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DB33PurityidentificationofMuskmelonvarietyusingmolecularmarkeranalysis浙江省質量技術監(jiān)督局發(fā)布I本標準起草單位：寧波市農業(yè)科學研究院、寧波市種1厚皮甜瓜種子純度分子標記鑒定方法農業(yè)部1485號公告-4-2010轉基因植物及其產品成分檢測品種在特征特性方面典型一致的程度，用本品種的種子數占供檢本作物樣品種子數的百分率表示僅能檢測顯性等位基因，不能夠區(qū)分純合和雜合基因型的遺傳標記位點。2以基因組DNA為模板，以單個人工合成的隨機多態(tài)核目不同，PCR擴增后獲得的產物長度不同，通過高分辨率瓊脂糖凝膠電泳分離、溴化乙錠染色后，在紫或者擴增片段大小不同的差異。這些差異可利用電泳圖譜ACCTGGACACACACCGGAACSSR（SimpleSequenceRepeat）引物名稱、序列及差異片3ATCCAACTCGACCAAGAAAC5.2瓊脂糖稱取80.0g氫氧化鈉（NaOH），先用160），解后，冷卻至室溫，用按本標準5.4配置氫氧化鈉溶液調pH至8.0，加水定容至100mL。在103.4kPa5.61mol/L三羥甲基氨基甲稱取121.1g三羥甲基氨基甲烷（Tris）溶解于800mLpH至8.0，加水定容至1000mL。在103.4kPa（121℃)條件下滅菌20min。分別量取10mL按本標準5.6配置的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸溶液和乙酸二鈉溶液，加水定容至1000mL。在103.4配置的乙二胺四乙酸二鈉溶液，加水定容至1000mL。使用時用水稀釋成05.9加樣緩沖液稱取1g水溶性鈉型溴酚藍于100mL水中，渦旋直到完全溶解，配制成0.15%溴酚藍。稱取1g二甲二甲基苯腈藍，加入100μL按本標準5.5配置的乙4將濃度為2.5mmol/L的dATP、dTTP、d抽樣結束后，播種，待第一片真葉長至0.5cm～1cm時，即可單株取真葉樣品，體積(μL）//5體積(μL）/5/）；電泳結束后，取出瓊脂糖凝膠，置于凝膠成像儀或紫8.1.1標記的差異位點顯示共顯性，供試材料的帶型與雜種一代雙親之一相同，則表明該材料在差異位點雜交不成功，判斷為雜株；同

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