《肉及肉制品中菌落總數(shù)的快速測定 測試片法》

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SSFS

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/SSFSXXXX—2023

肉及肉制品中菌落總數(shù)的快速測定

測試片法

RapidaerobicplatecountinMeatandmeatproducts

Dryrehydratablefilmmethod

（征求意見稿）

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

上海市食品學(xué)會??發(fā)布

T/SSFSXXXX—2023

肉及肉制品中菌落總數(shù)的快速測定

測試片法

1范圍

本文件規(guī)定了肉及肉制品中菌落總數(shù)測試片和快速菌落總數(shù)測試片檢測方法。

本文件適用于肉及肉制品中菌落總數(shù)的快速測定，其他類別食品也可參照執(zhí)行。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB4789.2食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測定

GB4789.28食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求

3術(shù)語和定義

GB4789.2、GB7718界定的術(shù)語和定義適用于本文件。

4原理

菌落總數(shù)測試片/快速菌落總數(shù)測試片為預(yù)制型的培養(yǎng)基系統(tǒng)，含有平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基的主要營

養(yǎng)成分和功能性成分（顯色劑、冷水可凝膠等），微生物在測試片上生長時，代謝產(chǎn)物與測試片培養(yǎng)基

中的指示劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，從而使微生物菌落著色。

5儀器和設(shè)備

恒溫培養(yǎng)箱:36℃±1℃。

電子天平:感量0.1g。

均質(zhì)器。

冰箱:2℃～8℃。

振蕩器。

pH計或精密pH試紙:精密度0.1。

測試片壓板。

6試劑和耗材

MicroFast?菌落總數(shù)測試片/快速菌落總數(shù)測試片（見附錄A.1、A.2、A.3）。

磷酸鹽緩沖液（見按附錄A.4）。

生理鹽水（見按附錄A.5）。

1mol/LNaOH溶液（見附錄A.6）。

1mol/LHCl溶液（見附錄A.7）。

無菌吸管:1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸頭。

無菌錐形瓶:容量250mL。

無菌均質(zhì)杯或均質(zhì)袋。

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7操作步驟

樣品的制備

7.1.1稱取25g樣品置于盛有225mL無菌磷酸鹽緩沖液或無菌生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000

r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)

器拍打1min～2min，制成1:10的樣品勻液。

7.1.2樣品勻液的pH應(yīng)在5.0～8.5之間，必要時用1mol/LNaOH或1mol/LHCl調(diào)節(jié)樣品勻液的

pH。

樣品的稀釋

吸取1:10樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端

不要觸及稀釋液面），在振蕩器上振蕩混勻，制成1:100的樣品勻液，以此類推，制備10倍系列稀釋

樣品勻液，每稀釋一次，換用1次1mL無菌吸管或吸頭。

接種

7.3.1根據(jù)樣本的衛(wèi)生狀況選擇1～3個適宜的稀釋度進(jìn)行接種檢測。

7.3.2測試片平放在水平實(shí)驗(yàn)臺上，緩慢揭開上膜。將1mL樣品勻液垂直滴加在測試片中心區(qū)域。緩

慢蓋上上膜，盡量避免氣泡的產(chǎn)生。上膜直接落下覆蓋即可。將壓板放在測試片中央，輕輕壓下，使樣

液均勻分布于圓形培養(yǎng)基上，拿起壓板，靜置2min，再移動測試片。

7.3.3每個稀釋度接種兩張測試片。同時吸取1mL無菌磷酸鹽緩沖液或無菌生理鹽水作空白對照。

培養(yǎng)

7.4.1菌落總數(shù)測試片法

將測試片正置于培養(yǎng)箱內(nèi)，最多可堆疊至20片，置于36℃±1℃溫度下，培養(yǎng)48h±2h。

7.4.2快速菌落總數(shù)測試片法

將測試片正置于培養(yǎng)箱內(nèi)，最多可堆疊至20片，置于36℃±1℃溫度下，培養(yǎng)24h±2h。

計數(shù)

7.5.1培養(yǎng)后，菌落總數(shù)測試片上計數(shù)紅色菌落；快速菌落總數(shù)測試片上計數(shù)紅色及藍(lán)色菌落。可目

視或標(biāo)準(zhǔn)菌落計數(shù)器或其它的照明放大鏡進(jìn)行計數(shù)，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計數(shù)以菌落

形成單位（CFU）表示。

7.5.2選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU之間的測試片進(jìn)行計數(shù)；低于30CFU的測試片記錄具體菌落數(shù)；

當(dāng)測試片上菌落數(shù)很高時，整個測試片會變成紅色或藍(lán)色，結(jié)果可記錄為“多不可計”。

8結(jié)果與報告

結(jié)果的計算方法和報告規(guī)則按照GB4789.2。

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A

A

附錄A

（規(guī)范性）

培養(yǎng)基和試劑

A.1MicroFast?菌落總數(shù)測試片（AC）

主要營養(yǎng)成分：蛋白胨，酵母粉，葡萄糖，氯化鈉等。

功能性成分：氯化三苯基四氮唑（Triphenyltetrazoliumchloride，TTC），緩沖鹽等。

輔助材料：冷水可凝膠，熱熔膠，合成紙，泡棉，PC膜等。

A.2MicroFast?快速菌落總數(shù)測試片（RAC）

營養(yǎng)成分：蛋白胨，酵母粉，葡萄糖，氯化鈉等。

功能性成分：TTC，糖苷酶底物，氨基酸，維生素，緩沖鹽等。

輔助材料：冷水可凝膠，熱熔膠，合成紙，泡棉，PC膜等。

A.3測試片存儲條件

未開封時，最佳保藏溫度為2℃～8℃，并在保質(zhì)期內(nèi)用完。在濕度較高的環(huán)境中，請先將測試片

恢復(fù)至室溫后開封。開封后，如未用完，需要將測試片放回袋中，鋁箔袋二次折疊后用膠布黏上或封口

夾封口，避光保存（不可冷藏），并于一個月之內(nèi)用完。運(yùn)輸或短期保存時，將測試片置于常溫即可。

A.4磷酸鹽緩沖液

成分：磷酸二氫鉀（KH2PO4）34.0g，蒸餾水500mL。

制法：貯存液：稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中，用大約175mL的1mol/L氫氧化

鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.2，用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。

稀釋液：取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15min。

A.5生理鹽水

成分：氯化鈉8.5g，蒸餾水1000mL。

制法：稱取8.5g氯化鈉溶于1000mL蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min。

A.61mol/LNaOH溶液

成分：NaOH40.0g，蒸餾水1000mL。

制法：稱取40.0g氫氧化鈉溶于1000mL無菌蒸餾水中。

A.71mol/LHCl溶液

成分：HCl90mL，蒸餾水1000mL。

制法：移取濃鹽酸90mL，用無菌蒸餾水稀釋至1000mL。

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B

B

附錄B

（規(guī)范性）

MicroFast?菌落總數(shù)測試片的驗(yàn)收操作

B.1參照標(biāo)準(zhǔn)

應(yīng)符合GB4789.28的規(guī)定要求。

B.2文件信息驗(yàn)收

?家提供的配?中主要營養(yǎng)成分與平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基配方?致，質(zhì)控報告應(yīng)符合GB4789.28中

平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基質(zhì)量控制要求。

B.3產(chǎn)品外觀驗(yàn)收

測試片包裝完整，無破損，在效期內(nèi)。

B.4技術(shù)指標(biāo)驗(yàn)收

B.4.1菌落特征：菌落在菌落總數(shù)測試片顯示紅色，菌落在快速菌落總數(shù)測試片顯示紅色及藍(lán)色。

B.4.2非選擇分離和計數(shù)固體培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長率不小于0.7。

B.5技術(shù)指標(biāo)驗(yàn)收操作

B.5.1標(biāo)準(zhǔn)菌株

?腸埃希氏菌ATCC25922（或其他等效標(biāo)準(zhǔn)菌株）、金黃色葡萄球菌ATCC6538（或其他等效標(biāo)

準(zhǔn)菌株）、枯草芽胞桿菌ATCC6633（或其他等效標(biāo)準(zhǔn)菌株）。

B.5.2培養(yǎng)基和試劑

胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）、菌落總數(shù)測試片（AC）、快速菌落總數(shù)測試片（RAC）、胰酪??

胨培養(yǎng)基（TSA）、?菌生理鹽水。

B.5.3檢驗(yàn)程序

B.5.3.1菌懸液制備

接種大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽胞桿菌的新鮮培養(yǎng)物至TSB液體培養(yǎng)基中或采?其他

?法，培養(yǎng)條件為36℃培養(yǎng)18h～24h，取1mL?無菌生理鹽水10倍遞增稀釋制成含菌數(shù)50CFU/mL～

200CFU/mL的菌懸液，備?。

也可直接使?符合要求的即?型定量標(biāo)準(zhǔn)菌株，具體操作參照?產(chǎn)?商說明書。

B.5.3.2接種及培養(yǎng)

B.5.3.2.1通則：選擇適宜稀釋度的菌懸液，分別接種于測試?和無菌培養(yǎng)?，接種量均為1mL，每

?稀釋度做2個平?。同時，吸取1mL無菌稀釋液分別加?無菌培養(yǎng)?和測試?內(nèi)作空?對照。

B.5.3.2.2平板法：將15mL～20mL冷卻?46℃～50℃的TSA傾注?菌培養(yǎng)?，轉(zhuǎn)動培養(yǎng)?使其混

合均勻，?平放置待瓊脂凝固后，倒置放?36℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h±2h。

B.5.3.2.3測試片：應(yīng)按照7.3～7.4操作。

B.5.3.3計數(shù)

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選擇菌落數(shù)適中的平皿、測試片進(jìn)行計數(shù)，按式(B.1)計算生長率。

·······················································(B.1)

??

式中：??=??

——生長率；

——測試片上得到的菌落總數(shù)；

?

?——TSA培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數(shù)（該菌落總數(shù)應(yīng)≥100CFU）。

??

B.5.3?.?4測試片標(biāo)準(zhǔn)顯色示例

菌落總數(shù)測試片驗(yàn)收示意圖如圖B.1所示?？焖倬淇倲?shù)測試片驗(yàn)收示意圖如圖B.2所示。

圖B.1菌落總數(shù)測試片驗(yàn)收示意圖

圖B.2快速菌落總數(shù)測試片驗(yàn)收示意圖

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C

附錄C

（資料性）

菌落總數(shù)快速測定測試片法評價結(jié)果

以GB4789.2-2022傾注平板計數(shù)瓊脂的方法為參考方法，對菌落總數(shù)測試片法和快