VLP形式的跨膜蛋白在CAR-T免疫治療方面的研究進展

VLP形式的跨膜蛋白在CAR-T免疫治療方面的研究進展前

言膜蛋白是與細胞膜磷脂雙分子層結合的蛋白質，在生命活動中具有重要作用，人類的許多疾病與膜蛋白功能異常有關，據統(tǒng)計目前50%的小分子藥物的受體為膜蛋白，所以膜蛋白是重要的藥物靶點。義翹神州已搭建基于HEK293表達系統(tǒng)的VLP技術平臺，能夠將目的膜蛋白完整展示在VLP表面，已上線的產品GPRC5D、Claudin18.2、Claudin6等，與抗體結合均展示出良好的活性。義翹神州還可為有需求的客戶提供定制服務，助力藥物研發(fā)。01跨膜蛋白與VLP技術平臺跨膜蛋白具有多種生理功能，包括蛋白連接、識別、轉運、錨定和轉導等，其功能的異常與諸多的疾病相關，是重要的藥物靶點。然而表達量低、體外不溶、純化不穩(wěn)定、難保持天然構象等問題的存在，限制了跨膜蛋白在藥物開發(fā)方面的進程。病毒樣顆粒（virus-likeparticles,VLPs）是由病毒的衣殼蛋白通過自組裝而形成的納米級顆粒（直徑約100～300納米），不含病毒核酸，不能進行自主復制，生產操作過程中較為安全。VLPs最初應用在原子水平上分析病毒結構，隨后研究發(fā)現其能夠將完整天然構象的膜蛋白展示在類病毒顆粒表面，產生非常適合免疫和抗體篩選的全長跨膜蛋白。義翹神州聚焦于膜蛋白產品的開發(fā)，搭建了基于HEK293表達系統(tǒng)的VLP技術平臺，能夠將目的膜蛋白完整展示在VLP表面，使其能夠像普通可溶蛋白一樣用于免疫和抗體篩選檢測，助力藥物研發(fā)。02跨膜蛋白在CAR-T研究中的應用四次跨膜蛋白：ClaudinClaudins（CLDN）是一類存在于上皮和內皮中的整合素膜蛋白，主要功能有細胞間黏附、維持細胞穩(wěn)態(tài)、調節(jié)細胞通透性、調節(jié)細胞增殖及分化。Claudin蛋白為4次跨膜蛋白。Claudin的異常表達導致多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，如Claudin1與結腸癌、Claudin10與肝癌、Claudin18與胃癌。Claudin作為細胞表面蛋白，可用于多種治療策略的靶點或評估預后價值。Claudin蛋白結構的描述（源自參考文獻）1:Claudin18.2Claudin18.2作為一個高度特異性的細胞表面分子，在正常胃組織中僅表達于已分化的上皮細胞，但在原發(fā)性胃癌、轉移性胃癌、胰腺癌、食管癌、卵巢癌、肺癌等多種實體瘤中高表達，例如50%-80%的胃癌患者中存在Claudin18.2的表達。Claudin18.2暴露的胞外結構可與抗體結合，使其成為理想的單克隆抗體開發(fā)靶點，尤其是實體瘤免疫治療。CT041是一種CAR-T細胞療法，目前已在晚期胃腺癌或胰腺癌患者中開展臨床試驗。2：Claudin6Claudin6是繼Claudin18.2之后，CLDN家族中另一個癌癥治療的潛力靶點。Claudin6由上皮細胞表達，在組織發(fā)育、維持緊密連接完整性、上皮組織的通透性等方面發(fā)揮作用。研究發(fā)現Claudin6在多種癌癥和實體瘤中特異性高表達，在正常組織中不表達或低表達，有作為癌胚抗原和治療靶點的潛力。BNT211是一種靶向Claudin6的CAR-T細胞療法，在BioNTech的早期臨床開發(fā)中用于治療實體瘤，目前處于臨床I/II期。七次跨膜蛋白：GPCRG蛋白偶聯受體（GPCR），也稱為七次跨膜受體或七螺旋受體，是真核生物中最大和最多樣化的膜受體蛋白家族。對這些受體的研究和發(fā)現極大地影響了現代醫(yī)學，據估計，目前市場上約50%的藥物靶點是GPCRs。GPCRs結構及信號通路概述（源自參考文獻）1：GPRC5DGPRC5D屬于GPCRs的一種孤兒受體，其配體和信號傳導機制尚未確定。在正常組織中GPRC5D僅表達于有免疫赦免性的毛囊區(qū)域，但在原代多發(fā)性骨髓瘤（MM）細胞表面高表達。數據顯示65%的MM患者（54/83）中GPRC5D的表達超過閾值，表明GPRC5D是MM治療的潛在靶點。作為候選藥物靶向CAR-T細胞治療MM時安全有效，其體內活性等同于抗BCMA的CAR-T細胞。BCMA抗原丟失導致的腫瘤復發(fā)模型中，靶向GPRC5D的CAR-T細胞具有抗腫瘤活性。2：SSTR2生長抑素Ⅱ型受體SSTR2屬于GPCR，可阻止原癌基因的激活，抑制細胞的增殖，也可通過MAPK途徑使酪氨酸激酶失活，從而阻止細胞的增殖。近年來SSTR2在肢端肥大癥、消化道出血和神經內分泌腫瘤、神經母細胞瘤等治療方面應用廣泛。SSTR2在神經內分泌腫瘤（NETs）中過表達，是診斷和治療的重要靶點。在小鼠模型中，抗SSTR的CAR-T細胞對NET細胞系具有靶向細胞毒性，可有效減緩腫瘤的生長速度，特異性殺傷腫瘤細胞。3：CXCR4CXCR4是一種趨化因子受體，同樣屬于GPCR，對腫瘤的生長、侵襲、血管生成、轉移和對治療藥物的耐藥性起著重要作用，而且CXCR4過度表達還與許多癌癥亞型的不良預后相關。CXCR4廣泛表達于實體腫瘤和癌癥干細胞，在腫瘤細胞上具有較高的自我更新能力和強致瘤性。抑制CXCR4可加強T細胞和NK細胞浸潤，減少癌癥相關成纖維細胞募集，是增強CAR-T和CAR-NK細胞治療的潛在策略。?義翹神州全長跨膜蛋白產品義翹神州搭建了基于HEK293表達系統(tǒng)的VLP技術平臺，用于生產全長多次跨膜蛋白，已成功開發(fā)GPRC5D、Claudin6、Claudin18.2、SSTR2等蛋白，與抗體結合展示出良好的活性，具有如下優(yōu)勢：01全長蛋白，構象完整02免疫原性高，適合抗體篩選03可用于多種檢測，如ELISA、SPR、BLI等產品驗證數據HumanGPRC5D-VLPProtein,Cat:24447-HNAH高活性ImmobilizedHumanGPRC5D-VLP(FullLength)Protein(Cat:24447-HNAH)at5μg/mL(100μL/well)canbindanti-GPRC5DAntibody,theEC50

is3-10ng/mLHumanClaudin18.2-VLPProtein,Cat:30025-HNAH高活性ImmobilizedHumanClaudin18.2-VLP(FullLength)Protein

(Cat:30025-HNAH)

at5μg/mL(100μL/well)canbindAnti-Human

Claudin18.2

Antibody,HumanIgG1,theEC50

is5-20ng/mL.更多VLP跨膜蛋白貨號靶點種屬活性（EC50）24447-HNAHGPRC5DHuman3-10ng/mL24447-HNAH-BGPRC5DHuman4-12ng/mL16658-HNAHClaudin6Human2-10ng/mL30025-HNAHClaudin18.2Human5-20ng/mL30097-HNAHSSTR2Human5-20ng/mL11644-HNAHSSTR2Human10-30ng/mL11325-HNAH

CXCR4Human10-30ng/mL17646-HNA