2025年高考生物一輪復習之基因工程

第1頁（共1頁）2025年高考生物一輪復習之基因工程一．選擇題（共15小題）1．γ﹣氨基丁酸在醫(yī)藥等領域有重要的應用價值。利用L﹣谷氨酸脫羧酶（GadB）催化L﹣谷氨酸脫羧是高效生產γ﹣氨基丁酸的重要途徑之一。研究人員采用如圖方法將釀酒酵母S的L﹣谷氨酸脫羧酶基因（gadB）導入生產菌株E.coliA，構建了以L﹣谷氨酸鈉為底物高效生產γ﹣氨基丁酸的菌株E.coliB。下列敘述正確的是（）A．上圖表明，可以從釀酒酵母S中分離得到目的基因gadB B．E.coliB發(fā)酵生產γ﹣氨基丁酸時，L﹣谷氨酸鈉的作用是供能 C．E.coliA和E.coliB都能高效降解γ﹣氨基丁酸 D．可以用其他酶替代NcoⅠ和KpnⅠ構建重組質粒2．下列關于“DNA粗提取與鑒定”實驗的敘述，錯誤的是（）A．實驗中如果將研磨液更換為蒸餾水，DNA提取的效率會降低 B．利用DNA和蛋白質在酒精中的溶解度差異，可初步分離DNA C．DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同，該原理可用于純化DNA粗提物 D．將溶解的DNA粗提物與二苯胺試劑反應，可檢測溶液中是否含有蛋白質雜質3．關于“DNA的粗提取與鑒定”實驗，下列說法正確的是（）A．整個提取過程中可以不使用離心機 B．研磨液在4℃冰箱中放置幾分鐘后，應充分搖勻再倒入燒杯中 C．鑒定過程中DNA雙螺旋結構不發(fā)生改變 D．僅設置一個對照組不能排除二苯胺加熱后可能變藍的干擾4．制備熒光標記的DNA探針時，需要模板、引物、DNA聚合酶等。在只含大腸桿菌DNA聚合酶、擴增緩沖液、H2O和4種脫氧核苷酸（dCTP、dTTP、dGTP和堿基被熒光標記的dATP）的反應管①～④中，分別加入如表所示的適量單鏈DNA。已知形成的雙鏈DNA區(qū)遵循堿基互補配對原則，且在本實驗的溫度條件下不能產生小于9個連續(xù)堿基對的雙鏈DNA區(qū)。能得到帶有熒光標記的DNA探針的反應管有（）反應管加入的單鏈DNA①5′﹣GCCGATCTTTATA﹣3′3′﹣GACCGGCTAGAAA﹣5′②5′﹣AGAGCCAATTGGC﹣3′③5′﹣ATTTCCCGATCCG﹣3′3′﹣AGGGCTAGGCATA﹣5′④5′﹣TTCACTGGCCAGT﹣3′A．①② B．②③ C．①④ D．③④5．某同學擬用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA連接酶為工具，將目的基因（兩端含相應限制酶的識別序列和切割位點）和質粒進行切割、連接，以構建重組表達載體。限制酶的切割位點如圖所示。下列重組表達載體構建方案合理且效率最高的是（）A．質粒和目的基因都用酶3切割，用E.coliDNA連接酶連接 B．質粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4DNA連接酶連接 C．質粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4DNA連接酶連接 D．質粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.coliDNA連接酶連接6．用氨芐青霉素抗性基因（AmpR）、四環(huán)素抗性基因（TetR）作為標記基因構建的質粒如圖所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的質粒，構建基因表達載體（重組質粒），并轉化到受體菌中。下列敘述錯誤的是（）A．若用HindⅢ酶切，目的基因轉錄的產物可能不同 B．若用PvuⅠ酶切，在含Tet（四環(huán)素）培養(yǎng)基中的菌落，不一定含有目的基因 C．若用SphⅠ酶切，可通過DNA凝膠電泳技術鑒定重組質粒構建成功與否 D．若用SphⅠ酶切，攜帶目的基因的受體菌在含Amp（氨芐青霉素）和Tet的培養(yǎng)基中能形成菌落7．某小組通過PCR（假設引物長度為8個堿基短于實際長度）獲得了含有目的基因的DNA片段，并用限制酶進行酶切（如圖），再用所得片段成功構建了基因表達載體。下列敘述錯誤的是（）A．其中一個引物序列為5'﹣TGCGCAGT﹣3' B．步驟①所用的酶是SpeⅠ和CfoⅠ C．用步驟①的酶對載體進行酶切，至少獲得了2個片段 D．酶切片段和載體連接時，可使用E.coli連接酶或T4連接酶8．抗蟲作物對害蟲的生存產生壓力，會使害蟲種群抗性基因頻率迅速提高，導致作物的抗蟲效果逐漸減弱。為使轉基因抗蟲棉保持抗蟲效果，農業(yè)生產上會采取一系列措施。以下措施不能實現(xiàn)上述目標的是（）A．在轉基因抗蟲棉種子中混入少量常規(guī)種子 B．大面積種植轉基因抗蟲棉，并施用殺蟲劑 C．轉基因抗蟲棉與小面積的常規(guī)棉間隔種植 D．轉基因抗蟲棉大田周圍設置常規(guī)棉隔離帶9．某研究小組利用轉基因技術，將綠色熒光蛋白基因（GFP）整合到野生型小鼠Gata3基因一端，如圖甲所示。實驗得到能正常表達兩種蛋白質的雜合子雌雄小鼠各1只，交配以期獲得Gata3﹣GFP基因純合子小鼠。為了鑒定交配獲得的4只新生小鼠的基因型，設計了引物1和引物2用于PCR擴增，PCR產物電泳結果如圖乙所示。下列敘述正確的是（）A．Gata3基因的啟動子無法控制GFP基因的表達 B．翻譯時先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白 C．2號條帶的小鼠是野生型，4號條帶的小鼠是Gata3﹣GFP基因純合子 D．若用引物1和引物3進行PCR，能更好地區(qū)分雜合子和純合子10．抗蟲和耐除草劑玉米雙抗12﹣5是我國自主研發(fā)的轉基因品種。為給監(jiān)管轉基因生物安全提供依據(jù)，采用PCR方法進行目的基因監(jiān)測，反應程序如圖所示。下列敘述正確的是（）A．預變性過程可促進模板DNA邊解旋邊復制 B．后延伸過程可使目的基因的擴增更加充分 C．延伸過程無需引物參與即可完成半保留復制 D．轉基因品種經檢測含有目的基因后即可上市11．關于“DNA的粗提取與鑒定”實驗，下列說法錯誤的是（）A．過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進行是為了防止DNA降解 B．離心研磨液是為了加速DNA的沉淀 C．在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍色 D．粗提取的DNA中可能含有蛋白質12．關于生物技術的安全與倫理問題在我國相關法規(guī)明令禁止的是（）A．試管動物的培育 B．轉基因食品的生產 C．治療性克隆的研究 D．生物武器的發(fā)展和生產13．以哺乳動物為研究對象的生物技術已獲得了長足的進步。對生物技術應用于人類，在安全與倫理方面有不同的觀點，下列敘述正確的是（）A．試管嬰兒技術應全面禁止 B．治療性克隆不需要監(jiān)控和審查 C．生殖性克隆不存在倫理道德方面的風險 D．我國不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實驗14．下列相關實驗操作正確的是（）A．配制PCR反應體系時，加入等量的4種核糖核苷酸溶液作為擴增原料 B．利用添加核酸染料的凝膠對PCR產物進行電泳后，在紫外燈下觀察結果 C．將配制的酵母培養(yǎng)基煮沸并冷卻后，在酒精燈火焰旁倒平板 D．將接種環(huán)燒紅，迅速蘸取酵母菌液在培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，獲得單菌落15．關于采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產物的實驗，下列敘述正確的是（）A．瓊脂糖凝膠濃度的選擇需考慮待分離DNA片段的大小 B．凝膠載樣緩沖液中指示劑的作用是指示DNA分子的具體位置 C．在同一電場作用下，DNA片段越長，向負極遷移速率越快 D．瓊脂糖凝膠中的DNA分子可在紫光燈下被檢測出來二．解答題（共5小題）16．研究者用以蔗糖為唯一碳源的液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)真菌A的野生型（含NV基因）、突變體（NV基因突變）和轉基因菌株（轉入NV基因），檢測三種菌株NV酶的生成與培養(yǎng)液中的葡萄糖含量，結果如表所示（表中“+”表示有，“—”表示無）。檢測用菌株蔗糖NV酶葡萄糖（培養(yǎng)液中）野生型+++野生型———突變體+——轉基因菌株+++回答下列問題。（1）據(jù)表可推測誘導了NV基因表達。NV酶的作用是。檢測NV酶活性時，需測定的指標是（答出1點即可）。（2）表中突變體由T﹣DNA隨機插入野生型菌株基因組DNA篩選獲得。從野生型與突變體中分別提取基因組DNA作為模板，用與（選填“T﹣DNA”或“NV基因”）配對的引物進行PCR擴增。若突變體擴增片段長度（選填“＞”“＝”或“＜”）野生型擴增片段長度，則表明突變體構建成功，從基因序列分析其原因是。（3）為進一步驗證NV基因的功能，表中的轉基因菌株是將NV基因導入細胞獲得的。在構建NV基因表達載體時，需要添加新的標記基因，原因是。17．學習以下材料，回答（1）～（4）題。篩選組織特異表達的基因篩選組織特異表達的基因，對研究細胞分化和組織、器官的形成機制非常重要?！霸鰪娮硬东@”是篩選組織特異表達基因的一種有效方法。真核生物的基本啟動子位于基因5′端附近，沒有組織特異性，本身不足以啟動基因表達。增強子位于基因上游或下游，與基本啟動子共同組成基因表達的調控序列。基因工程所用表達載體中的啟動子，實際上包含增強子和基本啟動子。很多增強子具有組織特異的活性，它們與特定蛋白結合后激活基本啟動子，驅動相應基因在特定組織中表達（圖A）?；谏鲜稣{控機理，研究者構建了由基本啟動子和報告基因組成的“增強子捕獲載體”（圖B），并轉入受精卵。捕獲載體會隨機插入基因組中，如果插入位點附近存在有活性的增強子，則會激活報告基因的表達（圖C）。獲得了一系列分別在不同組織中特異表達報告基因的個體后，研究者提取每個個體的基因組DNA，通過PCR擴增含有捕獲載體序列的DNA片段。對PCR產物進行測序后，與相應的基因組序列比對，即可確定載體的插入位點，進而鑒定出相應的基因。研究者利用各種遺傳學手段，對篩選得到的基因進行突變、干擾或過表達，檢測個體表型的改變，研究其在細胞分化和個體發(fā)育中的作用，從而揭示組織和器官形成的機理。（1）在個體發(fā)育中，來源相同的細胞在形態(tài)、結構和功能上發(fā)生的過程稱為細胞分化，分化是基因的結果。（2）對文中“增強子”的理解，錯誤的是（單選）。A．增強子是含有特定堿基序列的DNA片段B．增強子、基本啟動子和它們調控的基因位于同一條染色體上C．一個增強子只能作用于一個基本啟動子D．很多增強子在不同組織中的活性不同（3）研究者將增強子捕獲技術應用于斑馬魚，觀察到報告基因在某幼體的心臟中特異表達。鑒定出捕獲載體的插入位點后，發(fā)現(xiàn)位點附近有兩個基因G和H，為了確定這兩個基因是否為心臟特異表達的基因，應檢測。（4）真核生物編碼蛋白的序列只占基因組的很少部分，因而在絕大多數(shù)表達報告基因的個體中，增強子捕獲載體的插入位點位于基因外部，不會造成基因突變。研究者對圖B所示載體進行了改造，期望改造后的載體隨機插入基因組后，在“捕獲”增強子的同時，也造成該增強子所調控的基因發(fā)生突變，以研究基因功能。請畫圖表示改造后的載體，并標出各部分名稱（略）。18．新城疫病毒可引起家禽急性敗血性傳染病，我國科學家將該病毒相關基因改造為r2HN，使其在水稻胚乳特異表達，制備獲得r2HN疫苗，并對其免疫效果進行了檢測?；卮鹣铝袉栴}：（1）實驗所用載體的部分結構及其限制酶識別位點如圖1所示。其中GtP為啟動子，若使r2HN僅在水稻胚乳表達，GtP應為啟動子。Nos為終止子，其作用為。r2HN基因內部不含載體的限制酶識別位點。因此，可選擇限制酶和對r2HN基因與載體進行酶切，用于表達載體的構建。（2）利用方法將r2HN基因導入水稻愈傷組織。為檢測r2HN表達情況，可通過PCR技術檢測，通過技術檢測是否翻譯出r2HN蛋白。（3）獲得轉基因植株后，通常選擇單一位點插入目的基因的植株進行研究。此類植株自交一代后，r2HN純合體植株的占比為。選擇純合體進行后續(xù)研究的原因是。（4）制備r2HN疫苗后，為研究其免疫效果，對實驗組雞進行接種，對照組注射疫苗溶劑。檢測兩組雞體內抗新城疫病毒抗體水平和特異應答的CD8+T細胞（細胞毒性T細胞）水平，結果如圖2所示。據(jù)此分析，獲得的r2HN疫苗能夠成功激活雞的免疫和免疫。（5）利用水稻作為生物反應器生產r2HN疫苗的優(yōu)點是。（答出兩點即可）19．研究發(fā)現(xiàn)基因L能夠通過脫落酸信號途徑調控大豆的逆境響應。利用基因工程技術編輯基因L，可培育耐鹽堿大豆品系。在載體上的限制酶BsaⅠ切點處插入大豆基因L的向導DNA序列，將載體導入大豆細胞后，其轉錄產物可引導核酸酶特異性結合基因組上的目標序列并發(fā)揮作用。載體信息、目標基因L部分序列及相關結果等如圖所示。（1）用PCR技術從大豆基因組DNA中擴增目標基因L時，所用的引物越短，引物特異性越（填“高”或“低”）。限制酶在切開DNA雙鏈時，形成的單鏈突出末端為黏性末端，若用BsaⅠ酶切大豆基因組DNA，理論上可產生的黏性末端最多有種。載體信息如圖甲所示，經BsaⅠ酶切后，載體上保留的黏性末端序列應為5′﹣﹣3′和5′﹣﹣3′。（2）重組載體通過農桿菌導入大豆細胞，使用抗生素篩選到具有該抗生素抗性的植株①～④。為了鑒定基因編輯是否成功，以上述抗性植株的DNA為模板，通過PCR擴增目標基因L，部分序列信息及可選用的酶切位點如圖乙所示，PCR產物完全酶切后的電泳結果如圖丙所示。據(jù)圖可判斷選用的限制酶是，其中純合的突變植株是（填序號）。（3）實驗中獲得1株基因L成功突變的純合植株，該植株具有抗生素抗性，檢測發(fā)現(xiàn)其體細胞中只有1條染色體有T﹣DNA插入。用抗生素篩選這個植株的自交子代，其中突變位點純合且對抗生素敏感的植株所占比例為，篩選出的敏感植株可用于后續(xù)的品種選育。20．將天然Ti質粒改造成含有Vir基因的輔助質粒（輔助T﹣DNA轉移）和不含有Vir基因、含有T﹣DNA的穿梭質粒，共同轉入農桿菌，可提高轉化效率。細菌和棉花對密碼子偏好不同，為提高翻譯效率，增強棉花抗病蟲害能力，進行如下操作?；卮鹣铝袉栴}。注：F1﹣F3，R1﹣R3表示引物；T﹣DNA﹣LB表示左邊界；T﹣DNA﹣RB表示右邊界；Ori表示復制原點；KanR表示卡那霉素抗性基因；HygBR表示潮霉素B抗性基因。（1）從蘇云金桿菌提取DNA時，需加入蛋白酶，其作用是。提取過程中加入體積分數(shù)為95%的預冷酒精，其目的是。（2）本操作中獲取目的基因的方法是和。（3）穿梭質粒中p35s為啟動子，其作用是，驅動目的基因轉錄；插入兩個p35s啟動子，其目的可能是。（4）根據(jù)圖中穿梭質粒上的KanR和HygBR兩個標記基因的位置，用基因對應的抗生素初步篩選轉化的棉花愈傷組織。（5）為檢測棉花植株是否導入目的基因，提取棉花植株染色體DNA作模板，進行PCR，應選用的引物是和。（6）本研究采用的部分生物技術屬于蛋白質工程，理由是（單選）。A.通過含有雙質粒的農桿菌轉化棉花細胞B.將蘇云金桿菌Bt基因導入棉花細胞中表達C.將1﹣1362基因序列改變?yōu)槊藁毎妹艽a子的基因序列D.用1﹣1362合成基因序列和1363﹣1848天然基因序列獲得改造的抗蟲蛋白

2025年高考生物一輪復習之基因工程參考答案與試題解析一．選擇題（共15小題）1．γ﹣氨基丁酸在醫(yī)藥等領域有重要的應用價值。利用L﹣谷氨酸脫羧酶（GadB）催化L﹣谷氨酸脫羧是高效生產γ﹣氨基丁酸的重要途徑之一。研究人員采用如圖方法將釀酒酵母S的L﹣谷氨酸脫羧酶基因（gadB）導入生產菌株E.coliA，構建了以L﹣谷氨酸鈉為底物高效生產γ﹣氨基丁酸的菌株E.coliB。下列敘述正確的是（）A．上圖表明，可以從釀酒酵母S中分離得到目的基因gadB B．E.coliB發(fā)酵生產γ﹣氨基丁酸時，L﹣谷氨酸鈉的作用是供能 C．E.coliA和E.coliB都能高效降解γ﹣氨基丁酸 D．可以用其他酶替代NcoⅠ和KpnⅠ構建重組質?！究键c】基因工程在農牧、醫(yī)療、食品等方面的應用．【專題】模式圖；基因工程．【答案】A【分析】基因工程技術的基本步驟：1、目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術擴增和人工合成。2、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。3、將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——PCR檢測等技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA——PCR檢測等技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質——抗原—抗體雜交技術。（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！窘獯稹拷猓篈、根據(jù)圖示可知，運用PCR技術可以從釀酒酵母S中分離得到目的基因gadB，A正確；B、L﹣谷氨酸脫羧酶（GadB）催化L﹣谷氨酸脫羧是高效生產γ﹣氨基丁酸，E.coliB中表達L﹣谷氨酸脫羧酶（GadB），從而發(fā)酵生產γ﹣氨基丁酸，該過程中L﹣谷氨酸鈉是反應原料，而非起供能作用，B錯誤；C、題干中E.coliA和E.coliB均為產生γ﹣氨基丁酸的菌種，而不是高效降解γ﹣氨基丁酸的菌種，C錯誤；D、根據(jù)圖示，利用NcoⅠ和KpnⅠ對質粒和目的基因進行雙酶切，從而構建重組質粒，不一定可以用其他酶替代NcoⅠ和KpnⅠ構建重組質粒（視質粒和目的基因所在DNA分子中酶切位點的情況而定），D錯誤。故選：A?！军c評】本題考查基因工程的相關知識，要求考生理解識記有關技術的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能將教材中的知識結合題中信息進行遷移應用。2．下列關于“DNA粗提取與鑒定”實驗的敘述，錯誤的是（）A．實驗中如果將研磨液更換為蒸餾水，DNA提取的效率會降低 B．利用DNA和蛋白質在酒精中的溶解度差異，可初步分離DNA C．DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同，該原理可用于純化DNA粗提物 D．將溶解的DNA粗提物與二苯胺試劑反應，可檢測溶液中是否含有蛋白質雜質【考點】DNA的粗提取與鑒定．【專題】正推法；基因工程．【答案】D【分析】DNA粗提取和鑒定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但細胞中的某些蛋白質溶于酒精；DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性。（2）DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍色?！窘獯稹拷猓篈、研磨液加入了NaCl溶液，有利于DNA的溶解，換為蒸餾水，DNA提取的效率會降低，A正確；B、DNA不溶于酒精溶液，但細胞中的某些蛋白質溶于酒精，因此，利用DNA和蛋白質在酒精中的溶解度差異，可初步分離DNA，B正確；C、DNA在NaCl溶液中的溶解度隨著NaCl濃度的變化而改變，因此可用不同濃度的NaCl溶液對DNA進行粗提取，C正確；D、在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍色，二苯胺試劑用于鑒定DNA，D錯誤。故選：D?！军c評】本題考查DNA的粗提取與鑒定的相關知識，意在考查考生理解所學知識的要點，把握知識間的內在聯(lián)系的能力。3．關于“DNA的粗提取與鑒定”實驗，下列說法正確的是（）A．整個提取過程中可以不使用離心機 B．研磨液在4℃冰箱中放置幾分鐘后，應充分搖勻再倒入燒杯中 C．鑒定過程中DNA雙螺旋結構不發(fā)生改變 D．僅設置一個對照組不能排除二苯胺加熱后可能變藍的干擾【考點】DNA的粗提取與鑒定．【專題】實驗基本操作；基因工程．【答案】A【分析】DNA的粗提取與鑒定的實驗原理是：①DNA的溶解性，DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度的氯化鈉溶液中的溶解度不同，利用這一特點可以選擇適當濃度的鹽溶液可以將DNA溶解或析出，從而達到分離的目的；②DNA不溶于酒精溶液，細胞中的某些蛋白質可以溶解于酒精，利用這一原理可以將蛋白質和DNA進一步分離；③在沸水浴的條件下DNA遇二苯胺會呈現(xiàn)藍色。【解答】解：A、研磨后，可以用過濾的方法得到上清液，可以不使用離心機，A正確；B、研磨液在4℃冰箱中放置的目的是為了獲得上清液，不應再充分搖勻，B錯誤；C、鑒定過程中的沸水浴加熱可能使DNA雙螺旋結構發(fā)生改變，C錯誤；D、該實驗中，為排除二苯胺加熱后可能變藍對實驗結果的干擾，設置加二苯胺不加DNA一個對照組即可，D錯誤。故選：A。【點評】本題考查“DNA的粗提取和鑒定”的相關知識，意在考查考生的理解能力和實驗與探究能力，進一步考查生命觀念、科學思維和科學探究等核心素養(yǎng)。4．制備熒光標記的DNA探針時，需要模板、引物、DNA聚合酶等。在只含大腸桿菌DNA聚合酶、擴增緩沖液、H2O和4種脫氧核苷酸（dCTP、dTTP、dGTP和堿基被熒光標記的dATP）的反應管①～④中，分別加入如表所示的適量單鏈DNA。已知形成的雙鏈DNA區(qū)遵循堿基互補配對原則，且在本實驗的溫度條件下不能產生小于9個連續(xù)堿基對的雙鏈DNA區(qū)。能得到帶有熒光標記的DNA探針的反應管有（）反應管加入的單鏈DNA①5′﹣GCCGATCTTTATA﹣3′3′﹣GACCGGCTAGAAA﹣5′②5′﹣AGAGCCAATTGGC﹣3′③5′﹣ATTTCCCGATCCG﹣3′3′﹣AGGGCTAGGCATA﹣5′④5′﹣TTCACTGGCCAGT﹣3′A．①② B．②③ C．①④ D．③④【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．【專題】對比分析法；PCR技術．【答案】D【分析】多聚酶鏈式反應擴增DNA片段：1、PCR原理：目的基因DNA受熱變性后解為單鏈，引物與單鏈相應互補序列結合；然后以單鏈DNA為模板，在DNA聚合酶作用下進行延伸，即將4種脫氧核苷酸加到引物的3'端，如此重復循環(huán)多次。由于延伸后得到的產物又可以作為下一個循環(huán)的模板，因而每一次循環(huán)后目的基因的量可以增加一倍，即呈指數(shù)形式擴增（約為2n，其中n為擴增循環(huán)的次數(shù)）。2、PCR反應過程是：變性→復性→延伸。3、結果：上述三步反應完成后，一個DNA分子就變成了兩個DNA分子，隨著重復次數(shù)的增多，DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反應過程都是在PCR擴增儀中完成的?！窘獯稹拷猓篈BCD、分析反應管①～④中分別加入的適量單鏈DNA可知，①中兩條單鏈DNA分子之間具有互補的序列，但雙鏈DNA區(qū)之外的3'端無模板，因此無法進行DNA合成，不能得到帶有熒光標記的DNA探針；②中單鏈DNA分子內具有自身互補的序列，由于在本實驗的溫度條件下不能產生小于9個連續(xù)堿基對的雙鏈DNA區(qū)，故一條單鏈DNA分子不發(fā)生自身環(huán)化，但兩條鏈可以形成雙鏈DNA區(qū)，由于DNA合成的鏈中不含堿基A，不能得到帶有熒光標記的DNA探針；③中兩條單鏈DNA分子之間具有互補的序列，且雙鏈DNA區(qū)之外的3'端有模板和堿基T，因此進行DNA合成能得到帶有熒光標記的DNA探針；④中單鏈DNA分子內具有自身互補的序列，一條單鏈DNA分子不發(fā)生自身環(huán)化，兩條鏈可以形成雙鏈DNA區(qū)，且雙鏈DNA區(qū)之外的3'端有模板和堿基T，因此進行DNA合成能得到帶有熒光標記的DNA探針。綜上，能得到帶有熒光標記的DNA探針的反應管有：③④。故選：D?！军c評】本題考查PCR的相關知識，意在考查考生的理解能力、獲取信息的能力和綜合運用能力，進一步考查生命觀念和科學思維。5．某同學擬用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA連接酶為工具，將目的基因（兩端含相應限制酶的識別序列和切割位點）和質粒進行切割、連接，以構建重組表達載體。限制酶的切割位點如圖所示。下列重組表達載體構建方案合理且效率最高的是（）A．質粒和目的基因都用酶3切割，用E.coliDNA連接酶連接 B．質粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4DNA連接酶連接 C．質粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4DNA連接酶連接 D．質粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.coliDNA連接酶連接【考點】基因表達載體的構建．【專題】正推法；基因工程．【答案】C【分析】限制酶選擇原則：（1）根據(jù)目的基因兩端的限制酶識別和切割位點確定限制酶種類具體原則：應選擇切點位于目的基因兩端的，不能位于目的基因內部，防止破壞目的基因，同時為避免目的基因和質粒自身環(huán)化或反向連接，可使用不同的限制酶切割目的基因和質粒。（2）根據(jù)質粒特點確定限制酶種類具體原則：①保證切割的黏性末端與目的基因的相同，以便兩者能夠連接。②保證切割后的質粒至少保留一個標記基因，以便進行篩選；保留復制原點，以便在受體細胞中維持穩(wěn)定和表達?！窘獯稹拷猓篈、限制酶3切割后的末端是平末端，E.coliDNA連接酶連接的是黏性末端應用T4DNA連接酶連接，A錯誤；B、據(jù)圖可知，限制酶3切割后的末端是平末端，而限制酶1切割后的末端是黏性末端，若用兩種酶分別切割質粒和目的基因，會導致DNA連接酶無法連接，B錯誤；C、質粒和目的基因都用酶1和酶2切割，可避免目的基因和質粒的自身環(huán)化和反向連接，且兩者均形成黏性末端，此后再用T4DNA連接酶連接，可構建重組表達載體，效率較高，C正確；D、限制酶4會破壞質粒上的標記基因（抗生素抗性基因），故不能選擇該酶進行切割，D錯誤。故選：C?！军c評】本題考查限制酶及基因表達載體構建的相關知識，意在考查學生的理解能力和判斷能力，運用所學知識綜合分析問題的能力是解答本題的關鍵。6．用氨芐青霉素抗性基因（AmpR）、四環(huán)素抗性基因（TetR）作為標記基因構建的質粒如圖所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的質粒，構建基因表達載體（重組質粒），并轉化到受體菌中。下列敘述錯誤的是（）A．若用HindⅢ酶切，目的基因轉錄的產物可能不同 B．若用PvuⅠ酶切，在含Tet（四環(huán)素）培養(yǎng)基中的菌落，不一定含有目的基因 C．若用SphⅠ酶切，可通過DNA凝膠電泳技術鑒定重組質粒構建成功與否 D．若用SphⅠ酶切，攜帶目的基因的受體菌在含Amp（氨芐青霉素）和Tet的培養(yǎng)基中能形成菌落【考點】基因表達載體的構建．【專題】模式圖；基因工程．【答案】D【分析】據(jù)圖分析可知，氨芐青霉素抗性基因（AmpR）內含有ScaⅠ和PvuⅠ的酶切位點，四環(huán)素抗性基因（TetR）內含有HindⅢ、SphⅠ和SalⅠ的酶切位點。【解答】解：A、若只用HindⅢ一種酶切質粒和目的基因，則產生相同的黏性末端，可能導致目的基因正向連接或反向連接，故目的基因轉錄的產物可能不同，A正確；B、若用PvuⅠ酶切，則會破壞氨芐青霉素抗性基因（AmpR），而重組質粒和空質粒中都有四環(huán)素抗性基因（TetR），因此在含Tet（四環(huán)素）培養(yǎng)基中的菌落，不一定含有目的基因，B正確；C、若用SphⅠ酶切，則目的基因插入到四環(huán)素抗性基因（TetR）中，重組質粒的大小與空質粒不同，故可通過DNA凝膠電泳技術鑒定重組質粒構建成功與否，C正確；D、若用SphⅠ酶切，則會破壞四環(huán)素抗性基因（TetR），氨芐青霉素抗性基因（AmpR）不受影響，則重組質粒中含氨芐青霉素抗性基因（AmpR），因此攜帶目的基因的受體菌在含Amp（氨芐青霉素）的培養(yǎng)基中能形成菌落，在含Tet的培養(yǎng)基中不能形成菌落，D錯誤。故選：D?！军c評】本題考查基因表達載體的構建過程中限制酶的選擇原則等知識，意在考查考生對知識的理解和應用能力。7．某小組通過PCR（假設引物長度為8個堿基短于實際長度）獲得了含有目的基因的DNA片段，并用限制酶進行酶切（如圖），再用所得片段成功構建了基因表達載體。下列敘述錯誤的是（）A．其中一個引物序列為5'﹣TGCGCAGT﹣3' B．步驟①所用的酶是SpeⅠ和CfoⅠ C．用步驟①的酶對載體進行酶切，至少獲得了2個片段 D．酶切片段和載體連接時，可使用E.coli連接酶或T4連接酶【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．【專題】模式圖；PCR技術．【答案】B【分析】E.coliDNA連接酶只能連接黏性末端；T4DNA連接酶既可連接平末端，又可連接黏性末端?！窘獯稹拷猓篈、由于引物只能引導子鏈從5'到3'，根據(jù)堿基互補配對原則，其中一個引物序列為5'TGCGCAGT﹣3'，A正確；B、根據(jù)三種酶的酶切位點，左側的黏性末端是使用NheI切割形成的，右邊的黏性末端是用CfoI切割形成的，B錯誤；C、用步驟①的酶對載體進行酶切，使用了NheI和CfoI進行切割，根據(jù)他們的識別位點以及原本DNA的序列，切割之后至少獲得了2個片段，C正確；D、圖中形成的是黏性末端，而E.coliDNA連接酶只能連接黏性末端；T4DNA連接酶既可連接平末端，又可連接黏性末端，D正確。故選：B。【點評】本題主要考查的是DNA片段的擴增與電泳鑒定的相關知識，意在考查學生對基礎知識的理解掌握，難度適中。8．抗蟲作物對害蟲的生存產生壓力，會使害蟲種群抗性基因頻率迅速提高，導致作物的抗蟲效果逐漸減弱。為使轉基因抗蟲棉保持抗蟲效果，農業(yè)生產上會采取一系列措施。以下措施不能實現(xiàn)上述目標的是（）A．在轉基因抗蟲棉種子中混入少量常規(guī)種子 B．大面積種植轉基因抗蟲棉，并施用殺蟲劑 C．轉基因抗蟲棉與小面積的常規(guī)棉間隔種植 D．轉基因抗蟲棉大田周圍設置常規(guī)棉隔離帶【考點】基因工程在農牧、醫(yī)療、食品等方面的應用．【答案】B【分析】轉基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應、過敏源、營養(yǎng)成分改變）、生物安全（對生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響），對待轉基因技術的利弊，正確的做法應該是趨利避害，不能因噎廢食。【解答】解：A、在轉基因抗蟲棉種子中混入少量常規(guī)種子，則常規(guī)種子長成的普通植株能為敏感性（不抗蟲）個體提供生存空間，增加與抗蟲個體的競爭，避免抗性基因頻率升高過快，提高了抗蟲棉的抗蟲持久性，A正確；B、大面積種植轉基因抗蟲棉、施用殺蟲劑，都會進一步選擇并保存抗性強的個體，導致敏感性個體死亡，從而加快害蟲種群抗性基因頻率提高，不利于抗蟲棉的抗蟲持久性，B錯誤；CD、將轉基因抗蟲棉與小面積的常規(guī)棉間隔種植以及轉基因抗蟲棉大田周圍設置常規(guī)棉隔離帶，作用機理相似：可以使敏感型個體存活，敏感性個體能與抗性強的棉鈴蟲進行競爭，不會導致抗性基因頻率升高過快，提高了抗蟲棉的抗蟲持久性，CD正確。故選：B。【點評】本題主要以抗蟲棉抗蟲效果的保持為情境，考查轉基因作物的安全性問題，要求考生明確相關內容，能結合題意分析作答。9．某研究小組利用轉基因技術，將綠色熒光蛋白基因（GFP）整合到野生型小鼠Gata3基因一端，如圖甲所示。實驗得到能正常表達兩種蛋白質的雜合子雌雄小鼠各1只，交配以期獲得Gata3﹣GFP基因純合子小鼠。為了鑒定交配獲得的4只新生小鼠的基因型，設計了引物1和引物2用于PCR擴增，PCR產物電泳結果如圖乙所示。下列敘述正確的是（）A．Gata3基因的啟動子無法控制GFP基因的表達 B．翻譯時先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白 C．2號條帶的小鼠是野生型，4號條帶的小鼠是Gata3﹣GFP基因純合子 D．若用引物1和引物3進行PCR，能更好地區(qū)分雜合子和純合子【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．【專題】模式圖；基因工程．【答案】B【分析】1、PCR技術是聚合酶鏈式反應的縮寫，是一項根據(jù)DNA半保留復制的原理，在體外提供參與DNA復制的各種組分與反應條件，對目的基因的核苷酸序列進行大量復制的技術。2、PCR技術需要的條件：目的基因、引物、四種脫氧核苷酸、耐高溫DNA聚合酶?！窘獯稹拷猓篈、分析圖中可知，啟動子在編碼區(qū)的左側，GFP基因整合Gata3基因的右側，啟動子啟動轉錄后，可以在Gata3基因轉錄后，使GFP基因轉錄，Gata3基因的啟動子也能控制GFP基因的表達，A錯誤；B、基因的轉錄和翻譯均是從5′→3′，因啟動子在左側，轉錄和翻譯方向均為從左向右，Gata3蛋白在GFP蛋白的左側，所以翻譯時先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白，B正確；C、整合GFP基因后，核酸片段變長，2號個體只有大片段，所以是Gata3﹣GFP基因純合子，4號個體只有小片段，是野生型，C錯誤；D、若用引物1和引物3進行PCR，雜合子和Gata3﹣GFP基因純合子都能擴增出相應的片段則不能區(qū)分雜合子和純合子，D錯誤；故選：B?！军c評】本題主要考查PCR和基因表達的相關內容，需要學生理解掌握PCR和基因表達的過程，并具有一定的識圖能力，屬于理解應用層次的考查。10．抗蟲和耐除草劑玉米雙抗12﹣5是我國自主研發(fā)的轉基因品種。為給監(jiān)管轉基因生物安全提供依據(jù)，采用PCR方法進行目的基因監(jiān)測，反應程序如圖所示。下列敘述正確的是（）A．預變性過程可促進模板DNA邊解旋邊復制 B．后延伸過程可使目的基因的擴增更加充分 C．延伸過程無需引物參與即可完成半保留復制 D．轉基因品種經檢測含有目的基因后即可上市【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定；轉基因食品的安全性．【專題】坐標曲線圖；基因工程；生物技術的安全性和倫理問題．【答案】B【分析】PCR技術：1、概念：PCR全稱為聚合酶鏈式反應，是一項在生物體外復制特定DNA的核酸合成技術。2、原理：DNA復制。3、前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物。4、條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。5、過程：①高溫變性：DNA解旋過程（PCR擴增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開）；②低溫復性：引物結合到互補鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈?！窘獯稹拷猓篈、預變性過程可促進模板DNA解旋，沒有促進復制，A錯誤；B、后延伸過程可使目的基因的擴增更加充分，B正確；C、延伸過程仍需引物參與才能完成半保留復制，C錯誤；D、轉基因品種經檢測含有目的基因并能穩(wěn)定表達，且有生物活性后才能上市，D錯誤。故選：B?！军c評】本題考查PCR技術的相關知識，要求考生識記PCR技術的概念、原理、條件、過程等基礎知識，能結合所學的知識準確判斷各選項。11．關于“DNA的粗提取與鑒定”實驗，下列說法錯誤的是（）A．過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進行是為了防止DNA降解 B．離心研磨液是為了加速DNA的沉淀 C．在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍色 D．粗提取的DNA中可能含有蛋白質【考點】DNA的粗提取與鑒定．【專題】正推法；從生物材料提取特定成分．【答案】B【分析】DNA粗提取和鑒定的原理：1、DNA的溶解性：DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但細胞中的某些蛋白質溶于酒精。2、DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性不同。3、DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍色?！窘獯稹拷猓篈、過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進行可以使酶的活性降低，可以防止DNA降解，A正確；B、離心研磨液是為了加速細胞膜、細胞器、一些較大雜質等的沉淀，B錯誤；C、在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍色，C正確；D、粗提取的DNA中可能含有蛋白質，D正確。故選：B。【點評】本題考查DNA的粗提取和鑒定，對于此類試題，需要考生注意的細節(jié)較多，如實驗的原理、實驗材料、實驗現(xiàn)象等，需要考生在平時的學習過程中注意積累。12．關于生物技術的安全與倫理問題在我國相關法規(guī)明令禁止的是（）A．試管動物的培育 B．轉基因食品的生產 C．治療性克隆的研究 D．生物武器的發(fā)展和生產【考點】轉基因食品的安全性；生物技術引發(fā)的倫理問題；生物武器對人類的威脅．【專題】正推法；生物技術的安全性和倫理問題．【答案】D【分析】轉基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應、過敏源、營養(yǎng)成分改變）、生物安全（對生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。對待轉基因技術的利弊，正確的做法應該是趨利避害，不能因噎廢食。【解答】解：A、試管動物的培育可用于培育優(yōu)良動物、用于解決不孕不育等問題，不屬于我國明令禁止的項目，A不符合題意；B、轉基因食品的生產雖然具有一定的爭議，但不屬于我國明令禁止的項目，B不符合題意；C、治療性克隆可用于疾病的治療，不屬于我國明令禁止的項目，C不符合題意；D、生物武器危害性大，為了國家安全，應在任何情況下不發(fā)展、不生產、不儲存生物武器，并反對生物武器及其技術和設備的擴散，D符合題意。故選：D?！军c評】本題主要考查生物技術安全性與倫理性，考生識記相關知識即可分析作答，屬于識記與辨識能力的考查。13．以哺乳動物為研究對象的生物技術已獲得了長足的進步。對生物技術應用于人類，在安全與倫理方面有不同的觀點，下列敘述正確的是（）A．試管嬰兒技術應全面禁止 B．治療性克隆不需要監(jiān)控和審查 C．生殖性克隆不存在倫理道德方面的風險 D．我國不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實驗【考點】生物技術引發(fā)的倫理問題．【專題】生物技術的安全性和倫理問題．【答案】D【分析】1、生殖性克隆是指通過克隆技術產生獨立生存的新個體。2、治療性克隆是指利用克隆技術產生特定的細胞、組織和器官，用它們來修復或替代受損的細胞、組織和器官，從而達到治療疾病的目的?！窘獯稹拷猓篈、試管嬰兒技術必須獲得政府部門的相關批準證書，以防該技術的濫用，但不是全面禁止，A錯誤；B、治療性克隆需在有效監(jiān)控和嚴格審查下實施，B錯誤；C、生殖性克隆人沖擊了現(xiàn)有的一些有關婚姻、家庭和兩性關系的倫理道德觀念，存在倫理道德方面的風險，C錯誤；D、我國政府對生殖性克隆的態(tài)度是：不贊成、不允許、不支持、不接受，D正確。故選：D?！军c評】本題考查生物技術引發(fā)的倫理問題，比較基礎，只要考生識記我國政府對相關技術的態(tài)度即可正確答題，屬于考綱識記層次的考查。14．下列相關實驗操作正確的是（）A．配制PCR反應體系時，加入等量的4種核糖核苷酸溶液作為擴增原料 B．利用添加核酸染料的凝膠對PCR產物進行電泳后，在紫外燈下觀察結果 C．將配制的酵母培養(yǎng)基煮沸并冷卻后，在酒精燈火焰旁倒平板 D．將接種環(huán)燒紅，迅速蘸取酵母菌液在培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，獲得單菌落【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定；微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）．【專題】微生物的分離、培養(yǎng)和應用；基因工程．【答案】B【分析】PCR技術反應的條件：①穩(wěn)定的緩沖溶液環(huán)境；②DNA模板；③2種引物；④四種脫氧核苷酸；⑤耐高溫的DNA聚合酶等?！窘獯稹拷猓篈、PCR的原理是DNA復制，DNA的單體是脫氧核糖核苷酸，配制PCR反應體系時，加入4種脫氧核糖核苷酸的等量混合液作為擴增原料，A錯誤；B、瓊脂糖凝膠制備中加入的核酸染料能與DNA分子結合，凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波長為300nm的紫外燈下被檢測出來，B正確；C、將配制的酵母培養(yǎng)基高溫滅菌并冷卻到不燙手（50℃左右）后，在酒精燈火焰旁倒平板，C錯誤；D、將接種環(huán)燒紅，待冷卻后（避免菌種被燙死），蘸取酵母菌液在培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，獲得單菌落，D錯誤。故選：B?！军c評】本題考查DNA片段的擴增與電泳鑒定、微生物的培養(yǎng)等相關知識，意在考查學生的識記能力和判斷能力，運用所學知識綜合分析問題的能力是解答本題的關鍵。15．關于采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產物的實驗，下列敘述正確的是（）A．瓊脂糖凝膠濃度的選擇需考慮待分離DNA片段的大小 B．凝膠載樣緩沖液中指示劑的作用是指示DNA分子的具體位置 C．在同一電場作用下，DNA片段越長，向負極遷移速率越快 D．瓊脂糖凝膠中的DNA分子可在紫光燈下被檢測出來【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．【專題】正推法；PCR技術．【答案】A【分析】PCR技術：（1）概念：PCR全稱為聚合酶鏈式反應，是一項在生物體外復制特定DNA的核酸合成技術。（2）原理：DNA雙鏈復制。（3）前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物。（4）條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、ATP、一對引物、耐高溫的DNA聚合酶。（5）過程：高溫變性：DNA解旋過程（PCR擴增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開）；低溫復性：引物結合到互補鏈DNA上；中溫延伸：合成子鏈。【解答】解：A、在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構象等有關，瓊脂糖凝膠濃度的選擇需考慮待分離DNA片段的大小，A正確；B、凝膠載樣緩沖液中指示劑可起標記的作用，是指示DNA分子對應長度所出現(xiàn)位置，B錯誤；C、DNA分子具有可解離的基團，在一定的pH下，這些基團可以帶上正電荷或負電荷，在電場的作用下，這些帶電分子會向著與它所帶電荷相反的電極移動，通常DNA片段越長，遷移速率越慢，C錯誤；D、凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波長為300nm的紫外燈下被檢測出來，D錯誤。故選：A?！军c評】本題考查了PCR技術的相關知識，意在考查考生理解所學知識要點，把握知識間內在聯(lián)系的能力；能運用所學知識，對生物學問題作出準確的判斷，難度適中。二．解答題（共5小題）16．研究者用以蔗糖為唯一碳源的液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)真菌A的野生型（含NV基因）、突變體（NV基因突變）和轉基因菌株（轉入NV基因），檢測三種菌株NV酶的生成與培養(yǎng)液中的葡萄糖含量，結果如表所示（表中“+”表示有，“—”表示無）。檢測用菌株蔗糖NV酶葡萄糖（培養(yǎng)液中）野生型+++野生型———突變體+——轉基因菌株+++回答下列問題。（1）據(jù)表可推測蔗糖誘導了NV基因表達。NV酶的作用是參與蔗糖分解代謝，將蔗糖分解生成葡萄糖。檢測NV酶活性時，需測定的指標是單位時間內葡萄糖的生成量（或蔗糖的減少量等）（答出1點即可）。（2）表中突變體由T﹣DNA隨機插入野生型菌株基因組DNA篩選獲得。從野生型與突變體中分別提取基因組DNA作為模板，用與NV基因（選填“T﹣DNA”或“NV基因”）配對的引物進行PCR擴增。若突變體擴增片段長度＜（選填“＞”“＝”或“＜”）野生型擴增片段長度，則表明突變體構建成功，從基因序列分析其原因是T﹣DNA插入導致NV基因部分序列缺失。（3）為進一步驗證NV基因的功能，表中的轉基因菌株是將NV基因導入突變體細胞獲得的。在構建NV基因表達載體時，需要添加新的標記基因，原因是便于篩選出成功導入NV基因的細胞?！究键c】基因工程的操作過程綜合．【專題】表格數(shù)據(jù)類簡答題；基因工程．【答案】（1）蔗糖；參與蔗糖分解代謝，將蔗糖分解生成葡萄糖；單位時間內葡萄糖的生成量（或蔗糖的減少量等）（2）NV基因；＜；T﹣DNA插入導致NV基因部分序列缺失（3）突變體；便于篩選出成功導入NV基因的細胞【分析】基因工程，又稱基因拼接技術或DNA重組技術，是指按照人們的愿望，進行嚴格的設計，通過體外DNA重組和轉基因等技術，賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產品。【解答】解：（1）根據(jù)表格，野生型菌株加入蔗糖就會合成NV酶，不加就不會合成，推測蔗糖誘導了NV基因表達。分析表可知有NV酶，菌株就能將蔗糖分解出葡萄糖，因此NV酶可能參與蔗糖的分解代謝過程，將蔗糖分解生成葡萄糖。檢測NV酶活性時，可以測定單位時間內葡萄糖的生成量或蔗糖的減少量等。（2）從題目中可知，突變體是通過T﹣DNA隨機插入野生型菌株基因組DNA篩選獲得的。在進行PCR擴增時，使用的引物需要與特定的DNA序列配對結合，才能啟動DNA的擴增。野生型菌株的基因組DNA中沒有T﹣DNA的插入，所以用NV基因配對的引物進行擴增時，可以擴增出完整的NV基因片段。而突變體由于T﹣DNA的隨機插入，導致NV基因的部分序列發(fā)生了缺失。這樣一來，使用同樣的引物進行擴增時，擴增片段的長度就會小于野生型擴增片段的長度。因此若突變體擴增片段長度＜野生型擴增片段長度，則表明突變體構建成功。從基因序列分析其原因是T﹣DNA插入導致NV基因部分序列缺失。（3）為進一步驗證NV基因的功能，表中的轉基因菌株是將NV基因導入突變體細胞獲得的。突變體由于NV基因發(fā)生突變，無法正常表達NV酶，導致相關生理功能缺失或異常。通過將正常的NV基因導入突變體細胞，如果能夠恢復原本在突變體中缺失或異常的生理功能，就可以有力地證明NV基因確實具有特定的功能。在構建NV基因表達載體時，需要添加新的標記基因，原因是便于篩選出成功導入NV基因的細胞。故答案為：（1）蔗糖；參與蔗糖分解代謝，將蔗糖分解生成葡萄糖；單位時間內葡萄糖的生成量（或蔗糖的減少量等）（2）NV基因；＜；T﹣DNA插入導致NV基因部分序列缺失（3）突變體；便于篩選出成功導入NV基因的細胞【點評】本題考查基因工程的相關知識，意在考查學生的識記能力和判斷能力，具備運用所學知識綜合分析問題的能力是解答本題的關鍵。17．學習以下材料，回答（1）～（4）題。篩選組織特異表達的基因篩選組織特異表達的基因，對研究細胞分化和組織、器官的形成機制非常重要。“增強子捕獲”是篩選組織特異表達基因的一種有效方法。真核生物的基本啟動子位于基因5′端附近，沒有組織特異性，本身不足以啟動基因表達。增強子位于基因上游或下游，與基本啟動子共同組成基因表達的調控序列?；蚬こ趟帽磉_載體中的啟動子，實際上包含增強子和基本啟動子。很多增強子具有組織特異的活性，它們與特定蛋白結合后激活基本啟動子，驅動相應基因在特定組織中表達（圖A）。基于上述調控機理，研究者構建了由基本啟動子和報告基因組成的“增強子捕獲載體”（圖B），并轉入受精卵。捕獲載體會隨機插入基因組中，如果插入位點附近存在有活性的增強子，則會激活報告基因的表達（圖C）。獲得了一系列分別在不同組織中特異表達報告基因的個體后，研究者提取每個個體的基因組DNA，通過PCR擴增含有捕獲載體序列的DNA片段。對PCR產物進行測序后，與相應的基因組序列比對，即可確定載體的插入位點，進而鑒定出相應的基因。研究者利用各種遺傳學手段，對篩選得到的基因進行突變、干擾或過表達，檢測個體表型的改變，研究其在細胞分化和個體發(fā)育中的作用，從而揭示組織和器官形成的機理。（1）在個體發(fā)育中，來源相同的細胞在形態(tài)、結構和功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程稱為細胞分化，分化是基因選擇性表達的結果。（2）對文中“增強子”的理解，錯誤的是C（單選）。A．增強子是含有特定堿基序列的DNA片段B．增強子、基本啟動子和它們調控的基因位于同一條染色體上C．一個增強子只能作用于一個基本啟動子D．很多增強子在不同組織中的活性不同（3）研究者將增強子捕獲技術應用于斑馬魚，觀察到報告基因在某幼體的心臟中特異表達。鑒定出捕獲載體的插入位點后，發(fā)現(xiàn)位點附近有兩個基因G和H，為了確定這兩個基因是否為心臟特異表達的基因，應檢測其他器官細胞中，G和H兩個基因是否轉錄出相應的mRNA或是否翻譯出相應的蛋白質。（4）真核生物編碼蛋白的序列只占基因組的很少部分，因而在絕大多數(shù)表達報告基因的個體中，增強子捕獲載體的插入位點位于基因外部，不會造成基因突變。研究者對圖B所示載體進行了改造，期望改造后的載體隨機插入基因組后，在“捕獲”增強子的同時，也造成該增強子所調控的基因發(fā)生突變，以研究基因功能。請畫圖表示改造后的載體，并標出各部分名稱（略）。【考點】基因工程的操作過程綜合．【專題】圖文信息類簡答題；細胞的分化、衰老和凋亡；基因工程．【答案】（1）穩(wěn)定性差異選擇性表達（2）C（3）其他器官細胞中，G和H兩個基因是否轉錄出相應的mRNA或是否翻譯出相應的蛋白質（4）【分析】基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲取。（2）基因表達載體的構建。（3）將目的基因導入受體細胞。（4）目的基因的檢測與鑒定。【解答】解：（1）細胞分化是指在個體發(fā)育中由一個或一種細胞增殖產生的后代，在形態(tài)、結構和生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程，其實質是基因的選擇性表達。（2）AB、根據(jù)題干信息“增強子位于基因上游或下游，與基本啟動子共同組成基因表達的調控序列”分析，增強子是含有特定堿基序列的DNA片段，增強子、基本啟動子和它們調控的基因位于同一條染色體上，AB正確；C、根據(jù)圖C分析可知，一個增強子可作用于多個基因的基本啟動子，如圖中的報告基因與內源基因，C錯誤；D、根據(jù)題干信息“很多增強子具有組織特異活性”，很多增強子在不同組織中的活性不同，D正確。故選：C。（3）鑒定出捕獲載體的插入位點后，發(fā)現(xiàn)位點附近有兩個基因G和H，若要確定這兩個基因是否為心臟特異表達的基因，可以對其轉錄產物或翻譯產物進行檢測，即通過PCR等技術檢測其他器官細胞中G和H兩個基因是否轉錄出相應的mRNA，或通過抗原—抗體雜交技術檢測是否翻譯出相應的蛋白質。（4）“增強子位于基因上游或下游，與基本啟動子共同組成基因表達的調控序列”，基因工程所用表達載體中的啟動子，包含增強子和基本啟動子。增強子捕獲載體的插入位點位于基因外部，因而不會造成基因突變。當增強子捕獲載體的插入位點位于基因內部，會造成該增強子所調控的基因發(fā)生突變。研究某目的基因的功能，需要將增強子插入到目的基因內部，改造后的載體如圖：。故答案為：（1）穩(wěn)定性差異選擇性表達（2）C（3）其他器官細胞中，G和H兩個基因是否轉錄出相應的mRNA或是否翻譯出相應的蛋白質（4）【點評】本題考查基因工程的相關知識，要求考生理解識記有關技術的原理及操作步驟，還涉及細胞分化的概念等知識內容，要求學生能將教材中的知識結合題中信息進行遷移應用。18．新城疫病毒可引起家禽急性敗血性傳染病，我國科學家將該病毒相關基因改造為r2HN，使其在水稻胚乳特異表達，制備獲得r2HN疫苗，并對其免疫效果進行了檢測?；卮鹣铝袉栴}：（1）實驗所用載體的部分結構及其限制酶識別位點如圖1所示。其中GtP為啟動子，若使r2HN僅在水稻胚乳表達，GtP應為水稻胚乳細胞特異表達的基因的啟動子。Nos為終止子，其作用為終止轉錄。r2HN基因內部不含載體的限制酶識別位點。因此，可選擇限制酶HindⅢ和EcoRⅠ對r2HN基因與載體進行酶切，用于表達載體的構建。（2）利用農桿菌轉化方法將r2HN基因導入水稻愈傷組織。為檢測r2HN表達情況，可通過PCR技術檢測r2HN基因轉錄產生的mRNA，通過抗原—抗體雜交技術檢測是否翻譯出r2HN蛋白。（3）獲得轉基因植株后，通常選擇單一位點插入目的基因的植株進行研究。此類植株自交一代后，r2HN純合體植株的占比為。選擇純合體進行后續(xù)研究的原因是純合體自交后代不發(fā)生性狀分離。（4）制備r2HN疫苗后，為研究其免疫效果，對實驗組雞進行接種，對照組注射疫苗溶劑。檢測兩組雞體內抗新城疫病毒抗體水平和特異應答的CD8+T細胞（細胞毒性T細胞）水平，結果如圖2所示。據(jù)此分析，獲得的r2HN疫苗能夠成功激活雞的體液免疫和細胞免疫。（5）利用水稻作為生物反應器生產r2HN疫苗的優(yōu)點是不受性別的限制、可大量種植、成本低、安全性高。（答出兩點即可）【考點】基因工程的操作過程綜合．【專題】圖像坐標類簡答題；免疫調節(jié)；基因工程．【答案】（1）水稻胚乳細胞特異表達的基因的終止轉錄HindⅢ；EcoRⅠ（2）農桿菌轉化r2HN基因轉錄產生的mRNA抗原—抗體雜交（3）純合體自交后代不發(fā)生性狀分離（4）體液細胞（5）不受性別的限制、可大量種植、成本低、安全性高【分析】基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA——分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質——抗原—抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！窘獯稹拷猓海?）利用水稻細胞培育能表達r2HN的水稻胚乳細胞生物反應器，需要使用在水稻胚乳細胞中特異性表達的基因的啟動子。Nos為終止子，終止子所起作用為終止轉錄。r2HN基因內部不含載體的限制酶識別位點，KpnⅠ會破壞啟動子序列，因而不能選用；SacⅠ位于終止子序列之外，因而不能選用。故為了將目的基因插入到載體的啟動子和終止子之間，需要選用HindⅢ和EcoRⅠ對r2HN基因與載體進行酶切。（2）獲得水稻愈傷組織后，通過農桿菌轉化的方法使目的基因進入水稻細胞。為檢測r2HN表達情況，可通過PCR技術檢測轉錄所產生的相應的mRNA，可從轉基因水稻中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原—抗體雜交檢測是否翻譯出r2HN蛋白。（3）單一位點插入目的基因的植株，相當于雜合子，其自交后代含有r2HN基因的純合子為。由于純合體自交后代不發(fā)生性狀分離，所以選擇純合體進行后續(xù)研究。（4）據(jù)圖可知，實驗組的抗體水平和CD8+T細胞水平都比對照組高，說明通過體液免疫產生了抗體，通過細胞免疫產生了細胞毒性T細胞，即r2HN疫苗能夠成功激活雞的體液免疫和細胞免疫。（5）通過水稻作為生物反應器生產r2HN疫苗具有不受性別的限制、可大量種植、成本低、安全性高等優(yōu)點。故答案為：（1）水稻胚乳細胞特異表達的基因的終止轉錄HindⅢ；EcoRⅠ（2）農桿菌轉化r2HN基因轉錄產生的mRNA抗原—抗體雜交（3）純合體自交后代不發(fā)生性狀分離（4）體液細胞（5）不受性別的限制、可大量種植、成本低、安全性高【點評】本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能將教材中的知識結合題中信息進行遷移應用。19．研究發(fā)現(xiàn)基因L能夠通過脫落酸信號途徑調控大豆的逆境響應。利用基因工程技術編輯基因L，可培育耐鹽堿大豆品系。在載體上的限制酶BsaⅠ切點處插入大豆基因L的向導DNA序列，將載體導入大豆細胞后，其轉錄產物可引導核酸酶特異性結合基因組上的目標序列并發(fā)揮作用。載體信息、目標基因L部分序列及相關結果等如圖所示。（1）用PCR技術從大豆基因組DNA中擴增目標基因L時，所用的引物越短，引物特異性越低（填“高”或“低”）。限制酶在切開DNA雙鏈時，形成的單鏈突出末端為黏性末端，若用BsaⅠ酶切大豆基因組DNA，理論上可產生的黏性末端最多有256種。載體信息如圖甲所示，經BsaⅠ酶切后，載體上保留的黏性末端序列應為5′﹣GTTT﹣3′和5′﹣CAAT﹣3′。（2）重組載體通過農桿菌導入大豆細胞，使用抗生素卡那霉素篩選到具有該抗生素抗性的植株①～④。為了鑒定基因編輯是否成功，以上述抗性植株的DNA為模板，通過PCR擴增目標基因L，部分序列信息及可選用的酶切位點如圖乙所示，PCR產物完全酶切后的電泳結果如圖丙所示。據(jù)圖可判斷選用的限制酶是SacⅠ，其中純合的突變植株是④（填序號）。（3）實驗中獲得1株基因L成功突變的純合植株，該植株具有抗生素抗性，檢測發(fā)現(xiàn)其體細胞中只有1條染色體有T﹣DNA插入。用抗生素篩選這個植株的自交子代，其中突變位點純合且對抗生素敏感的植株所占比例為，篩選出的敏感植株可用于后續(xù)的品種選育。【考點】基因工程的操作過程綜合．【專題】圖文信息類簡答題；PCR技術；基因工程．【答案】（1）低；256；GTTT；CAAT（2）卡那霉素；SacⅠ；④（3）【分析】1、基因工程的基本操作步驟主要有：目的基因的篩選和獲取；基因表達載體的構建；將目的基因導入受體細胞；目的基因的檢測與鑒定。2、PCR技術的原理是DNA復制。PCR技術實際上就是在體外模擬細胞內DNA的復制過程。DNA的復制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能從3'端延伸DNA鏈?！窘獯稹拷猓海?）引物通過堿基互補配對與目標基因結合，若引物越短，可能的結合位點越多，特異性越低。根據(jù)題意，限制酶在切開DNA雙鏈時，形成的單鏈突出末端為黏性末端，由圖中可知，若用BsaⅠ酶切大豆基因組DNA，產生的黏性末端有4個堿基，并且可以是任意堿基，因此理論上可以產生的黏性末端有44＝256種。由載體上的已知序列可知，兩條鏈上都有BsaⅠ酶的識別序列，故經BsaⅠ酶切后，去掉一個片段，剩下的載體兩側各有一個黏性末端，根據(jù)BsaⅠ酶的酶切位點可知，載體上保留的黏性末端序列應為5′﹣GTTT﹣3′和5′﹣CAAT﹣3′。（2）觀察載體信息，T﹣DNA片段內只有抗卡那霉素抗性基因，而且農桿菌侵染植物時，T﹣DNA能整合到宿主細胞的染色體DNA上，隨染色體DNA復制、轉錄、翻譯，因此可以使用卡那霉素篩選到具有該抗生素抗性的植株。觀察目標序列及突變序列，突變后，多了一個SacⅠ的酶切位點，即使用限制酶SacⅠ，在目標序列上沒有酶切位點，電泳后只有一個條帶；在突變序列上有一個酶切位點，酶切后電泳，可以看到兩個條帶，故只看到兩個條帶的電泳結果④表示純合突變植株。（3）用L'表示T﹣DNA插入成功的染色體，則該植株基因型可記為LL'，其自交子代基因型為LL：LL'：L'L'＝1：2：1，其中突變位點純合且對抗生素敏感的植株L'L'占。故答案為：（1）低；256；GTTT；CAAT（2）卡那霉素；SacⅠ；④（3）【點評】本題結合電泳圖考查了PCR及限制酶的特性及功能，還考查了基因工程的應用，旨在考查考生對基因工程相關知識的掌握情況，及對所學知識的理解能力及相互聯(lián)系的能力。20．將天然Ti質粒改造成含有Vir基因的輔助質粒（輔助T﹣DNA轉移）和不含有Vir基因、含有T﹣DNA的穿梭質粒，共同轉入農桿菌，可提高轉化效率。細菌和棉花對密碼子偏好不同，為提高翻譯效率，增強棉花抗病蟲害能力，進行如下操作?；卮鹣铝袉栴}。注：F1﹣F3，R1﹣R3表示引物；T﹣DNA﹣LB表示左邊界；T﹣DNA﹣RB表示右邊界；Ori表示復制原點；KanR表示卡那霉素抗性基因；HygBR表示潮霉素B抗性基因。（1）從蘇云金桿菌提取DNA時，需加入蛋白酶，其作用是水解蘇云金桿菌細胞膜上的蛋白質，使菌體釋放DNA。提取過程中加入體積分數(shù)為95%的預冷酒精，其目的是初步分離DNA和蛋白質。（2）本操作中獲取目的基因的方法是PCR技術和人工合成法。（3）穿梭質粒中p35s為啟動子，其作用是RNA聚合酶識別和結合位點，驅動目的基因轉錄；插入兩個p35s啟動子，其目的可能是促進目的基因更多的轉錄。（4）根據(jù)圖中穿梭質粒上的KanR和HygBR兩個標記基因的位置，用HygBR基因對應的抗生素初步篩選轉化的棉花愈傷組織。（5）為檢測棉花植株是否導入目的基因，提取棉花植株染色體DNA作模板，進行PCR，應選用的引物是F3和R2。（6）本研究采用的部分生物技術屬于蛋白質工程，理由是D（單選）。A.通過含有雙質粒的農桿菌轉化棉花細胞B.將蘇云金桿菌Bt基因導入棉花細胞中表達C.將1﹣1362基因序列改變?yōu)槊藁毎妹艽a子的基因序列D.用1﹣1362合成基因序列和1363﹣1848天然基因序列獲得改造的抗蟲蛋白【考點】基因工程的操作過程綜合．【專題】圖文信息類簡答題；基因工程．【答案】（1）水解蘇云金桿菌細胞膜上的蛋白質，使菌體釋放DNA初步分離DNA和蛋白質（2）PCR技術人工合成法（3）RNA聚合酶識別和結合位點促進目的基因更多的轉錄（4）HygBR（5）F3R2（6）D【分析】基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測與鑒定?！窘獯稹拷猓海?）從蘇云金桿菌提取DNA時，加入蛋白酶的作用是水解蘇云金桿菌細胞膜上的蛋白質，使菌體釋放DNA。由于DNA不溶于酒精，有些蛋白質溶于酒精，提取過程中加入體積分數(shù)為95%的預冷酒精可初步分離DNA和蛋白質。（2）由圖示可知，本操作中獲取目的基因的方法是PCR技術和人工合成法。（3）啟動子作用是RNA聚合酶識別和結合位點，驅動目的基因轉錄；插入兩個p35s啟動子，其目的可能是促進目的基因更多的轉錄。（4）由題干信息可知，T﹣DNA﹣LB表示左邊界；T﹣DNA﹣RB表示右邊界，根據(jù)圖中穿梭質粒上的KanR和HygBR兩個標記基因的位置可知，HygBR基因在T﹣DNA（重組DNA）上，用HygBR基因對應的抗生素初步篩選轉化的棉花愈傷組織。（5）PCR擴增目的基因時，引物應在目的基因的兩端，所以為檢測棉花植株是否導入目的基因，應選用的引物是F3和R2。（6）蛋白質工程合成的蛋白質為自然界中沒有的新蛋白質，本研究中用1﹣1362合成基因序列和1363﹣1848天然基因序列獲得改造的抗蟲蛋白，所以屬于蛋白質工程，D正確。故選：D。.故答案為：（1）水解蘇云金桿菌細胞膜上的蛋白質，使菌體釋放DNA初步分離DNA和蛋白質（2）PCR技術人工合成法（3）RNA聚合酶識別和結合位點促進目的基因更多的轉錄（4）HygBR（5）F3R2（6）D【點評】本題考查了基因工程的相關知識，意在考查考生理解所學知識要點，把握知識間內在聯(lián)系的能力；能運用所學知識，對生物學問題作出準確的判斷，難度適中。

考點卡片1．微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）【知識點的認識】土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)：1．分離菌株的思路（1）自然界中目的菌株的篩選①依據(jù)：根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應的環(huán)境中去尋找。②實例：PCR技術過程中用到的耐高溫的TaqDNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出來的Taq細菌中提取出來的。（2）實驗室中目的菌株的篩選①原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度．pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長。培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。②方法：能合成脲酶的細菌才能分解尿素．配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長的細菌就是能分解尿素的細菌。2．統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法（1）稀釋涂布平板法（間接）①當樣品的稀釋庋足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。②通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推測樣品中大約含有的活菌數(shù)。（2）利用顯微鏡直接計數(shù)3．分解尿素的細菌的鑒定細菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細菌，若指示劑變紅，可確定該種細菌能夠分解尿素。4．實驗流程土壤取樣→樣品的稀釋→將稀釋液涂布到以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上→挑選能生長的菌落→鑒定?！久}方向】自生固氮菌是土壤中能獨立固定空氣中氮氣的細菌，科研人員進行了土壤中自生固氮菌的分離和固氮能力測定的研究，部分實驗流程如圖所示。下列敘述正確的是（）A.培養(yǎng)自生固氮菌時，可用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，接種完成后培養(yǎng)皿應倒置B.該純化培養(yǎng)的方法是稀釋涂布平板法，統(tǒng)計細菌數(shù)量時通常會低于真實值C.步驟①獲取土壤一般來自深層土壤，為防止其他雜菌污染可對獲取土壤滅菌處理D.若④的平板上菌落平均數(shù)為58個，則每克土壤中含有的固氮菌約5.8×105個分析：培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質；分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無機鹽，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因為它們來源于動物原料，含有糖、維生素和有機氮等營養(yǎng)物質。在提供上述幾種主要營養(yǎng)物質的基礎上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對特殊營養(yǎng)物質和氧氣的要求。解答：A、培養(yǎng)自生固氮菌時，一般不需要添加氮源，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基含有氮源，A錯誤；B、該純化培養(yǎng)的方法是稀釋涂布平板法，由于多個細菌連在一起時長出來的是單個菌落，因此統(tǒng)計細菌數(shù)量時通常會低于真實值，B正確；C、步驟①獲取土壤一般來自淺層土壤，對土壤滅菌處理時也殺死了固氮菌，C錯誤；D、10g土壤加到90mL無菌水后，稀釋了10倍，在④中相當于