《食品中禁用水溶性合成色素的測定》

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團體標(biāo)準(zhǔn)

T/GDFDTAECXXXX—XXXX

食品中禁用水溶性合成色素的測定

Determinationofprohibitedwater-solublesyntheticcolourinfood

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XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實施

廣東省食品藥品評審認(rèn)證技術(shù)協(xié)會??發(fā)布

T/GDFDTAECXX—2023

食品中禁用水溶性合成色素的測定

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中32種禁用水溶性合成色素（見附錄A）的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于飲料、糖果、調(diào)味醬、豆制品、熟肉等食品中32種禁用水溶性合成色素的測定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T33087儀器分析用高純水規(guī)格及試驗方法

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4方法原理

試樣經(jīng)甲醇或5%氨水-甲醇溶液提取，提取液經(jīng)氮吹置換溶劑后，經(jīng)C18萃取小管凈化，利用液相色

譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，外標(biāo)法定量。

5試劑和材料

除另有說明，本實驗使用試劑均為分析純，水為GB/T6682中規(guī)定的一級水或GB/T33087中規(guī)定的

高純水。

甲醇（CH4O）：色譜純。

乙酸銨（CH3COONH4）：色譜純。

十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18材料）：粒徑40~60μm。

氨水（NH3·H2O）：含量20%~25%

5%氨水-甲醇溶液：移取5.00ml氨水于100ml容量瓶中，甲醇定容。

10%甲醇水溶液：移取10ml甲醇于100ml容量瓶中，水定容。

標(biāo)準(zhǔn)品：色素標(biāo)準(zhǔn)品見附錄B，純度≥95%，或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

5.8.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（1000mg/L）：分別準(zhǔn)確稱取經(jīng)折算相當(dāng)于50mg（精確到0.1mg）的色素標(biāo)準(zhǔn)品，

置50mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。

5.8.2混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液A組（10mg/L）：根據(jù)附錄A化合物的濃度分組，準(zhǔn)確移取1.00mL的A組色素

單標(biāo)儲備溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。

5.8.3混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液B組（100mg/L）：根據(jù)附錄A化合物的濃度分組，準(zhǔn)確移取1.00mL的A組色

素單標(biāo)儲備溶液于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。

5.8.4混合標(biāo)準(zhǔn)中間液A組（1mg/L）：準(zhǔn)確移取1.00mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液A組于10mL容量瓶中，用甲

醇定容到刻度。

5.8.5混合標(biāo)準(zhǔn)中間液B組（10mg/L）：準(zhǔn)確移取1.00mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液B組于10mL容量瓶中，用

1

T/GDFDTAECXX—2023

甲醇定容到刻度。

5.8.6混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：根據(jù)需要，用10%甲醇水溶液將混合標(biāo)準(zhǔn)中間液稀釋成所需的標(biāo)準(zhǔn)工作溶

液。

6儀器和設(shè)備

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（LC-MS/MS）：配有電噴霧電離源（ESI）。

分析天平：感量為0.1mg、0.01mg。

離心機：轉(zhuǎn)速不低于8000r/min。

超聲波清洗器。

氮吹儀。

7分析步驟

試樣制備

碳酸類飲料加熱或超聲去除二氧化碳。豆制品、熟肉類食物等粉碎機攪碎混勻。

試樣提取

7.2.1固體、半固體試樣

糖果：稱取2.00g（準(zhǔn)確至0.01g）于小燒杯中，加入5ml甲醇，微熱溶解后，溶液轉(zhuǎn)移至10ml比色

管，用甲醇多次洗滌燒杯，洗液合并至比色管，然后定容至刻度。準(zhǔn)確移取2.00mL至含有50mgC18材料

的凈化管中，渦旋1min，在8000r/min下離心5min。取1mL上清液用水稀釋至10mL，過0.22μmPTFE濾膜，

待測。

其他：稱取2.00g（準(zhǔn)確至0.01g）試樣于50mL離心管中，加入10mL5%氨水-甲醇溶液，超聲5min，

在8000r/min下離心5min，重復(fù)提取一遍，合并上清液。準(zhǔn)確移取2.00mL上清液于氮吹儀上氮吹至干，

用2.00mL甲醇復(fù)溶，轉(zhuǎn)移至含有50mgC18材料的凈化管中，渦旋1min，在8000r/min下離心5min。取1mL

上清液用水稀釋至10mL，過0.22μmPTFE濾膜，待測。

7.2.2液體試樣

稱取液體樣品1.00g（準(zhǔn)確至0.01g）于10mL比色管，用甲醇定容至刻度。準(zhǔn)確移取2.00mL至含有

50mgC18材料的凈化管中，渦旋1min，在8000r/min下離心5min。取1mL上清液用水稀釋至10mL，過

0.22μmPTFE濾膜，待測。

每個樣品做2個平行測試，同時做空白測試。

儀器參考條件

7.3.1液相色譜參考條件

a)色譜柱：C18柱，100mm×2.1mm，1.8μm，或同等性能的色譜柱；

b)流動相：A為5mmol/L乙酸銨水溶液，B為甲醇；梯度洗脫條件見表1；

c)柱溫：40℃；

d)進(jìn)樣量：2μL；

e)流速：0.4mL/min。

表1液相色譜梯度洗脫條件

時間（min）流動相A（%）流動相B（%）

0.00982

1.00982

15.00595

18.00595

2

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21.00982

7.3.2質(zhì)譜參考條件

a)離子源類型：電噴霧電離源（ESI）；

b)掃描方式：負(fù)離子電離模式；

c)檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測MRM；

d)毛細(xì)管電壓：-2.5kV；

e)離子源溫度：150℃；

f)脫溶劑氣溫度：500℃

g)脫溶劑氣流速：1000L/h；

h)錐孔氣流速：150L/h；

i)定性離子對、定量離子對、去簇電壓和碰撞能量參見附錄A。

測定法

7.4.1定性測定

在同樣測試條件下，試樣溶液中禁用水溶性合成色素的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)溶液相應(yīng)峰的保留時間相對

偏差在±25%以內(nèi)，且檢測到的相對離子豐度，應(yīng)當(dāng)與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液相對豐度一致。其允許偏差

應(yīng)符合表2的要求。

表2定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差

相對離子豐度/%＞5020～5010～20≤10

允許相對偏差/%±20±25±30±50

7.4.2定量測定

取試樣溶液和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，作單點或多點校準(zhǔn)，以特征離子質(zhì)量色譜峰面積定量，按外標(biāo)法計

算。標(biāo)準(zhǔn)工作液及試樣溶液中的禁用水溶性合成色素響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)。在上述色譜

-質(zhì)譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)溶液特征離子質(zhì)量色譜圖見附錄B。

空白試驗

取空白試樣，除不加標(biāo)準(zhǔn)溶液外，采用相同的測定步驟進(jìn)行平行操作。

8結(jié)果計算和表述

試樣中各色素含量按式（1）計算：

····················································(1)

?

式中：?×?×?

?=?×??×1000

X—樣品中相應(yīng)的色素含量的數(shù)值，單位為毫克每千克（mg/kg）；

CS—標(biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)色素濃度的數(shù)值，單位為納克每毫升（ng/mL）；

A—樣品溶液中相應(yīng)的色素峰面積；

AS—標(biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)的色素峰面積；

V—樣品定容體積，單位為毫升（mL）；

m—樣品質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）。

計算結(jié)果保留2位有效數(shù)字。

9精密度

3

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在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。

10其他

本方法禁用水溶性合成色素的檢出限為0.3mg/kg（A組化合物）、3.0mg/kg（B組化合物）。

4

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A

A

附錄A

（規(guī)范性）

禁用水溶性合成色素的母離子、子離子、去簇電壓、碰撞能量、保留時間和檢出限

禁用水溶性合成色素的母離子、子離子、去簇電壓、碰撞能量、保留時間和檢出限見表A.1。

表A.1禁用水溶性合成色素的母離子、子離子、去簇電壓、碰撞能量、保留時間和檢出限

標(biāo)準(zhǔn)溶定量離子定性離子

序母離子定量離子定性離子去簇電壓保留時間檢出限

中文名稱英文名稱液濃度碰撞電壓碰撞電壓

號(m/z)(m/z)(m/z)(V)(min)(mg/kg)

分組(V)(V)

1酸性紅1Acidred1A組231.4179.2158.13010156.100.3

2酸性紅73Acidred73A組255.0150.7241.31010109.020.3

3酸性橙IIAcidorangeIIA組327.0171.2156.23030309.530.3

4橙黃IVAcidorangeIVA組352.0156.279.92030459.960.3

5甲基橙MethylOrangeA組303.9156.2288.23030308.750.3

6酸性紅52AcidRed52A組557.1433.080.02045409.560.3

7酸性紅87AcidRed87A組642.7518.6440.91025309.340.3

8酸性紅265AcidRed265A組294.6157.2*235.21015108.970.3

9鉻變素2BChromotrope2BA組233.3158.6126.72020156.090.3

10鉻變素2RChromotrope2RA組211.2158.680.01015255.910.3

11酸性紅26AcidRed26A組216.8150.5*143.12015157.610.3

12酸性橙20AcidOrange20A組326.9171.2247.24025208.280.3

二甲苯青

13XyleneCyanolFFA組515.1435.1406.15030358.380.3

FF

14酸性藍(lán)3AcidBlue3A組559.1479.0435.02030459.530.3

15酸性紫34AcidViolet34B組577.1496.9417.140254010.973.0

16酸性黃36Acidyellow36A組352.0156.279.740254510.250.3

17酸性橙10Acidorange10A組202.9150.6145.11010305.100.3

18胭脂紅SXPonceauSXA組217.1170.280.03015208.160.3

19酸性紫9AcidViolet9A組589.2185.2544.150404010.800.3

20堅牢綠Foodgreen3A組381.3170.2340.91040157.950.3

21麗春紅3RPonceau3RA組224.0136.7150.23020158.310.3

PontacylViolet

22滂酰紫6RA組235.7158.6126.74010208.280.3

6R

23熒光素鈉UranineA組331.1286.4285.24020358.230.3

滂酰洋紅Pontacyl

24A組246.4179.1158.11015206.850.3

2BCarmine2B

25酸性黃11AcidYellow11A組357.0237.2207.820203510.190.3

26酸性橙8AcidOrange8A組341.0185.2169.840203510.180.3

27酸性紅71AcidRed71A組269.1136.7209.820251510.490.3

28酸性藍(lán)7AcidBlue7B組667.3560.9481.010404010.253.0

29酸性藍(lán)62AcidBlue62B組399.1316.1225.150354511.473.0

30酸性紫7AcidViolet7A組259.9178.9*158.23013155.720.3

31酸性藍(lán)41Acidblue41B組464.1370.1400.050453510.853.0

32酸性蘭27Acidblue27B組421.180.0341.130352511.033.0

5

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B

B

附錄B

（資料性）

禁用水溶性合成色素的英文中文名稱對照索引

禁用水溶性合成色素的中英文名稱對照索引（按英文字母順序），見表B.1。

表B.1禁用水溶性合成色素的中英文名稱對照索引（按英文字母順序）

附錄中的序

序號A中文名英文名號分子式

號CAS

132酸性蘭27Acidblue276408-51-1C22H17N2NaO5S

214酸性藍(lán)3AcidBlue320262-76-4C27H31N2NaO7S2

331酸性藍(lán)41Acidblue412666-17-3C23H18N3NaO6S

429酸性藍(lán)62AcidBlue624368-56-3C20H20N2O5S

528酸性藍(lán)7AcidBlue73486-30-4C37H35N2NaO6S2

617酸性橙10Acidorange101936-15-8C16H10N2Na2O7S2

712酸性橙20AcidOrange20523-44-4C16H11N2NaO4S

826酸性橙8AcidOrange85850-86-2C17H13N2NaO4S

93酸性橙IIAcidorangeII633-96-5C16H11N2NaO4S

104橙黃IVAcidorangeIV554-73-4C18H14N3NaO3S

111酸性紅1Acidred13734-67-6C18H13N3Na2O8S2

1211酸性紅26AcidRed263761-53-3C18H14N2Na2O7S2

138酸性紅265AcidRed2656358-43-6C24H19N3Na2O9S3

146酸性紅52AcidRed523520-42-1C27H29N2NaO7S2

1527酸性紅71AcidRed716226-76-2C24H18N4Na2O7S2

162酸性紅73Acidred735413-75-2C22H14N4Na2O7S2

177酸性紅87AcidRed8717372-87-1C20H6Br4Na2O5

1815酸性紫34AcidViolet346408-63-5C28H20N2Na2O8S2

1930酸性紫7AcidViolet74321-69-1C20H16N4Na2O9S2

2019酸性紫9AcidViolet96252-76-2C34H25N2NaO6S

2125酸性黃11AcidYellow116359-82-6C16H13N4NaO4S

2216酸性黃36Acidyellow36587-98-4C18H14N3NaO3S

239鉻變素2BChromotrope2B548-80-1C16H9N3Na2O10S2

2410鉻變素2RChromotrope2R4197-07-3C16H10N2Na2O8S2

2520堅牢綠Foodgreen32353-45-9C37H34N2O10S3Na2

265甲基橙MethylOrange547-58-0C14H14N3NaO3S

2721麗春紅3RPonceau3R3564-09-8C19H16N2Na2O7S2

2818胭脂紅SXPonceauSX4548-53-2C18H14N2Na2O7S2

2924滂酰洋紅2BPontacylCarmine2B6625-46-3C19H15N3Na2O9S2

6

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附錄中的序

序號A中文名英文名號分子式

號CAS

3022滂酰紫6RPontacylViolet6R5850-63-5C20H12N2Na2O8S2

3123熒光素鈉Uranine518-47-8C20H10Na2O5

3213二甲苯青FFXyleneCyanolFF2650-17-1C25H27N2NaO6S2

7

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C

C

附錄C

（資料性）

禁用水溶性合成色素定量離子提取流圖

禁用水溶性合成色素定量離子提取流圖（A組：100ng/mL；B組：1000ng/mL），見圖C.1。

2020092108517:MRMof1ChannelES-

6.10231.384>179.155(A013)

1001.26e6

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

20200921085-11.酸性紅122:MRMof3ChannelsES-

9.02255.035>150.709(A014)

1001.59e6

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

202009210852.酸性紅7342:MRMof1ChannelES-

9.53327.007>171.181(A017)

1004.36e7

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

20200921085-13.酸性橙II47:MRMof3ChannelsES-

9.96351.984>156.203(A019)

1009.95e7

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

20200921085-14.橙黃IV33:MRMof3ChannelsES-

8.75303.944>156.221(A020)

1008.19e7

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

5.甲基橙

8

T/GDFDTAECXX—2023

20200921085-169:MRMof3ChannelsES-

9.56557.084>432.974(A023)

1009.27e5

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

20200921085-16.酸性紅5275:MRMof3ChannelsES-

9.34642.672>518.589(A026)

1001.42e6

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

20200921085-17.酸性紅8732:MRMof3ChannelsES-

8.97294.613>235.244(A034)

1001.83e6

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

20200921085-18.酸性紅26518:MRMof3ChannelsES-

6.09233.334>158.583(A036)

1002.03e6

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

20200921085-19.鉻變素2B7:MRMof3ChannelsES-

5.91211.171>158.59(A037)

1006.71e5

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

20200921085-110.鉻變素2R9:MRMof3ChannelsES-

7.61216.766>143.1(A038)

1002.52e5

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

20200921085-111.酸性紅2641:MRMof3ChannelsES-

8.28326.926>171.187(A041)

1001.53e7

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

9

T/GDFDTAECXX—2023

20200921085-112.酸性橙2065:MRMof3ChannelsES-

8.38515.129>435.06(A044)

1001.27e6

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

20200921085-113.二甲苯青FF70:MRMof3ChannelsES-

9.53559.098>479.035(A047)

1001.05e7

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20200921085-114.酸性藍(lán)372:MRMof3ChannelsES-

10.97577.097>496.927(A061)

1003.79e7

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

20200921085-115.酸性紫3446:MRMof3ChannelsES-

9.97351.98>156.187(A064)

1009.60e7

10.25

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

20200921085-116.酸性黃364:MRMof3ChannelsES-

5.10202.918>150.624(A066)

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%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

20200921085-117.酸性橙1010:MRMof3ChannelsES-

8.16217.066>170.237(A071)

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18.胭脂紅SX

10

T/GDFDTAECXX—2023

20200921085-173:MRMof3ChannelsES-

10.80589.233>185.185(A073)

1002.43e6

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20200921085-119.酸性紫954:MRMof3ChannelsES-

7.95