免疫05-第五章-免疫凝集試驗

臨床免疫學檢驗技術第五章免疫凝集試驗蔣紅梅目錄第一節(jié)免疫凝集試驗的基本原理第二節(jié)直接免疫凝集試驗第三節(jié)間接免疫凝集試驗第四節(jié)抗球蛋白紅細胞免疫凝集試驗第五節(jié)自身紅細胞免疫凝集試驗第六節(jié)免疫凝集試驗的臨床應用第七節(jié)臨床常用免疫凝集試驗試劑方法特點第八節(jié)影響免疫凝集試驗的主要因素第一節(jié)免疫凝集試驗的基本原理重點提示免疫凝集現(xiàn)象的發(fā)生分為兩個階段：抗原抗體特異性結合階段可見的凝集反應階段第二節(jié)直接免疫凝集試驗重點提示直接免疫凝集試驗的概念玻片凝集試驗試管凝集試驗直接免疫凝集試驗直接免疫凝集試驗（directagglutinationtest）：細菌、螺旋體和紅細胞等顆粒抗原，在適當電解質參與下直接與相應抗體結合出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象凝集原agglutinogen凝集素agglutinin玻片凝集試驗：定性試管凝集試驗：半定量第三節(jié)間接免疫凝集試驗重點提示間接免疫凝集試驗的類型正向間接免疫凝集試驗反向間接免疫凝集試驗間接免疫凝集抑制試驗協(xié)同免疫凝集試驗間接免疫血凝試驗顆粒免疫凝集試驗膠乳顆粒凝集試驗明膠顆粒凝集試驗炭顆粒凝集試驗甲苯胺紅顆粒凝集試驗間接免疫凝集試驗的概念間接免疫凝集試驗（indirectagglutination）：將可溶性抗原（或抗體）預先吸附或偶聯(lián)于與免疫無關、大小適當?shù)念w粒性載體表面，使之成為抗原（或抗體）致敏顆粒，然后與相應抗體（或抗原）作用，在適宜電解質存在的條件下，可出現(xiàn)肉眼可見特異性凝集現(xiàn)象。一、間接免疫凝集試驗的類型（一）正向間接免疫凝集試驗：測抗體間接免疫凝集試驗的類型（二）反向間接免疫凝集試驗：測抗原間接免疫凝集試驗的類型（三）間接免疫凝集抑制試驗：可測抗原，也可測抗體間接免疫凝集試驗的類型（四）協(xié)同免疫凝集試驗：測抗原，原理與反向間接免疫凝集試驗相似。所用載體是細胞壁含有A蛋白（SPA）的金黃色葡萄球菌，SPA具有與IgG（IgG3除外）的Fc段結合的特性。二、間接免疫血凝試驗間接免疫血凝試驗：以紅細胞作為載體的間接免疫凝集試驗。用已知抗原或抗體致敏紅細胞，檢測標本中相應的抗體或抗原。根據(jù)紅細胞凝集的程度判斷陽性反應的強弱，以出現(xiàn)明顯凝集的孔為滴度終點。三、顆粒免疫凝集試驗采用不同顆粒作為載體的間接免疫凝集試驗。膠乳顆粒凝集試驗(LAT)：載體為聚苯乙烯膠乳顆粒明膠顆粒凝集試驗(GAT)：載體為明膠顆粒炭顆粒凝集試驗(CAT)：載體為炭粉微粒甲苯胺紅顆粒凝集試驗：載體為甲苯胺紅顆粒第四節(jié)抗球蛋白紅細胞免疫凝集試驗重點提示又稱為Coombs試驗：直接Coombs試驗間接Coombs試驗一、直接Coombs試驗用于檢測結合于紅細胞表面的不完全抗體。二、間接Coombs試驗用于檢測游離在血清中的不完全抗體。第五節(jié)自身紅細胞免疫凝集試驗重點提示自身紅細胞免疫凝集試驗原理自身紅細胞免疫凝集試驗原理抗人O型紅細胞的單克隆抗體。將之與另一種特異性抗體連接成雙功能抗體，可用于檢測標本中相應抗原。注：待檢標本采用受檢者的全血自身紅細胞免疫凝集試驗原理抗人O型紅細胞的單克隆抗體。將之與特異性抗原連接，可用于檢測標本中的相應抗體。注：待檢標本采用受檢者的全血第六節(jié)免疫凝集試驗的臨床應用重點提示直接免疫凝集試驗的臨床應用間接免疫凝集試驗的臨床應用抗原的檢測抗體的檢測一、直接免疫凝集試驗的臨床應用玻片凝集試驗：常作定性檢測。用已知抗體檢測未知的顆粒性抗原，主要用于細菌菌種的鑒定及分型、ABO血型鑒定等。試管凝集試驗：可作為半定量檢測。多用于測定血清中某種特異性抗體的效價，以協(xié)助臨床診斷或供流行病學調查；在用顆粒性抗原免疫動物后，可用該法測定免疫血清中特異性抗體的效價，判定抗體生成情況。二、間接免疫凝集試驗的臨床應用抗原的檢測：用于病原體可溶性抗原的檢測：如乙型肝炎病毒表面抗原，細菌、腺病毒及流感病毒等的抗原鑒定和細菌可溶性產物如外毒素等。用于檢測各種蛋白質成分：如尿液絨毛膜促性腺激素、纖維蛋白原等血漿蛋白成分等。間接免疫凝集試驗的臨床應用抗體的檢測：用于檢測細菌、病毒、螺旋體、寄生蟲等感染后產生的抗體：如抗人類免疫缺陷病毒抗體、抗溶血素O、梅毒螺旋體抗體等。用于檢測自身免疫性疾病的抗體：如類風濕因子、抗DNA抗體和抗甲狀腺蛋白抗體等。用于超敏反應患者的抗體測定：如青霉素抗體、某些花粉抗體等。第七節(jié)臨床常用免疫凝集試驗試劑方法特點重點提示診斷菌液載體顆粒其他一、診斷菌液菌種應使用標準株，制備菌液時需經(jīng)無菌試驗證實細菌確已被殺滅，并采用比濁管比濁調整至所需濃度。二、載體顆粒紅細胞：最常用綿羊、家兔、雞的紅細胞及O型人紅細胞。醛化紅細胞具有較強的吸附蛋白質抗原或抗體的能力，且可長期保存而不溶血。膠乳：聚苯乙烯膠乳顆粒或羧化聚苯乙烯膠乳顆粒。性能穩(wěn)定，保存期長。炭粉粒子甲苯胺紅顆粒......三、其他質控物：標準血清、陽性對照血清、陰性對照血清等試劑盒應2℃～8℃保存，切勿凍存，使用前使試劑接近室溫(23℃～29℃)，搖勻后使用。第八節(jié)影響免疫凝集試驗的主要因素重點提示抗原因素抗血清因素致敏顆粒試劑血清標本試驗條件抗原、抗血清、致敏顆粒試劑和血清標本抗原的種類、數(shù)量、共同抗原決定簇、濃度、稀釋劑、溫育時間等?？贵w的濃度以及非特異性凝集抗體的干擾。未致敏的顆粒不應與實驗血清起反應，致敏所用的抗原或抗體要求純度高，并具有良好的免疫活性。血清標本宜新鮮、無污染、無溶血。試驗條件反應時間：不得少于10分鐘溫度：室溫(23℃～29℃)酸堿度：一般為6～8離子強度：生理鹽水振蕩：混勻后應靜置質量控制措施：必須嚴格按照相應的標準操作程序操作，同時可利用陰陽對照血清、標準抗原和參考血清設立試驗對照進行室內質量控制。本章小結免疫凝集試驗是指顆粒性抗原或覆蓋了可溶性抗原（或抗體）的致敏載體顆粒與相應抗體（或抗原）結合后，在適宜的電解質條件下出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。包括直接免疫凝集試驗、間接免疫凝集試驗等。根據(jù)載體不同有多種試驗類型，如協(xié)同免疫凝集試驗