性和酶活性，因而既有抗原抗體

反應(yīng)特異性，又有酶促反應(yīng)的特異性。酶分

解底物后的顯色深淺可反映標(biāo)本中抗原或抗

體的含量

常用酶

辣根過氧物酶、堿性磷酸酶

*酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

間接法

用于測抗體

包被抗原→加待測標(biāo)本→加酶標(biāo)抗體→加底物

→終止反應(yīng)→測OD值

雙抗體夾心法

用于測抗原

包被抗體→加待測標(biāo)本→加酶標(biāo)抗體→加底物

→終止反應(yīng)→測OD值

*酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)

*BSA-ELISA

⑶免疫組化技術(shù)

⑷放射免疫測定法

⑸化學(xué)發(fā)光免疫分析

⑹免疫印跡法二免疫細(xì)胞檢測

㈠免疫細(xì)胞及其亞類計(jì)數(shù)

㈡淋巴細(xì)胞功能測定

1體外試驗(yàn)

⑴淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)

⑵細(xì)胞毒試驗(yàn)

⑶